血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C比值对胰腺癌患者的早期诊断与预后价值

目的探讨血清肌酐/半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(sCr/CysC)比值对胰腺癌早期诊断和预后评估的价值。方法回顾性分析苏州大学附属第一医院2020年1月至2021年12月收治的60例初诊胰腺癌患者、30例胰腺良性肿瘤患者和30例健康对照者的临床资料。比较三组间sCr/CysC比值、C反应蛋白(CRP)、L3骨骼肌指数(L3-SMI)、Alb和CA199水平的差异。采用ROC曲线分析sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断效能。根据sCr/CysC比值中位数将胰腺癌患者分为高比值组和低比值组,应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析sCr/CysC比值对胰腺癌预后的预测价值。结果与胰腺良性肿瘤组和健康对照组相比,胰腺癌组的sCr/CysC比值和Alb水平显著降低,而CRP水平明显升高(均P<0.05)。与低sCr/CysC比值组相比,高比值组患者的性别构成、年龄和L3 SMI水平差异有统计学意义(均P<0.05)。sCr/CysC比值对胰腺癌的诊断ROC曲线下面积为0.640(95%CI:0.524~0.756,P<0.05),在cut-off值为0.69时敏感性为46.7%,特异性为83.3%。相关分析显示,sCr/CysC比值与L3-SMI呈正相关(r=0.425,P<0.01)。生存分析表明,高sCr/CysC比值组患者的中位生存期显著长于低比值组(379 d vs 210 d,P<0.01)。Cox回归分析确认sCr/CysC比值是胰腺癌预后的独立危险因素(HR=0.151,95%CI:0.028~0.826,P<0.05)。结论sCr/CysC比值可能是胰腺癌早期诊断和预后评估的有效指标,有望为胰腺癌的临床诊疗提供参考。

血清碱性磷酸酶、同型半胱氨酸及半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与糖尿病足下肢动脉粥样硬化的关系

目的分析糖尿病足患者血清碱性磷酸酶(ALP)、同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)水平与糖尿病足及下肢动脉粥样硬化(AS)的关系。方法收集2021年1月至2021年12月于山东中医药大学附属医院住院治疗的80例糖尿病足患者和36例同期健康体检者的临床资料,分别设为观察组和对照组。根据彩色多普勒超声测定的下肢股动脉内-中膜厚度(FAIMT)测定结果将观察组患者分为FAIMT增厚组(n=39)和斑块组(n=41)。比较各组患者的临床特征、血液指标[ALP、Hcy、Cys-C、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及空腹血糖(FBG)],采用多因素Logistic回归模型分析糖尿病足发生的危险因素,通过受试者操作特征(ROC)曲线确定ALP、Hcy、Cys-C对糖尿病足的诊断价值。结果观察组的年龄大于对照组,ALP、Hcy、Cys-C、FBG水平均高于对照组,TC、HDL-C水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。斑块组患者的Hcy水平高于FAIMT增厚组患者,差异有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,年龄、FBG、ALP、Hcy、Cys-C均是糖尿病足发生的独立危险因素(P﹤0.05)。ROC曲线分析结果显示,ALP、Hcy、Cys-C诊断糖尿病足的AUC分别为0.724、0.640、0.895,对糖尿病足均具有较好的诊断价值。结论ALP、Hcy、Cys-C与糖尿病足的发生密切相关,且与下肢AS程度有关,对糖尿病足患者病情的诊断具有重要临床意义。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与糖尿病肾病的相关性

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)与糖尿病肾病(DKD)的相关性。方法收集2019年1月至12月陕西省人民医院内分泌科住院的122例2型糖尿病(T2DM)患者的临床资料,按尿白蛋白与肌酐比值(UACR)分为单纯糖尿病(DM)组(UACR<30 mg/g,89例)、DKD组(UACR≥30 mg/g,33例)。比较两组临床资料,采用logistic回归分析T2DM患者发生DKD的危险因素,绘制受试者操作特征(ROC)曲线评价Cys C对DKD的预测价值。结果DKD组收缩压、碱性磷酸酶、总蛋白、球蛋白、血清肌酐、尿微量白蛋白、尿α_(1)微球蛋白、UACR、Cys C均高于单纯DM组,病程长于单纯DM组(P<0.05)。logistic回归分析显示,Cys C是DKD的危险因素(OR=28.369,95%CI:1.208~666.129,P=0.038)。ROC曲线分析显示,Cys C预测DKD的曲线下面积为0.757(P<0.05)。结论Cys C与T2DM合并DKD密切相关,检测Cys C可用于评估DKD病情进展。

