α_(1)抗胰蛋白酶、D-二聚体及同型半胱氨酸联合检测对先兆流产患者妊娠结局的预测效能

目的探讨α_(1)抗胰蛋白酶(AAT)、D-二聚体(D-D)及同型半胱氨酸(Hcy)联合检测对先兆流产患者妊娠结局的预测效能。方法回顾性分析2021年6月至2023年1月江西省萍乡市人民医院收治的100例先兆流产接受保胎治疗患者的临床资料,依据妊娠结局划分为保胎失败组、保胎成功组。比较两组基线资料、孕早期血清AAT、D-D及Hcy水平;采用logistic回归分析探究血清AAT、D-D及Hcy水平与先兆流产患者妊娠结局的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清AAT、D-D及Hcy水平对先兆流产患者妊娠结局的预测效能。结果100例先兆流产患者经保胎治疗后难免流产20例(20.00%)、过期流产15例(15.00%),纳入保胎失败组;继续妊娠至顺利分娩65例(65.00%),纳入保胎成功组。保胎失败组患者在保胎治疗前的血清AAT水平低于保胎成功组,D-D及Hcy水平均高于保胎成功组,差异有统计学意义(P<0.05);logistic回归分析显示,更高的血清AAT(β=-1.769,OR=0.170,95%CI=0.068~0.429)为先兆流产患者妊娠结局的独立保护因素,更高的D-D(β=2.504,OR=12.229,95%CI=4.037~37.045)、Hcy(β=0.612,OR=1.844,95%CI=1.212~2.804)均为先兆流产患者妊娠结局的独立危险因素(P<0.05);绘制ROC曲线显示,血清AAT、D-D及Hcy水平均可用于预测先兆流产患者妊娠结局,三者联合预测时预测效能最高,AUC为0.898,敏感度、特异度分别为88.57%、78.46%。结论血清AAT、D-D及Hcy水平均与先兆流产患者妊娠结局有关,临床若出现AAT低表达、D-D及Hcy高表达,应警惕先兆流产发生。

参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死大鼠NOD样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响

目的探讨参附注射液辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)大鼠NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(Caspase-1)介导的细胞焦亡信号通路以及炎性因子水平的影响。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、倍他乐克组(0.9 mg/kg)和联合组(倍他乐克0.9 mg/kg联合参附注射液6 mL/kg),每组10只,连续灌胃3周。检测造模前、造模后和治疗3周时大鼠血清肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。造模后和治疗3周时,比较各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)等心脏彩超参数以及心肌梗死面积。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及Western blot检测心肌梗死面积NLRP3、Caspase-1的mRNA及其蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组造模后和治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,倍他乐克组和联合组治疗3周时cTnI、CK-MB、IL-6、IL-1β、TNF-α、心肌梗死面积、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表达量均降低,且联合组上述指标均低于倍他乐克组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参附注射液辅助治疗AMI能够进一步减轻心肌细胞损伤,缩小梗死面积,抑制炎症反应和细胞焦亡活性。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂1对人食管鳞状细胞癌斑马鱼移植瘤模型的作用

目的通过构建人食管鳞状细胞癌(ESCC)的斑马鱼移植瘤模型,研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(CST1)表达对ESCC肿瘤转移及血管生成的影响。方法通过慢病毒转染技术构建CST1过表达/敲低ESCC细胞,并经Transwell小室法检测细胞侵袭/迁移能力的变化,再通过显微注射技术分别将CST1过表达/敲低ESCC细胞注射至斑马鱼胚胎卵黄囊,建立人ESCC斑马鱼移植瘤模型,观察两株细胞在斑马鱼体内的定植迁移、分布及对斑马鱼肠下静脉丛(SIVs)的影响。结果体外实验表明,CST1过表达ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显增强,而CST1敲低ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显减弱。斑马鱼移植瘤模型实验表明,当接种细胞数为300~500个/只时,ESCC斑马鱼移植瘤建模的存活率大于0.8;与对照组相比,CST1过表达细胞在斑马鱼体内具有明显的迁移特性,且SIVs区域血管呈明显增生状态,而CST1敲低细胞迁移能力减弱,SIVs区域血管生成明显受到抑制。结论通过显微注射技术成功构建人ESCC的斑马鱼异种移植瘤模型,并应用于肿瘤的在体功能学研究。CST1过表达具有促进ESCC肿瘤转移及血管生成的作用,提示CST1在ESCC发生发展进程中发挥潜在的致癌作用。

