扁平苔藓皮损中CD95配体、颗粒酶B和半胱氨酸蛋白水解酶-3的检测及其意义

扁平苔藓是一种常见的累及皮肤和黏膜的慢性炎症性疾病，组织病理表现为真皮上部许多淋巴细胞浸润，形成致密的淋巴细胞浸润带。许多研究提示，浸润的CD8^＋T细胞（CTL）的细胞毒作用可能参与杀伤抗原特异性角质形成细胞。CTL主要通过颗粒胞吐分泌穿孔素、颗粒酶和通过表达CD95配体——FasL两种主要途径特异性杀伤靶细胞。颗粒酶B（granzyme B）是CTL分泌的颗粒酶家族中最有效的致凋亡成员。

伊木萨克提取物调控NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1通路对勃起功能障碍大鼠的干预效果

目的分析伊木萨克提取物调控核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(NLRP3/Caspase-1)通路对勃起功能障碍大鼠的干预效果。方法选取40只SPF级8周龄SD大鼠,随机选取10只作为对照组,另外30只建立勃起功能障碍模型,并将30只建模成功大鼠分为3组:用生理盐水灌胃大鼠为模型组,用西地那非灌胃大鼠为药物对照组,用伊木萨克提取物灌胃大鼠为伊木萨克提取物组,每组各10只。连续灌胃28 d后,采用HE染色法观察各组大鼠阴茎海绵体病理组织学特征;比较各组大鼠性功能指标;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠外周血氮氧化物(NOX)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)、低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)等内皮功能指标,和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)等氧化应激指标;采用实时定量PCR法检测各组大鼠阴茎海绵体组织NLRP3、Caspase-1 mRNA相对表达量;采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组大鼠海绵体组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况。结果各组大鼠海绵体形态学观察显示,对照组大鼠海绵体窦状隙中具有红细胞;模型组大鼠阴茎海绵体内血窦数量、小血管数量减少,内皮细胞密度下降;药物对照组、伊木萨克提取物组大鼠阴茎海绵体内小血管数量、血窦数量增加,且伊木萨克提取物组大鼠海绵体形态学特点的改善程度大于药物对照组。与对照组比较,其他3个建模组骑跨次数、插入次数、舔嗅次数、精子密度、精子存活率均显著下降,首次爬背时间显著增加(P<0.05);伊木萨克提取物组骑跨次数、插入次数、舔嗅次数、精子密度、精子存活率显著高于模型组和药物对照组,首次爬背时间显著少于模型组和药物对照组(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组比较,其他3个建模组血清NOX、ET-1、LOX-1、MDA水平显著升高,NO、SOD、GSH水平显著降低(P<0.05);伊木萨克提取物组NOX、ET-1、LOX-1、MDA水平显著低于模型组和药物对照组,NO、SOD、GSH水平显著高于模型组和药物对照组(P<0.05)。实时定量PCR结果显示,与对照组比较,其他3个建模组NLRP3、Caspase-1相对表达量显著升高(P<0.05);伊木萨克提取物组NLRP3、Caspase-1相对表达量显著低于模型组和药物对照组(P<0.05);Western Blot检测结果显示,与对照组比较,其他3个建模组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量显著升高(P<0.05);伊木萨克提取物组NLRP3、Caspase-1蛋白表达量显著低于模型组和药物对照组(P<0.05)。结论伊木萨克提取物可改善大鼠性功能,提高大鼠精子密度及精子存活率,其作用机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1通路有关。

25-羟维生素D3、低密度脂蛋白胆固醇、同型半胱氨酸对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响

目的探讨25-羟维生素D3[25(OH)D3]、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和同型半胱氨酸(HCY)对桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块稳定性的影响。方法选取2021年1月至2023年4月于内蒙古自治区人民医院体检并诊断为桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块的患者200例,随机选取同期体检健康人群116例作为对照组,按照斑块厚度、内部回声、超微血流和溃疡情况及纤维帽是否完整的特点将桥本甲状腺炎合并颈动脉斑块患者分为稳定斑块组(n=132)和易损斑块组(n=68)。记录三组患者的基线资料,采用受试者工作特征(ROC)曲线对颈动脉斑块的稳定性进行评估,计算ROC曲线下面积(AUC)。结果稳定斑块组和易损斑块组葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、LDL-C、HCY水平均高于对照组,25(OH)D3、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。稳定斑块组与易损斑块组患者LDL-C、HCY水平比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,LDL-C、HCY均是导致颈动脉发生易损斑块的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析显示,LDL-C、HCY诊断颈动脉易损斑块的AUC分别为0.662、0.633,灵敏度分别为0.706、0.824,特异度分别为0.636和0.273。结论25(OH)D3、LDL-C、HCY、GLU、TC、HDL-C均是桥本甲状腺炎患者颈动脉斑块形成的影响因素,LDL-C、HCY均是影响颈动脉斑块稳定性的独立危险因素,对颈动脉易损斑块具有预测价值。