血清尿酸、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C及碱性磷酸酶水平与脑卒中后抑郁的相关性

目的分析血清尿酸、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)及碱性磷酸酶水平与脑卒中后抑郁(PSD)的相关性。方法收集郑州大学第一附属医院诊治的202例脑卒中患者的临床资料,经神经内科治疗后病情稳定,根据汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分,分为抑郁组(105例)与对照组(共97例)。收集两组患者的一般临床基线资料和实验室指标,应用logistic回归分析急性脑卒中患者PSD发生的危险因素,根据受试者工作特征(ROC)曲线分析血清尿酸、Cys C水平预测PSD发生的临床价值。结果两组性别、高血压、糖尿病、吸烟、饮酒、冠心病、房颤史、发病类型、发病至入院时间及碱性磷酸酶水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者高龄、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、血清尿酸和Cys C水平差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析结果提示,血清尿酸水平和Cys C水平是急性脑卒中患者发生PSD的影响因素。血清尿酸浓度预测PSD的最临界值为317.251μmol·L^(-1)。血清Cys C浓度预测PSD的最佳临界值为2.155 mg·L^(-1)。结论血清碱性磷酸酶水平与PSD的发生无关;血清尿酸和Cys C水平是影响急性脑卒中患者发生PSD的独立影响因素,二者对急性脑卒中患者发生PSD具有较高的诊断价值,可以作为预测PSD发生的血清学指标。

血液可溶性生长刺激表达基因2蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、白介素6对A型主动脉夹层患者心脏手术相关急性肾损伤的预测价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)和白介素6(IL-6)对A型主动脉夹层(ATAAD)患者术后心脏手术相关性急性肾损伤(CSA-AKI)的预测价值。方法纳入2022年4月至2024年3月在厦门大学附属心血管病医院确诊的112例ATAAD患者,根据术后是否发生CSA-AKI分为CSA-AKI组和非CSA-AKI组。另选取50例健康体检者作为对照组。分别检测各组术前及术后24h、72h血清sST2、CysC和IL-6水平,比较组间差异,并采用Lo-gistic回归和ROC曲线分析评估3种标志物对ATAAD术后CSA-AKI的预测效能。结果CSA-AKI组术前和术后sST2水平均显著高于非CSA-AKI组(P<0.05),非CSA-AKI组术前sST2水平高于健康对照组(P<0.05)。两组ATAAD患者术前IL-6水平均高于对照组(P<0.05)。CSA-AKI组术后24h、72hCysC水平明显高于非CSA-AKI组(P<0.05)。Logistic回归分析显示,术后24h、72hsST2和CysC水平与CSA-AKI发生风险显著相关(P<0.05)。ROC曲线证实,sST2和CysC对CSA-AKI有良好预测价值(P<0.05)。结论血清sST2和CysC是潜在的新型标志物,对ATAAD术后CSA-AKI具有早期预测和风险评估价值。

重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制

目的 探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对LPS/D-GalN诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用及机制。方法 将72只雄性C57BL/6J小鼠(6~8周龄)随机分为正常对照组、LPS/D-GaIN模型组、LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组和rSj-Cys对照组(n=18)。LPS/D-GaIN组和LPS/D-GaIN+rSj-Cys组小鼠均腹腔注射LPS(10μg/kg)和D-GaIN(700 mg/kg)造模;造模后30 min,LPS/D-GaIN+rSj-Cys组及rSj-Cys对照组小鼠均腹腔注射rSj-Cys(1.25 mg/kg),正常对照组小鼠注射等体积PBS。造模6 h后,每组随机挑选8只小鼠处死,收集小鼠血清及肝组织,进行后续检测,每组剩余10只分别在3、6、12、24 h观察其生存情况,并计算生存率。检测血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏组织病理形态,采用ELISA检测小鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-6)表达,采用免疫组化法检测肝组织巨噬细胞表面标记物CD68表达水平,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白水平,采用TUNEL检测肝细胞凋亡情况,采用免疫印迹法检测肝组织内质网应激相关蛋白表达水平。结果 模型组小鼠12 h生存率为30%,rSj-Cys治疗组小鼠12 h生存率为80%。模型组小鼠24 h生存率为10%,rSj-Cys治疗组小鼠24 h生存率为60%;与正常对照组相比,LPS/D-GaIN模型组小鼠血清中AST、ALT、IL-6、TNF-α含量均显著上升(P<0.01),病理结构损伤严重,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显增强(P<0.01),促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),肝细胞凋亡水平显著增加,肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01);而LPS/D-GaIN+rSj-Cys治疗组小鼠转氨酶AST、ALT和炎症因子IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.01),肝脏病理损伤程度减轻,肝脏巨噬细胞标志物CD68表达明显降低(P<0.01),Bax表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著增强(P<0.01),肝组织内质网应激相关信号通路GRP78、CHOP、NF-κB p-p65的蛋白表达水平下调(P<0.05或P<0.01);rSj-Cys对照组与正常对照组相比,各指标无统计学差异(P>0.05)。结论 rSj-Cys通过抑制内质网应激,减轻炎症和肝细胞凋亡缓解LPS/D-GalN引起的小鼠急性肝损伤。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂1对人食管鳞状细胞癌斑马鱼移植瘤模型的作用

