急性脑梗死患者血清微小RNA-124和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9水平与预后相关

目的:探讨急性脑梗死(ACI)患者血清微小RNA-124(miR-124)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的关系,及二者对患者预后的预测价值。方法:收集216例ACI患者为研究对象,选择同期健康体检者86例为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测患者血清miR-124水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清Caspase-9及炎性因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、正五聚蛋白(PTX)-3水平。ACI患者根据6个月随访结果分为预后良好组152例和预后不良组64例;分析预后不良组患者血清miR-124、Caspase-9表达水平与炎性因子相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-124、Caspase-9表达水平对患者预后的预测价值;采用Logistic回归方程分析影响预后的因素。结果:预后不良组患者miR-124、Caspase-9、hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3高于预后良好组和对照组,低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及冠心病、糖尿病、大血管闭塞患者比例高于预后良好组(P均<0.05)。预后不良组患者血清miR-124与Caspase-9水平呈正相关(r=0.582,P<0.05),且二者与hs-CRP、TNF-α、IL-6、PTX-3水平呈正相关(P均<0.05)。血清miR-124、Caspase-9水平预测ACI患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.906、0.836,特异性分别为77.6%、88.8%,灵敏度分别为89.1%、71.9%;二者联合预测的AUC为0.920,特异性为90.8%,灵敏度为81.3%。miR-124、Caspase-9、LDL-C、冠心病、糖尿病、大血管闭塞是ACI患者发生不良预后的危险因素(P均<0.05)。结论:联合检测血清miR-124、Caspase-9水平可能有助于早期预测ACI患者预后。

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9的研究进展

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)是一类半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶族,该家族是执行细胞凋亡的主要酶类,近年来的研究发现,该酶参与多种疾病的发生发展,尤其是肿瘤、自身免疫性疾病和病理性瘢痕。caspase-9是该家族中的启动分子,在凋亡途径中起了重要的作用,本文综述caspase-9的结构特点、活化与调节,以及导致凋亡的机制和与临床上部分疾病的关系。

尖锐湿疣患者皮损组织中杆状病毒凋亡抑制蛋白5、胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达及其临床意义

目的 通过检测尖锐湿疣患者皮损组织中杆状病毒凋亡抑制蛋白5(BIRC5)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(CASP9)表达变化,分析其临床意义。方法 选取2018年1月至2021年10月杭州市余杭区第二人民医院诊治的110例尖锐湿疣患者设为尖锐湿疣组,治疗后观察3个月,其中有39例复发(复发组)、71例未复发(未复发组)。对照组(n=80)为行外阴整形术的32例女性及行包皮环切术的48例男性,皆于术中留取正常组织。比较各组BIRC5、CASP9表达水平,并分析BIRC5、CASP9表达与尖锐湿疣患者临床病理参数的关系。采用受试者工作特征曲线评估BIRC5、CASP9对治疗后复发的诊断价值。结果 尖锐湿疣组皮损组织BIRC5表达水平高于对照组,CASP9表达水平低于对照组(P<0.05)。人乳头瘤病毒混合感染、疣体团体直径≥10mm、病程≥3个月的尖锐湿疣患者BIRC5表达水平较高,CASP9表达水平较低(P<0.05)。复发组BIRC5表达水平高于未复发组,CASP9表达水平低于未复发组(P<0.05)。BIRC5联合CASP9诊断复发的曲线下面积为0.966。结论 BIRC5、CASP9在尖锐湿疣患者皮损组织中异常表达,复发患者BIRC5表达水平高于未复发患者,CASP9表达水平低于未复发患者,BIRC5联合CASP9对治疗后复发有一定诊断价值,并可能参与尖锐湿疣的发生、发展过程。

周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导

背景:功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建,以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者,周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡,而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。目的:明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。方法:以大鼠L6成肌细胞为实验对象,在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,通过多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞持续施加1,6,12,24 h的周期性张应力,不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况;运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。结果与结论:倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好,细胞无变性并且脱落率极低,说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示,随着加力时间的延长,半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加,而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。

合并2型糖尿病对椎间盘退变患者血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9、B细胞淋巴瘤2表达水平的影响及其临床意义