帕金森病患者血清同型半胱氨酸、脑源性神经营养因子、α-突触核蛋白水平与脑白质病变的关系研究

目的 探讨帕金森病患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、脑源性神经营养因子(BDNF)、α-突触核蛋白(α-Syn)水平与脑白质病变的关系。方法 选取扬中市人民医院2022年6月至2023年6月收治的104例帕金森病患者为观察组,并选取同期健康体检者60例为对照组,收集两组临床资料并测定血清Hcy、BDNF、α-Syn水平;依据脑白质病变分级将观察组患者分正常组、轻度病变组、中度病变组及重度病变组,比较四组临床资料以及上述指标,并采用多因素Logistic回归分析帕金森病患者脑白质病变的影响因素、受试者工作特征曲线(ROC)分析生化指标对脑白质病变的预测价值。结果 观察组血清Hcy、α-Syn水平高于对照组,BDNF水平低于对照组(P<0.05);轻度病变、中度病变及重度病变组患者年龄、病程、Hoehn-Yahr(HY)分级、统一帕金森病评定量表(UPDRS)-Ⅲ评分、Hcy、α-Syn水平高(大)于正常组,BDNF水平低于正常组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,Hcy、BDNF、α-Syn水平为帕金森病患者脑白质病变的影响因素(P<0.05);结果显示α-Syn水平诊断帕金森病患者脑白质病变的AUC值最高为0.949,敏感度、特异度分别为82.69%、96.67%;其次为BDNF(0.829);且α-Syn诊断AUC值明显高于BDNF、Hcy诊断(Z=2.832、4.991,P<0.05)。结论 Hcy、α-Syn升高是帕金森病患者脑白质病变的独立危险因素,BDNF升高是其保护因素,且Hcy、α-Syn、BDNF可作为帕金森病患者是否发生脑白质病变的生物标志物。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

大鼠半胱氨酸蛋白水解酶-3基因真核表达质粒和RNA干扰质粒的构建及鉴定

目的构建SD大鼠半胱氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3的真核表达质粒和干扰质粒，探究干扰质粒对Caspase-3表达的干预效应。方法从SD大鼠软骨终板细胞中获得模板cDNA并扩增，约834bp。克隆至载体pEGFP—N1，获得重组质粒pEGFP-N1-Caspase-3。针对Caspase-3设计4对RNAi靶点序列，克隆至载体pcDNA6．2。成功构建pcDNA6．2-caspase．3．1、pcDNA6．2-caspase-3-2、pcDNA6．2-Caspase-33、pcDNA6．2-caspase-3-4，构建对照质粒pcDNA6．2-HIiRNA。将5个干扰质粒分别与pEGFP．N1．Caspase_3（用量比为7：1）共转染至293T细胞，qPCR检测转染48h后对caspase．3表达的干预效应。结果通过菌落聚合酶链反应（PCR）、酶切及测序表明pEGFP-N1-Capase-3和干扰质粒构建成功；共转293T细胞后，qeCR示pcDNA6．2-Caspase-32、pcDNA6．2-Caspase-3-3干预组的caspase-3的表达高于对照组，分别为33％和8％，而pcDNA6．2-Caspase-3-1、pcDNA6．2-Caspase-34干预组的caspase-3的表达与对照组比较明显减少，抑制效率分别为24％和67％（P〈0．05）。结论成功构建了Caspase．3的表达质粒和干扰质粒，并证实pcDNA6．2-Caspase-34对Caspase-3的表达具有明显的抑制效应。