目的通过构建人食管鳞状细胞癌(ESCC)的斑马鱼移植瘤模型,研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(CST1)表达对ESCC肿瘤转移及血管生成的影响。方法通过慢病毒转染技术构建CST1过表达/敲低ESCC细胞,并经Transwell小室法检测细胞侵袭/迁移能力的变化,再通过显微注射技术分别将CST1过表达/敲低ESCC细胞注射至斑马鱼胚胎卵黄囊,建立人ESCC斑马鱼移植瘤模型,观察两株细胞在斑马鱼体内的定植迁移、分布及对斑马鱼肠下静脉丛(SIVs)的影响。结果体外实验表明,CST1过表达ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显增强,而CST1敲低ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显减弱。斑马鱼移植瘤模型实验表明,当接种细胞数为300~500个/只时,ESCC斑马鱼移植瘤建模的存活率大于0.8;与对照组相比,CST1过表达细胞在斑马鱼体内具有明显的迁移特性,且SIVs区域血管呈明显增生状态,而CST1敲低细胞迁移能力减弱,SIVs区域血管生成明显受到抑制。结论通过显微注射技术成功构建人ESCC的斑马鱼异种移植瘤模型,并应用于肿瘤的在体功能学研究。CST1过表达具有促进ESCC肿瘤转移及血管生成的作用,提示CST1在ESCC发生发展进程中发挥潜在的致癌作用。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、尿酸、同型半胱氨酸与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的相关性分析

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)、尿酸(UA)、同型半胱氨酸(Hcy)与急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的相关性,为临床治疗急性脑梗死提供参考依据。方法回顾性分析2021年10月至2022年12月佛山市高明区人民医院收治的50例急性脑梗死患者的临床资料,将其作为病例组,并根据颈动脉内膜中层厚度将病例组患者分为内膜正常组(13例)、内膜增厚组(15例)、斑块形成组(22例);另回顾性分析同期于佛山市高明区人民医院进行健康体检的50例体检者的资料,将其作为对照组,对所有研究对象进行血清CysC、UA、Hcy水平检测。比较对照组与病例组,内膜正常组、内膜增厚组、斑块形成组患者血清CysC、UA、Hcy水平;分析急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化程度与上述血清学指标的相关性。结果与对照组比,病例组研究对象血清CysC、UA、Hcy水平均升高;与内膜正常组比,内膜增厚组、斑块形成组患者血清CysC、UA、Hcy水平均升高,且斑块形成组高于内膜增厚组;经Pearson相关系数法分析,结果显示,急性脑梗死患者内膜增厚与斑块形成与血清CysC、UA、Hcy水平呈正相关(r=0.415、0.317、0.512、0.851、0.862、0.918,均P<0.05)。结论急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块程度与血清CysC、UA、Hcy水平呈正相关,血清CysC、UA、Hcy水平越高,则斑块形成风险就越大,临床可将血清CysC、UA、Hcy作为早期颈动脉粥样硬化的判断标准,以尽早预防急性脑梗死的发生。