活血通窍汤辅助治疗对动脉瘤性蛛网膜下腔出血并发脑血管痉挛临床疗效及对血清基质金属蛋白酶-9同型半胱氨酸和可溶性细胞间黏附分子-1水平的影响

目的分析活血通窍汤辅助治疗对动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)并发脑血管痉挛(CVS)挛患者临床疗效及对血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、同型半胱氨酸(Hcy)和人可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响。方法选择浙江省义乌市中心医院2021年4月至2022年4月收治的SAH并发CVS患者78例,运用随机数字表法分为对照组(39例)与治疗组(39例)。对照组给予盐酸法舒地尔注射液治疗,治疗组在对照组基础上服用活血通络汤。2组均治疗2周。比较2组治疗疗效,治疗前后中医证候积分、血流动力学、神经功能和认知功能、MMP-9、Hcy和sICAM-1水平变化。结果治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。2组治疗后患者头痛、恶心呕吐和颈项抵抗积分较治疗前降低(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05)。2组治疗后颈内动脉颅外段平均注速(VICA-Vm)和大脑中动脉平均注速(MCA-Vm)较治疗前降低(P<0.05),治疗组治疗后低于对照组(P<0.05)。2组治疗后mRS评分较治疗前降低,MoCA评分较治疗前升高(P<0.05);治疗组治疗后改良Rankin量表(mRS)评分低于对照组,蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分高于对照组(P<0.05)。2组治疗后MMP-9、Hcy和sICAM-1水平较治疗前降低(P<0.05);治疗组治疗后MMP-9、Hcy和sICAM-1水平低于对照组(P<0.05)。结论活血通窍汤辅助治疗SAH并发CVS患者疗效良好,患者血流动力学改善,神经功能改善,可降低MMP-9、Hcy和sICAM-1水平。

二苯乙烯苷对淀粉样前体蛋白/早老蛋白-1双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3和淀粉样前体蛋白表达的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老蛋白-1(PS1)双转基因小鼠脑组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、APP表达水平的影响,探讨其防治AD的可能机制。方法 2014年10月,将50只SPF级、雄性、APP/PS1双转基因小鼠按照随机数字表法分为模型组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组,每组10只。并选取10只SPF级、雄性、C5B7L/6J小鼠为正常对照组。石杉碱甲组小鼠灌胃给予石杉碱甲0.020 mg/kg,TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠分别灌胃给予TSG 0.033、0.100、0.300 g/kg,模型组、正常对照组小鼠灌胃给予0.9%氯化钠溶液10.000 ml/kg;1次/d,连续给药60 d。采用免疫组化法检测各组小鼠脑皮质和海马区caspase-3阳性细胞数,Western blotting法检测各组小鼠脑组织APP表达水平。结果正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数少于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑皮质、海马区caspase-3阳性细胞数与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组、石杉碱甲组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平均低于模型组(P<0.05);TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组小鼠脑组织APP表达水平与石杉碱甲组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSG对APP/PS1双转基因小鼠有明显的治疗作用,其防治AD的机制可能与抑制caspase-3和APP表达、减少β淀粉样蛋白产生、减缓神经元凋亡等机制有关。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂的酵母表达及其对B16细胞体外侵袭的抑制作用

目的:建立毕赤酵母表达质粒pPICZαA-cystatin,转化酵母细胞生产重组蛋白,探讨蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)对肿瘤侵袭的生物学作用。方法:利用PCR扩增技术从pUC18/sv-cystatin质粒中扩增sv-cystatin cDNA并克隆至酵母表达载体pPICZαA上,构建重组质粒pPICZαA-cystatin电激转化Pichia pastori酵母细胞GS115,经1%甲醇诱导获得稳定表达的重组蛋白,改良Boyden小室分析重组sv-cystatin蛋白处理对B16F1细胞体外侵袭力的影响。结果:SDS-PAGE检测和Western blot分析显示分泌表达的sv-cystatin重组蛋白相对分子量约为14kDa,摇瓶发酵每升发酵培养上清可获得16mg的重组蛋白,经亲和层析纯化获得的sv-cystatin重组蛋白具有抑制木瓜蛋白酶的活性。改良Boyden小室实验结果显示:经0.5mg/ml浓度的重组蛋白处理的B16F1细胞穿过Matrigel的细胞数明显低于对照组(52.60±4.58,106±5.9,P<0.01),抑制率为50%。结论:成功实现sv-cystatin的酵母表达,初步证明sv-cystatin重组蛋白可抑制小鼠B16F1细胞体外侵袭作用。