急性脑梗死患者血清微小RNA-124和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9水平与预后相关

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小RNA-124(miR-124)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的关系,及二者对患者预后的预测价值。方法:收集216例ACI患者为研究对象,选择同期健康体检者86例为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患者血清miR-124水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Caspase-9及炎性因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、正五聚蛋白(PTX)-3水平。ACI患者根据6个月随访结果分为预后良好组152例和预后不良组64例;分析预后不良组患者血清miR-124、Caspase-9表达水平与炎性因子相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、Caspase-9表达水平对患者预后的预测价值;采用Logistic回归方程分析影响预后的因素。结果:预后不良组患者miR-124、Caspase-9、hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3高于预后良好组和对照组,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及冠心病、糖尿病、大血管闭塞患者比例高于预后良好组(P均<0.05)。预后不良组患者血清miR-124与Caspase-9水平呈正相关(r=0.582,P<0.05),且二者与hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3水平呈正相关(P均<0.05)。血清miR-124、Caspase-9水平预测ACI患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.906、0.836,特异性分别为77.6%、88.8%,灵敏度分别为89.1%、71.9%;二者联合预测的AUC为0.920,特异性为90.8%,灵敏度为81.3%。miR-124、Caspase-9、LDL-C、冠心病、糖尿病、大血管闭塞是ACI患者发生不良预后的危险因素(P均<0.05)。结论:联合检测血清miR-124、Caspase-9水平可能有助于早期预测ACI患者预后。

缬沙坦对老年原发性高血压伴轻度认知障碍病情改善及血清同型半胱氨酸、基质金属蛋白酶-9水平的影响

目的探讨缬沙坦对老年原发性高血压伴认知功能障碍患者病情改善及对血清同型半胱氨酸(Hcy)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年12月联勤保障部队第九二一医院收治的142例老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组(n=71)和对照组。观察组给予缬沙坦胶囊降压治疗,对照组给予苯磺酸左氨氯地平降压治疗,观察并比较两组患者治疗前后的心率、血压、认知功能、血清Hcy和MMP-9水平变化情况。结果两组患者治疗前后组间、组内的心率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的收缩压、舒张压水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的收缩压低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗后两组的舒张压比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前的认知功能各项评分及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的延迟回忆、抽象、注意、语言4项维度和认知功能总分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后的命名、定向、视空间与执行功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前血清Hcy及MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后的血清Hcy及MMP-9水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍的患者采用缬沙坦和苯磺酸左氨氯地平均可降低血压、改善认知功能障碍、降低血清Hcy、MMP-9水平,相比之下,缬沙坦的作用效果更为明显,值得在临床上推广实施。

血清同型半胱氨酸超敏C-反应蛋白白细胞介素-6与急性脑梗死患者病情程度的相关性研究

目的 探讨血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、超敏C-反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平与急性脑梗死(acute cerebral infarct,ACI)患者病情程度的相关性。方法 选取2020年1 0月—2022年6月南丰县人民医院收治的1 20例ACI患者纳入ACI组,并将患者根据入院时NIHSS评分分为轻度组、中度组和重度组,另随机选取同期于本院接受健康体检的1 20名志愿者为对照组。比较ACI组和对照组受试者血清中Hcy、hs-CRP、IL-6水平和脂代谢相关指标,采用Pearson相关性分析法分析ACI患者血清Hcy、hs-CRP、IL-6水平与NIHSS评分之间的相关性。结果 ACI组血清Hcy、hs-CRP、IL-6水平高于对照组,TG、LDL-C水平高于对照组,HDL-C水平低于对照组(P<0.05);轻度组血清Hcy、hs-CRP、IL-6水平低于中度组和重度组,中度组血清Hcy、hs-CRP、IL-6水平低于重度组,3组之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,ACI组血清Hcy、hs-CRP、IL-6和NIHSS评分均存在正相关性(P<0.05)。结论 ACI患者血清Hcy、hs-CRP、IL-6水平显著升高,且其升高水平与患者病情程度具有显著相关性。