慢性心力衰竭患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C与血脂水平的相关性

目的:血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)、血脂水平均与慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)的发生和发展有关,但对于CHF患者血脂水平与Cys C异常的相关性鲜有报道。本研究旨在探讨CHF患者血清Cys C水平与血脂水平的相关性,以期为CHF的临床诊断和治疗提供有价值的参考依据。方法:选取2017年10月至2018年7月于陕西省人民医院心血管内科住院治疗的336例CHF患者。根据患者血清Cys C的水平,将其分为Cys C正常组(n=180)和Cys C异常组(n=156)。比较2组患者的一般资料、实验室指标及心脏超声检查结果,采用Pearson相关分析评估Cys C与血脂指标等的相关性,选取与Cys C相关的指标进行logistic回归分析。结果:与Cys C正常组相比,Cys C异常组CHF患者的左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)较低(P<0.001),年龄较大(P=0.030),糖尿病发病率和吸烟指数较高(分别P=0.002和P=0.003),血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和总胆红素(total bilirubin,TBIL)水平较高(均P<0.001),而高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)、载脂蛋白(apolipoprotein,Apo)A和白蛋白(albumin,ALB)水平较低(分别P<0.001、P=0.001和P=0.003)。Pearson相关分析结果显示:血清Cys C水平与血小板计数、HDL、Apo A、ALB、LVEF呈线性负相关,与吸烟指数、平均血小板体积、中性粒细胞比例、BUN和TBIL呈线性正相关(均P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示:HDL水平下降是CHF患者血清Cys C异常的危险因素(OR=0.119,P=0.003),而Apo A不是其异常的影响因素(P=0.337)。结论:HDL可能是CHF患者血清Cys C异常唯一相关的血脂学指标。

小麦半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的鉴定与表达分析

以小麦品种中国春的基因组为参考序列,利用Hummer search技术在小麦全基因组水平上对小麦TaCYS家族基因进行了鉴定。对TaCYS家族基因的进化关系、基因结构、保守基序列、顺式作用元件等进行了分析。结果表明,系统进化树分析将TaCYS分为A、B、C三类且同组的TaCYS的基因结构与motif分布相对保守。染色体定位显示,TaCYS位于除chr 6 A、chr 5 B外的19条染色体上。通过分析启动子区域的顺式作用元件,推测TaCYS基因的表达可能受到光照、温度、激素等因素的调控。对小麦转录组数据分析显示,大部分A类的TaCYS基因在小麦不同时期的根、叶、穗、粒中均表达,大部分B类与C类的TaCYS基因只在生殖发育时期的籽粒中表达。TaCYS基因在抵抗不同营养型真菌入侵时可能具有专一性,TaCYS35-D、TaCYS37-D能激活PTI反应,对生物胁迫的反应更为强烈。

急性肺栓塞患者肌钙蛋白I、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C及肌酸激酶同工酶的表达及临床意义

目的分析急性肺栓塞(APE)患者肌钙蛋白I(cTnI)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)及肌酸激酶同工酶(CK-Mb)的表达及临床意义。方法选取2019年2月至2021年7月在北京世纪坛医院就诊的APE患者112例(试验组),选取同期健康体检结果正常者98例为对照组。对APE患者随访6个月,根据预后评判标准分为预后良好组88例和预后不良组24例,对比两组cTnI、Cys-C及CK-Mb水平;分析APE患者预后的影响因素;cTnI、Cys-C及CK-Mb联合检测对APE预后的预测价值。结果试验组cTnI、Cys-C及CK-Mb水平高于对照组(P<0.05);随访结束,预后不良组cTnI、Cys-C及CK-Mb水平高于预后良好组(P<0.05);吸烟史、高血压、糖尿病、右心室功能不全以及cTnI、Cys-C、CK-Mb水平异常升高是APE患者预后的影响因素(P<0.05);cTnI、Cys-C及CK-Mb联合检测AUC曲线下面积为0.967,大于三者单独检测(P<0.05)。结论cTnI、Cys-C及CK-Mb水平是影响APE患者预后的相关因素,对患者预后评估具有重要意义。