电针干预脑缺血再灌注损伤模型大鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达的变化

背景:对于脑缺血/再灌注损伤目前尚无有效的治疗方法,缓解脑缺血/再灌注损伤级联损伤对于治疗方法的探索至关重要。电针基于传统针灸和电疗法,可有效缓解缺血性脑卒中导致的神经功能损伤症状。目的:基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1通路,探讨电针对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、抑制剂组,每组12只,后3组应用线栓法制备脑缺血再灌注模型。半胱天冬氨酸蛋白酶1抑制剂用Z-YVAD-FMK干预,穴位选取"合谷""尺泽""三阴交""足三里"。采用神经行为学评分评定神经功能症状,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法观察脑组织梗死情况,电镜观察神经元焦亡,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达,免疫荧光染色观察小胶质细胞水平,酶联免疫吸附实验检测白细胞介素1β、白细胞介素18及肿瘤坏死因子α表达水平。结果与结论:(1)与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经功能缺损评分、脑组织梗死体积减少(P均<0.05);(2)与模型组比较,电针组和抑制剂组的神经元焦亡减轻;(3)与模型组比较,电针组和抑制剂组的小胶质细胞减少,白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α表达水平降低(P均<0.05);(4)与模型组比较,电针组和抑制剂组核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3及半胱天冬氨酸蛋白酶1表达水平降低(P均<0.05);(5)表明电针可通过减少小胶质细胞水平、减少炎症反应、下调核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3/半胱天冬氨酸蛋白酶1表达、减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经元焦亡,发挥神经保护作用。

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素-1β和其相关因子及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶表达的影响

目的:研究三七总皂苷(Panax notoginsengsaponins,PNS)对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-1受体Ⅰ型(interleukin-1 receptor typeⅠ,IL-1RⅠ)、白细胞介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1ra)、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteinyl-aspartate specific protease,caspase)-1、3、8 mRNA表达的影响。方法:采用颈内动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,在脑缺血前5 min和脑缺血后12 h分别腹腔注射给药1次。在脑缺血2 h再灌注22 h后,以逆转录-聚合酶链反应测定缺血脑组织IL-1β、IL-1RⅠ、IL-1ra、ICAM-1和caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果:在脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组脑组织IL-1β、IL-1RⅠ、IL-1ra、ICAM-1和caspase-1、3、8 mRNA表达较假手术组均增强(P<0.05或P<0.01)。PNS组脑组织IL-1β、IL-1ra和IL-1RⅠ表达低于模型组,高于假手术组,与模型组和假手术组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);PNS组脑组织caspase-3表达低于模型组(P<0.05),但PNS对ICAM-1、caspase-1和caspase-8表达无明显影响。结论:PNS可抑制caspase-3的表达,同时对脑缺血后IL-1β及其相关炎症因子的表达有一定抑制作用,从而对缺血性脑损伤发挥保护作用。

新生儿缺氧缺血性脑病血清半胱氨酸蛋白酶-1、白细胞介素-1β、-18测定的意义

目的 探讨新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)血清半胱氨酸蛋白酶 1(caspase 1)、IL 1β、IL 18的变化及其与脑组织损伤程度的关系。方法 采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测HIE患儿 70例 (分轻、中、重 3组 )及正常对照组 2 2例新生儿d3血清cas pase 1、IL 1β和IL 18的水平。结果 1.与对照组比较 ,HIE各组血清caspase 1水平均显著增高 (P分别 <0 .0 5 ,<0 .0 1,<0 .0 1) ;HIE组间两两比较 ,中度与轻度组比较有显著差异 (P <0 .0 1) ;重度组与其他两组比较血清caspase 1水平均显著升高 (P <0 .0 1)。2 .HIE组血清IL 1β、IL 18与对照组比较 ,中、重度HIE组均显著增高 (P <0 .0 1) ;轻度HIE组与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。HIE组间血清IL 1β、IL 18两两比较 ,中度与轻度组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;重度组与其他两组比较均显著升高 (P均 <0 .0 1)。 3 .血清caspase 1与IL 1β及IL 18均呈显著正相关 (γ =0 .793 4 P <0 .0 0 0 1;γ =0 .6677,P <0 .0 1)。结论 血清caspase 1、IL 1β和IL 18测定有助于HIE的早期诊断及临床分度。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16F1细胞基因表达谱的影响