血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C比值对胰腺癌患者的早期诊断与预后价值

目的探讨血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(sCr/CysC)比值对胰腺癌早期诊断和预后评估的价值。方法回顾性分析苏州大学附属第一医院2020年1月至2021年12月收治的60例初诊胰腺癌患者、30例胰腺良性肿瘤患者和30例健康对照者的临床资料。比较三组间sCr/CysC比值、C反应蛋白(CRP)、L3骨骼肌指数(L3-SMI)、Alb和CA199水平的差异。采用ROC曲线分析sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断效能。根据sCr/CysC比值中位数将胰腺癌患者分为高比值组和低比值组,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析sCr/CysC比值对胰腺癌预后的预测价值。结果与胰腺良性肿瘤组和健康对照组相比,胰腺癌组的sCr/CysC比值和Alb水平显著降低,而CRP水平明显升高(均P<0.05)。与低sCr/CysC比值组相比,高比值组患者的性别构成、年龄和L3 SMI水平差异有统计学意义(均P<0.05)。sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断ROC曲线下面积为0.640(95%CI:0.524~0.756,P<0.05),在cut-off值为0.69时敏感性为46.7%,特异性为83.3%。相关分析显示,sCr/CysC比值与L3-SMI呈正相关(r=0.425,P<0.01)。生存分析表明,高sCr/CysC比值组患者的中位生存期显著长于低比值组(379 d vs 210 d,P<0.01)。Cox回归分析确认sCr/CysC比值是胰腺癌预后的独立危险因素(HR=0.151,95%CI:0.028~0.826,P<0.05)。结论sCr/CysC比值可能是胰腺癌早期诊断和预后评估的有效指标,有望为胰腺癌的临床诊疗提供参考。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)、突变型(Mt)RECK 3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体Wt-RECK和Mt-RECK,使用脂质体2000将Wt-RECK或Mt-RECK载体与miR-NC或miR-103a-3p mimics共转染入MKN-45细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt-RECK组、miR-103a-3p+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组,使用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞的相对荧光素酶活性。结果4组细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(F=16.044、60.975,P<0.05);RECK组细胞划痕愈合率显著低于NC组,miR-103a-3p组细胞划痕愈合率显著高于RECK组,miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率显著低于miR-103a-3p组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组与NC组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);RECK组与miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RECK组侵袭细胞数显著少于NC组,miR-103a-3p组侵袭细胞数显著多于NC组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著多于RECK组(P<0.05);miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著少于miR-103a-3p组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=33.473,P<0.05);RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著高于NC组,miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著低于RECK组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-103a-3p组与miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。Starbase数据库预测显示,miR-103a-3p与RECK的3′UTR存在结合位点。miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性显著高于miR-103a-3p+Wt-RECK组(P<0.05);miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-103a-3p可能通过靶向抑制RECK的表达而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

血清同型半胱氨酸、低氧诱导因子-1α、高迁移率族蛋白B1对急性心肌梗死患者预后的评估价值

目的 探讨血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者预后的评估价值。方法 回顾性选取2020年2月至2022年6月广东省人民医院收治的98例AMI患者为AMI组;根据AMI患者冠状动脉狭窄程度,将AMI患者分为轻度组(21例)、中度组(45例)和重度组(32例);同时根据AMI患者1年内是否出现主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)分为MACE组(24例)和非MACE组(74例)。检测各组患者血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平,分析Hcy、HIF-1α、HMGB1对AMI患者发生MACE的预测价值。结果 AMI组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平显著高于对照组(P<0.05);重度组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平高于中度组,中度组又高于轻度组(P<0.05);AMI患者血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平与Gensini评分呈正相关(P<0.05);MACE组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平高于非MACE组(P<0.05);Hcy、HIF-1α与HMGB1联合预测AMI患者发生MACE的曲线下面积、敏感度也高于单项检测(P<0.05)。结论 血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平与AMI病情及预后密切相关,三项指标可作为评估AMI患者发生MACE的参考指标,联合检测的预测效能更佳。

血清可溶性细胞间黏附分子1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3水平对颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛的预测价值