目的探讨合并2型糖尿病对椎间盘退变患者血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达水平的影响及其临床意义。方法根据是否合并2型糖尿病将343例椎间盘退变患者分为2型糖尿病组216例,非2型糖尿病组127例。比较两组血清Caspase-9、Bcl-2及炎症因子表达水平,以及腰椎间盘退变程度,分析2型糖尿病合并椎间盘退变患者血清Caspase-9、Bcl-2水平与椎间盘退变程度Pfirrmann评分的相关性以及两组患者Caspase-9和Bcl-2水平的相关性。结果 2型糖尿病组患者血清Caspase-9、白细胞介素(IL)-6、IL-18、C反应蛋白水平均高于非2型糖尿病组,血清Bcl-2水平低于非2型糖尿病组;2型糖尿病组患者L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均高于非2型糖尿病组。2型糖尿病合并椎间盘退变患者血清Caspase-9水平与L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均呈正相关,血清Bcl-2水平与L_(1/2)、L_(2/3)、L_(3/4)、L_(4/5)、L_(5)/S_(1)节段椎间盘Pfirrmann评分均呈负相关;两组患者血清Caspase-9水平与Bcl-2水平均呈负相关(均P<0.05)。结论患有2型糖尿病的椎间盘退变患者血清Caspase-9水平升高、Bcl-2水平降低,二者与椎间盘退变程度有关,可能共同调节细胞凋亡,从而加重椎间盘退变的程度。

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后半胱氨酸蛋白酶9及热休克蛋白-90的表达

目的探讨大鼠半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）及热休克蛋白-90（HSP-90）的表达。方法将200~250g的SD雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组和局灶性脑缺血再灌注组，根据各组的再灌注时间，将每个组分为4个亚组，即6、24、48、和72h四个亚组；采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注的损伤模型，行酶联免疫学检测（ELISA）法检测大鼠Caspase-9及HSP-90的表达的变化。结果ELISA法观察大鼠脑细胞Caspase-9、HSP-90含量的变化，Caspase-9及HSP-90表达在假手术组为弱表达，在局灶性脑缺血再灌注组的表达在24～48h达高峰，72h开始下降。假手术组与正常对照组相比结果差异无统计学意义。脑缺血再灌流后，随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至48h达高峰；在缺血半暗带区，再灌流后神经细胞HSP-90和Caspase-9表达逐渐增强，到48h阳性细胞数目最多。结论脑缺血再灌流后神经细胞凋亡是一个动态的渐进过程。HSP-90和Caspase-9基因表达在介导细胞凋亡过程中起重要作用。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质caspase-9、脑红蛋白表达和过氧化损伤的影响

目的:探讨不同浓度半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)对大鼠损伤大脑皮质组织caspase-9和脑红蛋白(NGB)的表达、氧化损伤和脑组织形态学的影响。方法:大鼠按照随机数字表分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、CysC低、中、高浓度组。线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血2h再灌注24 h后行H-E染色,观察脑组织形态学变化;免疫组织化学法检测caspase-9的阳性细胞数;免疫组织荧光法检测皮质神经元NGB阳性细胞数;免疫印迹检测脑皮质组织中caspase-9蛋白的表达。羟胺法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力,化学比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量。结果:与I/R组相比,CysC低、CysC中浓度组caspase-9表达较I/R组明显减少;而CysC高浓度组caspase-9的表达明显升高,与I/R无明显差别。CysC低、CysC中浓度组caspase-9阳性细胞数较I/R组明显减少,NGB阳性细胞数较I/R组显著增多,SOD和GSH-PX活力升高,MDA含量下降;而CysC高浓度组caspase-9阳性细胞数增多,NGB阳性细胞数减少,SOD和GSH-PX活力降低,MDA含量升高;CysC高浓度组与I/R组相比,差异无统计学意义。结论:CysC低、中浓度可能通过上调NGB的表达,下调caspase-9的表达,减轻脑缺血再灌注后的自由基损伤。而浓度过高则作用相反。

TAp63对MPP^(+)处理的SH-SY5Y细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和酪氨酸羟化酶表达的影响