背景与目的:本实验室已证明蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)具有抗肿瘤侵袭转移作用,为了进一步阐明其分子机制,本研究利用高通量的基因芯片技术探讨sv-cystatin基因转染对小鼠黑色素瘤细胞(B16F1)基因表达谱的影响。方法:分别将pcDNA3.1/sv-cystatin及空载体pcDNA3.1转染B16F1细胞,建立稳定转染的B16F1/sv-cystatin及B16F1/pcDNA3.1细胞株,提取总mRNA,应用高通量的基因芯片技术检测差异表达基因,半定量RT-PCR法分别验证5个上调和5个下调的差异表达基因。结果:B16F1细胞经转染sv-cystatin后,共检测了1218个基因,其中有45个差异表达基因,21个基因表达上调(Ratio>3),24个基因表达下调(Ratio<0.5),这些基因的功能涉及细胞粘附迁移、细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等方面。10个差异表达基因的RT-PCR验证结果与基因芯片分析结果相符。结论:Sv-cystatin不仅具有抑制细胞外基质的作用,而且还具有细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等多种生物学功能。

半胱氨酸蛋白酶-1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用

目的:研究半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的作用。方法:SD大鼠32只,随机分为四组:正常对照组、SAP 6 h组、SAP 12 h组和SAP 18 h组。采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型。通过H ITACH I-7150型自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);采用ELISA法测定血清白细胞介素(IL)-1β水平;酶化学法测定肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性;半定量RT-PCR检测肝内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达。结果:造模后血清ALT、AST和IL-1β水平显著升高,并伴有肝组织MPO显著增加,与正常对照组相比,其差异均具有显著性意义(P<0.01)。正常对照组肝内可见Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达;SAP各组肝内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著上调(P<0.01),而且与肝损伤的严重程度相一致。结论:Caspase-1激活的细胞因子IL-1β及IL-18的过度表达在SAP肝损伤发病机制中发挥重要的作用。

五味苦参肠溶胶囊对溃疡性结肠炎小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶1、白细胞介素-1β蛋白的影响

目的观察新药五味苦参肠溶胶囊(composite sophora colon-soluble capsules,CSCC)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠结肠组织中半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(interleukin 1-beta,IL-1β)蛋白含量的影响。方法 BALB/C小鼠50只,随机分成模型组、空白对照组、五味苦参低剂量组[1.92 g/(kg·d)]、五味苦参中剂量组[3.84 g/(kg·d)]、五味苦参高剂量组[7.68 g/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余各组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液7 d,之后空白对照组与模型组采用0.9%氯化钠注射液灌肠7 d,中药组分别按高、中、低剂量进行CSCC灌肠7 d。各组取结肠组织观察病变程度,测量其结肠长度、结肠系数、脾系数,并行苏木精-伊红染色法染色、光镜下观察结肠组织病理变化,ELISA法检测小鼠结肠组织中Caspase-1、IL-1β的蛋白含量。结果结肠组织HE染色:与空白组相比,模型组结肠组织结构紊乱,杯状细胞减少,炎症细胞浸润,腺体破坏或消失、局部有水肿,而五味苦参各组炎症较轻。ELISA法检测:与模型组相比,五味苦参各组小鼠结肠组织中Caspase-1[(模型组vs中剂量组,(27.02±4.23)ng/L vs(22.73±1.68)ng/L,P<0.05]、IL-1β蛋白含量均有所降低[模型组vs中剂量组,(87.79±11.34)ng/L vs(75.49±8.41)ng/L,P<0.05]。结论五味苦参肠溶胶囊可降低DSS诱导的UC小鼠结肠组织中Caspase-1、IL-1β蛋白含量,减轻结肠组织的病理损伤。

