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缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析
被引量:
5
1
作者
陈璐
邓松华
+5 位作者
曹洁
何俊
陈秋莉
蒋少华
廖文婷
潘卫
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期404-410,共7页
目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)HXB2株Tat罗白(长度101个氨基酸)的半胱氨酸富集区(22~37位氨基酸)以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性,并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat(ΔC)蛋白]免疫原性的改变。方法应用...
目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)HXB2株Tat罗白(长度101个氨基酸)的半胱氨酸富集区(22~37位氨基酸)以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性,并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat(ΔC)蛋白]免疫原性的改变。方法应用PCR方法对Tat基因的半胱氨酸富集区(64—111位核苷酸)进行缺失突变,获得其突变体序列[Tat(ΔC)DNA],并构建其重组表达质粒pET-32a-Tat(ΔC)。相同的条件下将pET-32a-Tat(Δc)和pET-32a.Tat质粒转人大肠杆菌B121(DE3)中进行诱导表达及纯化。用pET-32a-Tat(ΔC)融合蛋白免疫家兔制备抗血清,ELISA和Western blot方法对抗血清进行免疫原性分析。结果pET-32a-Tat(ΔC)蛋白在大肠杆菌中的表达水平(7.12mg/m1)明显高于pET-32a-Tat蛋白(1.50mg/m1);pET-32a-Tat蛋白在表达纯化后及25℃和4℃放置7d后均有明显二聚体的产生,而pET-32a-Tat(ΔC)蛋白则未形成二聚体;pET-32a-Tat(Δc)蛋白免疫家兔可诱导产生高滴度的抗体(1:320000),该抗体与Tat(Δc)蛋白、Tat蛋白(1—101AA)及化学合成Tat(1~86AA)蛋白均呈特异性反应。结论缺失HIV-1 Tat蛋白的半胱氨酸富集区可明显提高其原核表达水平和蛋白的稳定性并较好地保留其免疫原性,为HIV-1 Tat疫苗研究提供了一种新型免疫原。
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关键词
人免疫缺陷病毒Ⅰ型
半胱氨酸富集区缺失
TAT蛋白
原文传递
题名
缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析
被引量:
5
1
作者
陈璐
邓松华
曹洁
何俊
陈秋莉
蒋少华
廖文婷
潘卫
机构
第二军医大学微生物教研室
安徽医科大学病理生理学教研室
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期404-410,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(30472050)
上海市科技攻关项目(05dz19317)
文摘
目的删除人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)HXB2株Tat罗白(长度101个氨基酸)的半胱氨酸富集区(22~37位氨基酸)以提高其在大肠杆菌中的表达量因子稳定性,并分析缺失半胱氨酸富集区后的Tat蛋白[Tat(ΔC)蛋白]免疫原性的改变。方法应用PCR方法对Tat基因的半胱氨酸富集区(64—111位核苷酸)进行缺失突变,获得其突变体序列[Tat(ΔC)DNA],并构建其重组表达质粒pET-32a-Tat(ΔC)。相同的条件下将pET-32a-Tat(Δc)和pET-32a.Tat质粒转人大肠杆菌B121(DE3)中进行诱导表达及纯化。用pET-32a-Tat(ΔC)融合蛋白免疫家兔制备抗血清,ELISA和Western blot方法对抗血清进行免疫原性分析。结果pET-32a-Tat(ΔC)蛋白在大肠杆菌中的表达水平(7.12mg/m1)明显高于pET-32a-Tat蛋白(1.50mg/m1);pET-32a-Tat蛋白在表达纯化后及25℃和4℃放置7d后均有明显二聚体的产生,而pET-32a-Tat(ΔC)蛋白则未形成二聚体;pET-32a-Tat(Δc)蛋白免疫家兔可诱导产生高滴度的抗体(1:320000),该抗体与Tat(Δc)蛋白、Tat蛋白(1—101AA)及化学合成Tat(1~86AA)蛋白均呈特异性反应。结论缺失HIV-1 Tat蛋白的半胱氨酸富集区可明显提高其原核表达水平和蛋白的稳定性并较好地保留其免疫原性,为HIV-1 Tat疫苗研究提供了一种新型免疫原。
关键词
人免疫缺陷病毒Ⅰ型
半胱氨酸富集区缺失
TAT蛋白
Keywords
Human immunodeficiency virus type-1
Deletion of cysteine-rich region
Tat protein
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
缺失半胱氨酸富集区的HIV-1 HXB2株Tat蛋白在大肠杆菌中的高效表达及免疫原性分析
陈璐
邓松华
曹洁
何俊
陈秋莉
蒋少华
廖文婷
潘卫
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
原文传递
已选择
0
条
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参考文献
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