目的探讨TAp63基因表达水平对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导的帕金森病(PD)细胞模型细胞活性、酪氨酸羟化酶(TH)和凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的影响。方法将小鼠神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞系)依据不同处理方法分为6组:(1)对照组,无任何干预措施;(2)MPP^(+)处理组,MPP^(+)10μmol·L^(-1)处理24 h;(3)TAp63-NC组,用携带无义序列的慢病毒颗粒转染48 h;(4)TAp63-NC+MPP^(+)组,用携带无义序列的慢病毒颗粒转染48 h后,加MPP^(+)10μmol·L^(-1)处理24 h;(5)TAp63过表达组,用携带过表达TAp63基因的慢病毒颗粒转染48 h;(6)TAp63过表达+MPP^(+)组,用携带过表达TAp63基因的慢病毒颗粒转染48 h,换液后予以MPP^(+)10μmol·L^(-1)处理24 h。采用CCK-8法检测6组细胞的存活率;Western blot法检测TAp63、TH、caspase-9表达水平。结果CCK-8检测显示,与对照组比较,MPP^(+)组细胞活性显著下降(P<0.01)。与TAp63-NC+MPP^(+)组比较,TAp63过表达+MPP^(+)组细胞存活率升高,差异有显著统计学意义(P<0.001)。Western blot检测显示:与对照组比较,MPP^(+)组的TAp63蛋白和TH蛋白表达量降低,而caspase-9表达量升高(均P<0.05);与TAp63-NC+MPP^(+)组比较,TAp63过表达+MPP^(+)组TAp63蛋白和TH蛋白表达量升高,而caspase-9蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论TAp63基因过表达可提升MPP^(+)诱导的PD细胞的存活率,提高TH表达量,降低caspase-9表达水平,进一步发挥其潜在的神经保护作用。

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法调控P53/Caspase9通路抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用观察

目的观察5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力疗法调控肿瘤抑制因子(P53)/半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)通路抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长的作用。方法取40只裸小鼠,背部接种乳腺癌细胞株MCF-7制作荷瘤鼠模型,建模成功后随机分为5组,模型组(A组)、单纯激光照射组(B组)、低剂量5-ALA+激光照射组(C组)、中剂量5-ALA+激光照射组(D组)、高剂量5-ALA+激光照射组(E组)。C组、D组、E组分别给予瘤内注射10 mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg的5-ALA生理盐水溶液,A组、B组给予瘤内注射无菌生理盐水溶液,2 h后,B组、C组、D组、E组应用半导体激光治疗仪局部照射瘤体治疗。对比各组干预前、干预14 d时肿瘤体积,并比较B组、C组、D组、E组抑瘤率;苏木精-伊红染色法(HE)观察各组肿瘤组织病理学变化;采用原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)检测并对比各组肿瘤细胞凋亡率,分别采用实时荧光定量-聚合酶链反应法和蛋白免疫印迹法检测并对比肿瘤组织中P53、Caspase9 mRNA和蛋白表达情况。结果干预前各组肿瘤体积比较,差异均无统计学意义(P>0. 05),干预14 d各组肿瘤体积与干预前比较均显著较高(P <0. 05),干预14 d后肿瘤体积从小至大依次如下,E组、D组、C组、B组、A组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05);抑瘤率从高至低依次如下,E组、D组、C组、B组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05);组织病理学观察发现,A组瘤细胞丰富、排列拥挤呈条索状、血供丰富,细胞大小不一、核大而深染伴有核分裂相,C～E组肿瘤细胞数量较A组明显减少,细胞排列紊乱,且细胞核固缩、染色质淡染,其中E组变化最为明显,B组变化不明显;肿瘤细胞凋亡率、P53、Caspase9 mRNA和蛋白相对表达量从高至低依次如下,E组、D组、C组、B组、A组,每两组间比较差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论 5-ALA光动力疗法可显著抑制乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,其中20 mg/kg效果最佳,可能与上调P53、Caspase9 mRNA和蛋白表达、激活P53/Caspase9信号通路有关。

Caspase-9和CMYC在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及与患者病理特征和预后的关系

目的探讨半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因(CMYC)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达及其与患者病理特征和预后的关系。方法选取2017年2月至2020年2月周口市中心医院收治的60例DLBCL患者纳入研究,比较DLBCL肿瘤组织及病灶旁正常组织的Caspase-9、CMYC表达水平,分析Caspase-9、CMYC表达与临床病理特征的关系,比较预后良好和预后不良患者的临床病理特征、Caspase-9、CMYC表达水平,采用二元Logistic回归分析DLBCL患者预后不良的影响因素。结果DLBCL患者肿瘤组织中Caspase-9阳性率为43.33%,明显低于正常组织的80.56%,CMYC阳性率为36.67%,明显高于正常组织的13.88%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅱ期、国际预后指数(IPI)评分0~2分患者DLBCL肿瘤组织Caspase-9阳性率明显高于Ⅲ~Ⅳ期和3~4分患者,CMYC阳性率低于Ⅲ~Ⅳ期、3~4分患者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良患者Ann Arbor分期中Ⅲ~Ⅳ期占比、IPI评分中3~4分占比、CMYC阳性表达占比分别为73.08%、65.38%、69.23%,均高于预后良好组的35.29%、32.35%、11.76%,Caspase-9阳性表达占比为23.08%,低于预后良好组的58.82%,差异均有统计学意义(P<0.05);Ann Arbor分期、IPI评分、Caspase-9、CMYC均为影响DLBCL患者预后不良的独立影响因素(P<0.05),其中Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期预后不良风险是Ⅰ~Ⅱ期的9.008倍;IPI评分3~4分预后不良风险是0~2分的10.298倍;Caspase-9表达阳性预后不良风险是阴性的0.622倍;CMYC表达阳性预后不良风险是阴性的19.922倍。结论Caspase-9、CMYC异常表达参与DLBCL的进展,与肿瘤恶性程度有关,且Caspase-9、CMYC异常表达是DLBCL预后不良的独立影响因素,对DLBCL预后具有一定的预测价值,可作为预测DLBCL患者预后的参考指标。