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1活化在胆红素神经毒性中的作用研究

目的明确半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)活化是否参与胆红素神经毒性的发生机制;VX-765抑制caspase1活化是否能抑制胆红素神经毒性,发挥神经保护作用。方法建立胆红素脑病动物模型,Western blot检测脑组织caspase-1蛋白的表达,ELISA法检测炎症因子IL-1β的水平,免疫荧光染色检测脑组织中GFAP蛋白的表达;VX-765干预后动态观察各组新生鼠的神经系统临床表现,记录新生鼠体质量变化,评估生活能力。原代培养大鼠皮层星型胶质细胞分为胆红素组、VX-765组、对照组:改良MTT法检测细胞存活率,Western blot检测细胞caspase-1蛋白的表达,ELISA法检测培养液上清IL-1β的水平。结果胆红素脑病动物模型,建模后12 h,胆红素组较对照组,脑组织中活化型caspase-1表达增加(P<0.05),IL-1β水平增高(P<0.01),脑组织切片皮层区星型胶质细胞活化(P<0.05)。与胆红素组相比,VX-765组新生鼠建模后异常神经系统表现减少(P<0.01),生活能力改善(P<0.05)。原代培养大鼠皮层星型胶质细胞,胆红素干预6h后,活化型caspase-1表达显著高于对照组(P<0.05);与胆红素组相比,VX-765干预可抑制caspase-1活化(P<0.05),提高细胞存活率(P<0.05),减少培养液上清IL-1β的释放(P<0.01)。结论胆红素可诱导活化型caspase-1表达增加;VX-765抑制caspase-1活化可减轻胆红素神经毒性,提高原代培养星型胶质细胞存活率,减少炎症因子释放。

苯基烯丙基硫醚、亚砜和砜类化合物的合成及其抗锥体虫半胱氨酸蛋白酶活性

设计合成了 2 1个苯基烯丙基硫醚、亚砜和砜类化合物 ,并对其进行了抗锥体虫半胱氨酸蛋白酶的药理活性筛选 .实验表明化合物 (4) ,(11) ,(15 ) ,(18)和 (2 1)的活性较强 .

尿肾损伤分子-1及血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对急诊危重症患者急性肾损伤的预测价值

目的探讨应用尿肾损伤分子-1（kidney injur ymolecule-1，KIM-1）和血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CystainC，Cys—C）预测急诊危重症患者人院7d内发生急性肾损伤（acutekidneyinjury，AKI）的价值。方法入选2015—10～2016—10在北京朝阳医院急诊抢救室连续就诊的危重症患者232例，并且患者就诊时监测血肌酐（sell／mcreatinine，SCr）及尿量均在正常范围，同时测定患者的血清Cys—C、尿KIM-1水平，计算急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ（acutephysiologyandchronichealthevaluationII，APACHEII）。自人选之日起，连续监测7dSCr及尿量变化。依据全球改善肾脏病预后组织（kidneydiseaseimprovingglobaloutcomes，KDIGO）临床实践指南中的AKI诊断标准将患者分为AKI组（／Z=99）和非AKI组（／Z：133）。比较AKI组和非AKI组的尿KIM-1、血清Cys—C水平，同时比较AKI组的尿KIM-1和血清Cys—C在不同KDIGO分期中的水平。应用ROC曲线分析尿KIM-1、血清Cys—C对7d内发生AKI的预测价值。结果AKI组患者APACHElI评分明显高于非AKI组[（234-4）分VS．（184-4）分，P〈0．05]。AKI组尿KIM—l、血清Cys—C明显高于非AKI组，分别是[（26．6±9．7）rig／mLVS．（15．9±5．8）ng／mL，P〈0．001]，[（969．3±333．3）ng／mLVS．（632．2±270．4）ng／mL，P〈0．001]。AKI组中，尿KIM-1在KDIGO1期、2期、3期中分别为（19．3±9．3）ng／mL、（25．3±9．1）ng／mL、（31．0±7．7）ng／mL，各组问尿KIM-1水平差异有统计学意义（P〈0．05）。血清Cys—C在KDIGO1期、2期、3期中分别为（857．74-341．8）rig／mL、（956．74-382．6）ng／mL、（1031．74-295．5）ng／mL，1期和3期血清Cys—C水平差异有统计学意义（p〈0．05），其他组间差异无统计学意义。尿KIM-1与血清Cys—C是危重症患者7d内发生AKI的独立预测因素。尿KIM-1预测AKI发生的ROC曲线下面积（0．823）虽然高于血清Cys—C（0．781），但是差异无统计学意义（P〉0．05）。结论监测尿KIM-1和血清Cys—C能有效地预测急诊危重症患者7d内AKI的发生；与血清Cys—C比较，尿KIM-1水平更能反映AKI的严重程度。