人血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S及肿瘤标志物在口腔颌面部恶性肿瘤中的诊断价值

目的:探讨人血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S(CST4)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、糖类抗原19-9(CA19-9)、可溶性细胞角蛋白组分(CYFRA21-1)在口腔颌面部恶性肿瘤中的诊断价值。方法:选取2022年1—11月于河北医科大学第四医院治疗的232例口腔颌面部恶性肿瘤患者、49例口腔颌面部良性肿瘤患者以及同时期的40例健康体检者为研究对象,分析上述3组人群血清CST4、SCC、CA19-9和CYFRA21-1表达水平,制作ROC曲线评价不同指标对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断效能。结果:口腔颌面部恶性肿瘤组的血清CST4、SCC、CYFRA21-1中位数水平明显高于良性肿瘤组和健康对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。不同部位及不同病理类型口腔颌面部恶性肿瘤患者血清CST4的表达水平无明显差异(P>0.05)。ROC曲线显示血清CST4检测对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断价值较高(AUC=0.954,敏感度为97.5%,特异度为78.45%,截断值为74.68 ng/mL),且CST4、SCC和CYFRA21-1三者联合检测对口腔颌面部恶性肿瘤的临床诊断效能更高。结论:血清CST4、SCC和CYFRA21-1在口腔颌面部恶性肿瘤中均高表达,与单独检测血清肿瘤标志物相比,三者联合检测对口腔颌面部恶性肿瘤的诊断具有较高的参考价值,可推荐作为口腔颌面部恶性肿瘤辅助诊断的肿瘤标志物。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂S与传统肿瘤标志物在胃肠癌中的诊断价值比较

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂S(CST4)在胃肠癌中的临床意义。方法利用血清CST4试剂盒(ELISA法)和化学发光法分别检测80例胃肠癌病人(胃癌40例,结直肠癌40例)和40例正常人对照血清CST4、CEA、CA19-9和CA125浓度,并对检测结果进行统计分析,评估CST4的临床意义。结果胃肠癌组CST4浓度中位数分别为78.272(36.892,188.395)U/L和66.265(39.751,108.890)U/L,均显著高于正常对照组中位数30.920(16.055,56.995)U/L,差异有统计学意义(P<0.05)。胃肠癌患者CST4的ROC曲线下面积(AUC)(分别为0.755、0.754)、胃肠癌早期(一期和二期)CST4的阳性检出率(均为26.9%)和检测灵敏度、特异性、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NNV)等检测指标均优于CEA、CA19-9和CA125。胃肠癌Ⅲ+Ⅳ期患者CST4中位数水平分别为165.653(58.767,334.933)U/L和74.365(41.192,183.306)U/L,均高于胃肠癌Ⅰ期和Ⅱ期患者,胃癌组水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃肠癌组血清CST4水平显著高于正常对照组,早期阳性检出率和诊断性能优于传统肿瘤标志物,并且与肿瘤预后相关,有望成为新的胃肠癌早期肿瘤标志物。

2型糖尿病肾病的检测指标尿蛋白-肌酐比值与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C糖化血红蛋白的相关性探讨

目的分析2型糖尿病肾病的尿蛋白-肌酐比值(albumin creatinine ratio,ACR)与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,CysC)、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HbA1c)的相关性。方法选取2019年8月—2021年8月于上饶市广信区人民医院就诊的60例2型糖尿病肾病患者(糖尿病肾病组)、60例单纯2型糖尿病患者(糖尿病组)与60名正常体检者(健康对照组)为研究对象,采集3组的静脉血5 mL,检测3组ACR、CysC、HbA1c水平;采用Pearson相关性分析2型糖尿病肾病患者的ACR与CysC、HbA1c水平之间的相关性;同时绘制受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),分析ACR、CysC、HbA1c单独与联合检测2型糖尿病肾病的诊断效能。结果糖尿病肾病组的ACR、CysC、HbA1c水平均高于糖尿病组与健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,2型糖尿病肾病患者的ACR与CysC、HbA1c水平呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示,ACR、CysC、HbA1c对2型糖尿病肾病的诊断价值较高,其曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.922(95%CI:0.869~0.974)、0.934(95%CI:0.890~0.979)、0.805(95%CI:0.724~0.885),而3项指标联合检测的AUC为0.968(95%CI:0.938~0.998),高于3项指标单独检测的AUC。结论ACR与CysC、HbA1c水平呈显著正相关,3项指标联合检测可提高2型糖尿病肾病的检出准确率,可为临床治疗方案的制定提供更为可靠的指导。

兔豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂Stefin基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