鞘内注入布比卡因对孕鼠神经功能及背根神经节天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9 mRNA的影响

目的 研究鞘内注入布比卡因对孕鼠神经功能的影响,脊神经细胞的凋亡及其信号转导机制. 方法 取鞘内置管成功孕鼠18只,按完全随机分组方法分成3组（每组6只）,孕鼠对照组（PN组）、2％布比卡因组（P2B组）与4％布比卡因组（P4B组）.另取鞘内置管成功非孕鼠18只,按完全随机方法分成3组（每组6只）：非孕鼠对照组（N组）、2％布比卡因组（2B组）与4％布比卡因组（4B组）.PN组与N组：鞘内注射生理盐水30μl,其余4组相应鞘内分别注入2％或4％布比卡因30μl.鞘内注药后不同时间点测定甩尾反应潜伏期（tail-flick latency,TFL）,用最大效应百分比（maximal possible effect,MPE）表示,并进行下肢运动功能评分（motor function,MF）.4d后各组大鼠行断颈处死,分离背根神经节,逆转录-聚合酶链反应（reverse transcriptive polymerase chain reaction,RT-PCR）检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate specific protease,caspase）-8和caspase-9 mRNA的表达. 结果 注药后MPE随时间发生显著变化（P＜0.05）,而且分组与时间之间存在交互作用（P＜0.05）,10 min～2 h之间,2B组、4B组、P2B组和P4B组MPE均高于N组和PN组（P＜0.05）,在1h时点,P2B组和P4B组MPE均高于N组、PN组、2B组和4B组（P＜0.05）;在10 min～4 h之间2B组、4B组、P2B组和P4B组MF评分较N组与PN组均明显升高;与N组（851 ±201）和PN组（755±289）比较,2B组（3 852±1 247）,4B组（4 273±1 513）,P2B组（4 507±1 437）和P4B组（5 147±1 780） caspase-9 mRNA表达均上调（P＜0.05）. 结论 妊娠期间孕鼠背根神经节细胞对布比卡因的阻滞效能敏感性增大.鞘内注入相同浓度和剂量布比卡因,孕鼠感觉、运动神经阻滞持续时间明显长于非孕鼠.鞘内注入布比卡因会导致大鼠背根神经节内caspase-9 mRNA表达上调.

丁苯酞对大鼠急性一氧化碳中毒后半胱氨酸蛋白酶-3和半胱氨酸蛋白酶-9表达的影响

目的研究丁苯酞对大鼠急性重度CO中毒后脑组织中半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)表达的影响。方法通过数字表法将大鼠随机分为3组:正常组、模型组和实验组(均n=10)。用CO染毒法制作大鼠急性重度CO中毒模型。实验组大鼠给予丁苯酞80 mg·kg^(-1),灌胃1次/天,连续7 d,正常组和模型组给予等量的0.9%NaCl。在7 d后,用免疫组化染色法观测Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数,用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测Caspase-3和Caspase-9mRNA和蛋白的表达水平。结果正常组大鼠脑组织中Caspase-3和Caspase-9的阳性细胞数分别为4.98±1.34,8.65±1.89,mRNA表达水平分别为0.19±0.02,0.18±0.03,蛋白表达水平分别为0.09±0.01,0.08±0.01;模型组大鼠脑组织中Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数分别为29.43±4.53,40.45±5.23,mRNA表达水平分别为0.47±0.05,0.75±0.05,蛋白表达水平分别为0.78±0.05,0.86±0.07。与正常组对比,模型组的Caspase-3和Caspase-9mRNA和蛋白表达水平显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验组大鼠脑组织中的Caspase-3和Caspase-9阳性细胞数分别为22.26±3.12,25.09±4.25,mRNA表达水平分别为0.35±0.05,0.41±0.05,蛋白表达水平分别为0.37±0.02,0.45±0.02,与模型组对比,Caspase-3和Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平较明显下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论丁苯酞可通过下调Caspase-3和Caspase-9的表达水平来抑制神经细胞凋亡进程,从而减轻CO对大鼠脑神经的损害。