磷酸化ERK1/2对帕金森病模型小鼠黑质半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质中半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的调控作用。方法建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、caspase-3和p-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平以及caspase-3酶活性改变,并观察给予p-ERK1/2特异性抑制剂U0126对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型小鼠出现典型PD症状,TH蛋白水平下降约28.2%(P=0.009),p-ERK1/2、caspase-3阳性细胞及蛋白水平显著增加(P<0.01);经ERK1/2抑制剂U0126处理后,上述变化均显著减轻(P<0.01)。结论 P-ERK1/2对MPTP诱导的PD小鼠黑质caspase-3表达可能有调控作用,U0126对PD小鼠具有一定的神经保护作用。

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1活性的影响

观察同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶 1活性的影响 ,并探讨其作用机制。采用体外培养的大鼠血管平滑肌细胞 ,加入不同浓度的同型半胱氨酸作用 4 8h ,通过酶谱分析和半定量逆转录聚合酶链反应的方法观察同型半胱氨酸对基质金属蛋白酶 1活性及其mRNA表达的影响。结果发现 ,同型半胱氨酸抑制基质金属蛋白酶 1活性 ,下调其mRNA表达 ,并有剂量依赖效应。提示同型半胱氨酸通过减少基质金属蛋白酶 1的合成 ,抑制其活性 ,从而减少胶原降解而使胶原蓄积。表明同型半胱氨酸减少胶原降解可能是致动脉粥样硬化的发病机制之一。

巴西橡胶树半胱氨酸蛋白酶基因(HbCP1)的原核表达分析

为研究巴西橡胶树半胱氨酸蛋白酶生物学功能,利用笔者从橡胶树中克隆的半胱氨酸蛋白酶基因(HbCP1)(GenBank登录号:DQ642886)序列,构建了HbCP1基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。结果表明,HbCP1基因在大肠杆菌中的表达产物具有生理毒性,抑制大肠杆菌的生长,初步确认RTX结构域是导致HbCP1表达产物具有生理毒性的原因。

股骨头坏死患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、1型纤溶酶原激活物抑制剂水平及其与骨密度、骨钙素相关性分析

目的探讨股骨头坏死患者血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平,分析其与患者骨密度、骨钙素的相关性。方法选取自2018年1月至2019年12月河北省沧州中西医结合医院收治的74例股骨头坏死患者为观察组,同时,选取同期于我院进行体检的68例健康者为健康组。根据Ficat分期标准将观察组分为Ⅱ期组(n=22)、Ⅲ期组(n=28)、Ⅳ期组(n=24)。检测并比较健康组与观察组血清Cys-C、PAI-1、骨钙素水平及骨密度。比较不同Ficat分期患者血清Cys-C、PAI-1、骨钙素水平及骨密度,并分析血清Cys-C、PAI-1与骨密度、骨钙素的相关性。结果观察组血清Cys-C、PAI-1、骨钙素水平显著高于健康组,骨密度低于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组、Ⅳ期组血清Cys-C、PAI-1、骨钙素水平显著高于Ⅱ期组,且Ⅳ期组高于Ⅲ期组;Ⅲ期组、Ⅳ期组骨密度显著低于Ⅱ期组,且Ⅳ期组低于Ⅲ期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清Cys-C、PAI-1与骨密度呈负相关(r=-0.442,r=-0.435,P<0.05);血清Cys-C、PAI-1与骨钙素呈正相关(r=0.788,r=0.634,P<0.05)。结论股骨头坏死患者血清Cys-C、PAI-1的表达水平与骨密度、骨钙素存在密切关系,可促使疾病进展。

斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达

目的构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDSPAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫原性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RTPCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比对。根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行T/A克隆,阳性克隆质粒经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果SDSPAGE显示,经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋白带型未见明显差异,但经诱导表达的阳性克隆菌株的22ku蛋白条带比另两菌株明显,免疫印迹证实,该蛋白条带可与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生强阳性反应。结论成功构建了含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的pET22b(+)载体,经诱导表达的融合蛋白能与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生较强的免疫反应。