目的探讨血清可溶性细胞间黏附分子1(SICAM-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)水平在颅内破裂动脉瘤术后脑血管痉挛(CVS)的预测价值。方法选取2016年1月—2019年12月山东省枣庄市立医院收治的203例颅内动脉瘤破裂蛛网膜下腔出血(SAH)患者,均接受开颅夹闭或介入栓塞治疗,术后4 d行数字减影血管造影,根据术后不同程度CVS将其分为重度CVS组(19例)、中度CVS组(44例)、轻度CVS组(23例)、无CVS组(117例)。检测术前和术后3、7 d血清Caspase-3、SICAM-1水平。比较四组颅内破裂动脉瘤术前后血清SICAM-1、Caspase-3水平,Pearson相关系数分析颅内破裂动脉瘤术后血清SICAM-1与Caspase-3水平的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,判断术后3 d血清SICAM-1、Caspase-3对颅内破裂动脉瘤术后CVS的预测价值。结果四组术后3、7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均高于术前,术后7 d血清SICAM-1、Caspase-3水平均低于术后3 d(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,颅内破裂动脉瘤术后3、7 d血清SICAM-1与Caspase-3水平呈正相关(r=0.493、0.585,P<0.05)。ROC曲线显示,术后3 d血清SICAM-1+Caspase-3诊断颅内破裂动脉瘤术后CVS的曲线下面积、敏感度、特异性均高于SICAM-1和Caspase-3单独检测。结论颅内破裂动脉瘤术后CVS患者血清SICAM-1、Caspase-3水平明显提升,联合检测可有效预测CVS发生。

辛伐他汀对COPD大鼠肺组织半胱氨酸蛋白酶-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨辛伐他汀对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3表达及细胞凋亡的影响。方法30只雄性成年SD大鼠随机分为对照组、COPD组、辛伐他汀组,每组10只,COPD组通过鼻内滴注烟草提取物和气管内滴入脂多糖建立模型,通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理学变化,免疫组织化学法和Western印迹法检测肺组织caspase-3的表达及流式检测细胞凋亡。结果HE染色镜下观察发现COPD组支气管壁略增厚,结构较完整,肺泡扩张、肺血管壁增厚均较对照组加重,辛伐他汀组较对COPD组减轻。免疫组织化学实验结果显示COPD组肺组织的caspase-3表达较对照组显著增加(P<0.05),而辛伐他汀组caspase-3表达较COPD组显著减少(P<0.05)。Western印迹显示COPD组肺组织的caspase-3表达较对照组显著增加(P<0.05),而辛伐他汀组caspase-3表达较COPD组显著减少(P<0.05);COPD组肺组织早期细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05),而辛伐他汀组肺组织早期细胞凋亡率较COPD组显著降低(P<0.05)。结论辛伐他汀能够通过减少COPD大鼠肺组织caspase-3蛋白表达,减少肺组织细胞凋亡。

酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻cDNA文库中与S-腺苷高半胱氨酸水解酶相互作用的蛋白

目的:应用酵母双杂交技术筛选杜氏盐藻c DNA文库中能与S-腺苷高半胱氨酸水解酶(ds SAHH)相互作用的蛋白。方法:将构建好的p GBKT7-ds SAHH诱饵载体转化至酵母细胞Y187,与转化有杜氏盐藻c DNA文库的酵母细胞AH109杂交,从杜氏盐藻c DNA文库中筛选出能与ds SAHH相互作用的蛋白质。扩增所得基因片段全长,并在原核内表达该融合蛋白。随后采用Far-western blot、His pull-down及免疫共沉淀方法验证ds SAHH与目的蛋白在体内、外的相互作用。结果:以ds SAHH为诱饵筛选出3个阳性克隆,扩增得到dsRACK1、ds Met AP1和dse EF1α3个新基因。His pull-down和免疫共沉淀体内外实验证实dsRACK1能与ds SAHH相互作用。结论:dsRACK1是ds SAHH的相互作用蛋白。

缺血性脑血管病患者血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白及白细胞介素-6水平变化临床意义

目的:探讨缺血性脑血管病患者中血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白及白细胞介素-6(IL-6)水平变化的临床意义。方法:选取缺血性脑血管病患者82例作为患病组,选取同期健康体检者82例作为健康对照组,其中观察组按照神经缺损程度,可分为轻度神经缺损组(n=23)、中度神经缺损组(n=44)及重度神经缺损组(n=15);观察组按照梗死体积大小,可分为小梗死灶组(n=45)、中梗死灶组(n=19)及大梗死灶组(n=18)。对比健康对照组、观察组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平,比较观察组中轻度神经缺损组、中度神经缺损组及重度神经缺损组的血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平变化。结果:观察组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);重度神经缺损组血清同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平高于中度神经缺损组、轻度神经缺损组及健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);小梗死灶组血清同型半胱氨酸、S100A1蛋白及IL-6水平低于中梗死灶组、大梗死灶组及健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson分析结果显示,缺血性脑血管病患者发生的神经缺损程度、梗死灶体积大小与同型半胱氨酸、S100A1蛋白及IL-6呈正相关(均P<0.05)。结论:缺血性脑血管病患者同型半胱氨酸、血浆S100A1蛋白以及IL-6水平较健康体检者明显增高,且病情严重程度和神经缺损度、梗死体积大小存在正相关关系。