凋亡蛋白酶活化因子1及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9在卵巢浆液性癌中的表达及临床意义

目的 探讨凋亡蛋白酶活化因子1（Apaf-1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（Caspase-9）在卵巢浆液性癌（OSC）中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测45例OSC,60例卵巢浆液性囊腺瘤和32例卵巢交界性浆液性囊腺瘤中Apaf-1和Caspase-9蛋白的表达,分析两者的表达与OSC临床病理特征的关系以及Apaf-1和Caspase-9在OSC中表达的相关性.结果 Apaf-1在OSC、囊腺瘤和交界性囊腺瘤表达的阳性率分别为24.4%（11/45）、75.0%（45/60）和46.9%（15/32）,差异有统计学意义（χ2=26.734,P〈0.01）.Apaf-1与OSC的病理分级、临床分期及淋巴结转移有关（χ2值分别为6.318、7.565、5.554,P均〈0.05）;Caspase-9在OSC中、囊腺瘤和交界性囊腺瘤的表达率分别为28.9%（13/45）、83.3%（50/60）和56.3%（18/32）,差异有统计学意义（χ2=31.682,P〈0.01）.Caspase-9与OSC的病理分级、临床分期及淋巴结转移有关（χ2值分别为5.750、4.391、5.466,P均〈0.05）.在OSC中Apaf-1和Capase-9的表达呈正相关（k=0.433,P=0.003）.结论 Apaf-1和Caspase-9在OSC中低表达,可能与OSC的发生、发展有关.

灯盏花素对缺血再灌注大鼠心肌Caspase-9蛋白及mRNA表达的影响

目的观察灯盏花素(Bre)对缺血再灌注(IR)大鼠心肌Caspase-9蛋白及mRNA表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BreⅠ组(25 mg.kg-1.d-1腹腔注射,7 d)和BreⅡ组(50 mg.kg-1.d-1腹腔注射,连续7 d)。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌IR模型。应用TTC染色的方法检测各组大鼠心肌梗死面积,western印迹技术检测大鼠心肌组织Caspase-9蛋白表达的变化,RT-PCR技术检测大鼠心肌组织Caspase-9 mRNA表达的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌梗死面积明显增加(P<0.01),Bre明显改善了IR大鼠心肌梗死面积,BreⅡ组比BreⅠ组心肌梗死面积小(P<0.05);模型组大鼠的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平较假手术组明显增加(P<0.01),Bre组大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平较模型组明显减少(P<0.01)且BreⅡ组大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达水平比BreⅠ组减少(P<0.05)。结论 Bre可以减轻IR大鼠心肌梗死面积,其机制可能与减少大鼠心肌的Caspase-9蛋白及mRNA表达有关。Bre对IR损伤心肌的保护作用呈剂量依赖性。

前蛋白转化酶枯草溶菌素9参与Caspase-3活化的生物信息学分析

目的研究前蛋白转化酶枯草溶菌素9促凋亡的作用是否与活化凋亡通路Caspase-3相关。方法用80mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育人脐静脉内皮细胞24h,同时设空白对照组、转染试剂组、阴性对照组和80nmol/L前蛋白转化酶枯草溶菌素9siRNA+80mg/L氧化型低密度脂蛋白组,流式细胞术测定细胞凋亡率,免疫印迹法和酶联免疫吸附法分别检测Caspase-3的表达及活性。然后通过生物信息学方法对前蛋白转化酶枯草溶菌素9与Caspase-8和Caspase-9进行比较,找出它们之间的序列相似程度,以及是否存在共同的功能结构域。结果前蛋白转化酶枯草溶菌素9siRNA能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的Caspase-3蛋白表达和活性增加。生物信息学分析表明,前蛋白转化酶枯草溶菌素9、Caspase-8、Caspase-9三者的序列同源性高达22.14%,三者在C端的二级结构十分接近,特别是前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9的螺旋、片层、转角、无规则卷曲含量十分接近,三级结构分析发现前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9的外观轮廓相近,且在腹部中央都有一个裂口,显示前蛋白转化酶枯草溶菌素9和Caspase-9可能具有相同的酶切活性。结论前蛋白转化酶枯草溶菌素9具有与Caspase-9相似的功能结构域,可能具有激活Caspase-3的功能。