【目的】旨在克隆兔豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor)Stefin基因(CpStefin),原核表达并纯化兔豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂CpStefin蛋白,制备多克隆抗体并测定其效价。【方法】根据GenBank登录的猪带绦虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂Stefin基因序列设计引物,以提取的兔豆状囊尾蚴总RNA为模板,运用RT-PCR方法克隆兔豆状囊尾蚴Stefin基因,构建克隆载体pMD-19TCpStefin,分析Cpstefin蛋白氨基酸序列的二级结构、理化性质、结构域,并分析其与其它绦虫Stefin基因的亲缘关系,构建系统进化树。以克隆载体pMD-19T-CpStefin为模板扩增兔豆状囊尾蚴Stefin基因,回收纯化的扩增产物连接到原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-CpStefin,双酶切、测序结果与预期结果一致。重组质粒pGEX-4T-CpStefin转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达获得重组蛋白。应用亲和层析法纯化可溶性CpStefin重组蛋白,进行SDS-PAGE鉴定。重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,运用ELISA方法测定其效价。【结果】首次克隆兔豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂CpStefin基因,基因大小约为290 bp,成功构建克隆载体pMD-19T-CpStefin;菌液PCR和双酶切鉴定结果表明重组质粒pGEX-4T-CpStefin构建正确,通过IPTG诱导表达获得分子质量大小约为35 kU的可溶性融合蛋白,亲和层析法纯化获得纯度较高的CpStefin重组蛋白,制备出的多克隆抗体效价达到1∶25600。【结论】本研究首次克隆出豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂CpStefin基因,运用原核表达系统可溶性表达豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂CpStefin蛋白,纯化获得纯度较高的豆状囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶抑制剂CpStefin重组蛋白,制备的多克隆抗体效价达到1∶25600。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在心脏术后急性肾损伤早期诊断的前瞻性研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatin C）在预测和诊断心脏术后急性肾损伤（AKI）中的价值。方法前瞻性收集我院132例接受心肺旁路手术的病人，每位病人术前及术后每天采集血标本。同时应用酶法测血清肌酐（Scr），用颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）检测血清Cystatin C，用MDRD公式估算肾小球滤过率（eGFR）。AKI运用ADQI的RIFLE标准进行诊断（R：Scr升高≥50％基础值，I：Scr升高≥100％基础值，F：Scr升高≥200％基础值，L：肾功能丧失；E：终末期肾脏病）；同时AKI也按Cystatin C≥50％、≥100％和≥200％的标准进行诊断。结果29（21．9％）例病人发生不同程度AKI，其中10例经历R标准，12例经历I标准，7例经历F标准。其余103例没有发生AKI的病人作为对照组。AKI病人的Cystatin C较非AKI病人显著升高（P〈0．001），AKI病人的Cystatin C与Scr（r=0．732．P〈0．001）、[Cystatin C]^-1与eGFR（r=0．803，P〈0．001）成明显线性相关。分别按照Cystatin C和Scr两种方法诊断AKI，不同程度AKI诊断的中位时间是：R标准的10例病人分别为2d（1--4d）和3d（2～5d）（P=0．014），I标准12例病人分别为3．5d（1--6d）和5d（2～8d）（P=0．008），F标准7例病人分别为5d（3～7d）和6．5d（4--9d）（P=0．02）。ROC分析证实Cystatin C在AKI诊断中的准确性高（曲线下面积为0．992）。当以Cystatin C升高≥50％作为AKI的诊断截点时，Cystatin C在AKI诊断中的敏感性和特异性分别为92％和95％。结论Cystatin C可作为心肺旁路手术后AKI的诊断指标：Cystatin C在AKI的诊断时间上较Scr早，它可能作为AKI的早期预测指标之一。

尿肾损伤分子-1及血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对急诊危重症患者急性肾损伤的预测价值