半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3蛋白表达水平对结直肠癌患者组织分化程度的影响

目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3蛋白(Caspase-3)表达水平对结直肠癌患者组织分化程度的影响。方法选取结直肠癌患者81例(低分化35例,中高分化46例)设为研究组,另选取同期接受手术治疗的81例结直肠良性病变患者设为对照组。2组均采取手术治疗,术中切取病变组织,免疫组化法检测Caspase-3阳性表达情况。统计研究组与对照组、研究组不同组织分化程度患者Caspase-3阳性表达情况,并统计分析Caspase-3阳性表达情况和组织分化程度间的关联性。结果研究组Caspase-3阳性表达率(27.16%)低于对照组(60.49%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05);低分化结直肠癌患者阳性表达率(14.29%)低于中高分化患者(36.96%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05);Caspase-3阳性表达和组织分化程度间存在显著负相关关系(r=-0.828,P<0.05)。结论结直肠癌患者Caspase-3阳性表达率显著降低,且在不同组织分化程度结直肠癌患者间存在明显差异,二者间存在显著负相关关系,临床可通过监测Caspase-3阳性表达情况评估结直肠癌病理组织分化程度,制订、调整治疗方案。

人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白浓度明显减少(P<0.001)。结论 rhBMP-7具有抑制HK-2细胞焦亡的作用,其通过调控caspase-1/GSDMD信号通路减缓高糖诱导的HK-2细胞焦亡。

微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制

目的探讨微RNA-223-3p(miR-223-3p)调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/胱天氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及其机制。方法将32只ICR小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、miR-223-3p模拟物(miR-223-3p agomir)组和阴性对照miRNA模拟物(agomir-NC)组,建立四氯化碳小鼠肝纤维化模型。miR-223-3p agomir组和agomir-NC组于第4周末尾静脉注射miR-223-3p agomir及agomir-NC(给药剂量为每只200 nmol/L),每周给药3次,连续给药2周。分别比较4组小鼠血清总胆红素(TBIL)、白蛋白(Alb)、血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达水平,采用苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色检测肝组织病理改变。采用基因本体分析(GO)、KEGG分析对miR-223-3p进行功能分析,采用Targetscan数据库对miR-223-3p的靶基因进行预测,实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)检测肝组织NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA及蛋白表达情况。结果与模型组相比,miR-223-3p agomir组血清TBIL[(24.32±3.24)比(62.21±4.52)]、Alb[(34.12±7.32)比(59.21±8.21)]、HA[(136.12±10.25)比(298.56±32.14)]、PCⅢ[(39.52±4.25)比(78.32±14.21)]、Ⅳ-C[(50.25±6.32)比(165.85±12.35)]表达均明显降低(P<0.05),小鼠肝组织损伤得到明显改善,浸润的炎性细胞明显减少,纤维化程度明显减轻。GO、KEGG富集及miRNA-mRNA-KEGG关联分析结果显示,miR-223-3p可在炎症、免疫等的59个生命进程中发挥作用。靶点预测结果显示NLRP3可能为miR-223-3p的反向靶点。与模型组相比,miR-223-3p agomir组小鼠肝组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA表达[(1.24±0.12)比(2.17±0.14)、(1.44±0.11)比(2.65±0.18)、(1.31±0.13)比(1.97±0.21)]及蛋白表达[(0.89±0.05)比(1.93±0.04)、(1.29±0.07)比(2.15±0.09)、(1.50±0.05)比(2.52±0.12)]水平均显著降低(P<0.05)。结论过表达miR-223-3p可抑制NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路的激活,降低机体炎症反应,改善小鼠肝组织损伤,进而发挥其抗肝纤维化作用。