目的探讨应用尿肾损伤分子-1（kidney injur ymolecule-1，KIM-1）和血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystainC，Cys—C）预测急诊危重症患者人院7d内发生急性肾损伤（acutekidneyinjury，AKI）的价值。方法入选2015—10～2016—10在北京朝阳医院急诊抢救室连续就诊的危重症患者232例，并且患者就诊时监测血肌酐（sell／mcreatinine，SCr）及尿量均在正常范围，同时测定患者的血清Cys—C、尿KIM-1水平，计算急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ（acutephysiologyandchronichealthevaluationII，APACHEII）。自人选之日起，连续监测7dSCr及尿量变化。依据全球改善肾脏病预后组织（kidneydiseaseimprovingglobaloutcomes，KDIGO）临床实践指南中的AKI诊断标准将患者分为AKI组（／Z=99）和非AKI组（／Z：133）。比较AKI组和非AKI组的尿KIM-1、血清Cys—C水平，同时比较AKI组的尿KIM-1和血清Cys—C在不同KDIGO分期中的水平。应用ROC曲线分析尿KIM-1、血清Cys—C对7d内发生AKI的预测价值。结果AKI组患者APACHElI评分明显高于非AKI组[（234-4）分VS．（184-4）分，P〈0．05]。AKI组尿KIM—l、血清Cys—C明显高于非AKI组，分别是[（26．6±9．7）rig／mLVS．（15．9±5．8）ng／mL，P〈0．001]，[（969．3±333．3）ng／mLVS．（632．2±270．4）ng／mL，P〈0．001]。AKI组中，尿KIM-1在KDIGO1期、2期、3期中分别为（19．3±9．3）ng／mL、（25．3±9．1）ng／mL、（31．0±7．7）ng／mL，各组问尿KIM-1水平差异有统计学意义（P〈0．05）。血清Cys—C在KDIGO1期、2期、3期中分别为（857．74-341．8）rig／mL、（956．74-382．6）ng／mL、（1031．74-295．5）ng／mL，1期和3期血清Cys—C水平差异有统计学意义（p〈0．05），其他组间差异无统计学意义。尿KIM-1与血清Cys—C是危重症患者7d内发生AKI的独立预测因素。尿KIM-1预测AKI发生的ROC曲线下面积（0．823）虽然高于血清Cys—C（0．781），但是差异无统计学意义（P〉0．05）。结论监测尿KIM-1和血清Cys—C能有效地预测急诊危重症患者7d内AKI的发生；与血清Cys—C比较，尿KIM-1水平更能反映AKI的严重程度。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C参考范围的设立及在糖尿病肾功能评价中的作用

目的确立本实验室半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)的参考范围和界定肾功能不全分期的Cys C水平。方法检测120名健康体检者Cys C水平,确立本实验室Cys C参考范围。选取200例血肌酐(Cr)为45～1 001μmol/L的样本,进行血清Cr、尿素(Urea)、尿酸(UA)和Cys C检测,了解Cys C与Cr的相关性;测定100例糖尿病患者的Cys C,了解其Cys C水平。结果本实验室健康人群Cys C参考范围为≤1.02 mg/L,Cys C与Cr的相关系数(r)为0.734 6,Cys C水平在2.18～3.15 mg/L和≥3.16 mg/L可分别作为界定肾功能不全氮质血症期和尿毒症期的衡量标准,糖尿病患者的Cys C水平明显高于一般人群。结论Cys C是衡量糖尿病患者肾功能状况的理想指标。

缺血性卒中急性期患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C水平的变化

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(简称胱抑素C)与缺血性卒中的相关性及临床意义。方法收集急性缺血性卒中患者147例,按病灶体积分为小、中、大3个亚组,根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)分为高危组(NIHSS>8分)和低危组(NIHSS≤8分),选择60例非卒中患者为对照组。采用颗粒增强免疫比浊法测定血清胱抑素C水平,探讨胱抑素C与缺血性卒中的关系,并分析胱抑素C与缺血性卒中的相关性。结果①缺血性卒中组患者血清胱抑素C水平为(1.20±0.40)mg/L,高于对照组的(0.86±0.23)mg/L,差异有统计学意义,P<0.05。随着病灶体积的增加,血清胱抑素C水平也升高,差异有统计学意义,F=10.447,P<0.05。②卒中复发组患者的血清胱抑素C水平为(1.33±0.52)mg/L,高于卒中初发组的(1.12±0.28)mg/L,差异有统计学意义,P<0.01。③血清胱抑素C水平与NIHSS评分无相关性,但高危组患者的胱抑素C水平[(1.37±0.68)mg/L]高于低危组的胱抑素C水平[(1.15±0.27)mg/L],差异有统计学意义,P<0.01。④血清胱抑素C水平与同型半胱氨酸(Hcy,r=0.189,P=0.022)和极低密度脂蛋白(r=0.255,P=0.002)呈正相关,与高密度脂蛋白(r=-0.173,p=0.036)呈负相关;⑤多因素Logistic回归分析显示,血清胱抑素C为缺血性卒中的危险因素(OR=2.646,95%CI.621～4.317,p<0.01)。结论血清胱抑素C水平升高是缺血性卒中的独立危险因素,与缺血性卒中病灶大小及严重程度有关,血清胱抑素C水平可作为缺血性卒中发生、发展及病情监测的参考指标。