心理应激对大鼠髁突软骨中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9表达的影响

目的探讨心理应激对大鼠髁突软骨中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)表达的影响。方法将48只雄性SD大鼠用随机数表法随机分为6组:心理应激组(1、5和9周)及空白对照组(1、5和9周),每组各8只。应激组大鼠予以慢性不可预见性应激相应周数,应激完成后经旷场实验及糖水偏嗜度实验观察大鼠抑郁情况,数据通过重复测量的方差分析进行处理,随后处死相应时间点对照组及应激组大鼠,采用免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹法了解髁突软骨细胞中caspase-9的表达情况,两对应时间点的数据通过两独立样本t检验进行分析。结果实验中,心理应激组大鼠应激1周后即已开始出现总移动距离减少(t=8.676,P=0.011)、中间格停留时间缩短(t=5.091,P=0.041)、糖水偏嗜度降低(t=10.150,P<0.001)等抑郁样改变,且大鼠髁突表面不整、出现了细胞胶原纤维松解的病理表现;应激5周时大鼠髁突胶原破坏持续存在,应激9周时大鼠髁突内软骨细胞减少,出现了无细胞的空白区域;且各时间点应激组髁突中caspase-9的表达均高于相应时间点的空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论心理应激可导致大鼠出现活动减少、糖水偏嗜度降低等抑郁样改变,且大鼠髁突软骨中caspase-9的表达明显升高,这可能是应激导致颞下颌关节损伤的机制之一。

Caspase 8和9在肿瘤局部微环境形成早期与调控蛋白Twist1的关联性

目的：研究Caspase 8、9在肿瘤局部微环境早期线形程序性坏死（LPPCN）及血管生成拟态（VM）形成中对上皮-间充质转变（EMT）调控蛋白Twist1表达的影响。方法：将96只C57BL小鼠随机分为Caspase 8抑制剂组、Caspase 9抑制剂组、Caspase 8、9抑制剂联合用药组（联合组）和对照组,制备小鼠荷瘤模型。采用免疫组织化学法检测EMT调控蛋白Twist1在LPPCN和VM周围第1-4层肿瘤细胞的表达水平。结果：4组LPPCN周围第1-4层肿瘤细胞Twist1核阳性染色指数差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,且呈递减趋势;对于同层肿瘤细胞,联合组和对照组的细胞核Twist1阳性染色指数比较差别有统计学意义（均P〈0.01）。LPPCN、VM周围第1-4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞浆Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义（均P〉0.05）;VM周围第1-4层肿瘤细胞、同一层不同组的肿瘤细胞核Twist1阳性染色指数差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论：Caspase 8、9介导的凋亡机制启动与EMT发生存在关联性。

不同碘缺乏大鼠肾组织UCP2及caspase-9蛋白的表达

目的:观察不同碘缺乏大鼠肾组织UCP2、caspase-9蛋白的表达,探讨二者表达的相关性。方法:雌性Wistar大鼠随机分为轻度缺碘组、重度缺碘组及正常对照组,总碘摄入量分别为5、1.24、10μg/d,采用RT-PCR、免疫组化等方法检测大鼠离体肾脏UCP2及caspase-9蛋白的表达,并分析二者表达的相关性。结果:与正常对照组相比,碘缺乏大鼠肾组织UCP2基因、蛋白表达水平下降,caspase-9蛋白表达增加(P<0.05),远端肾小管、髓质肾小管改变更明显;且caspase-9蛋白表达与UCP2表达负相关。结论:碘缺乏导致大鼠肾组织UCP2表达下降,可能与凋亡蛋白caspase-9表达增加有关。

高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织NCX1、LC3 Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达观察

目的观察高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织钠钙交换蛋白1(NCX1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、自噬相关基因Beclin-1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)蛋白表达。方法清洁级健康雄性SD大鼠40只随机分为A、B、C、D组各10只;A组制作高脂血症性急性胰腺炎模型,B组制作急性胰腺炎模型、C组制作高脂血症模型,D组仅禁食、禁饮后麻醉大鼠,1 m L/kg注射生理盐水。造模12 h时处死各组大鼠取胰腺组织,采用Western blotting法检测各组胰腺组织NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白。结果 A、B组NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量均高于C、D组,P均<0.05。A组LC3 II、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9蛋白的相对表达量均高于B组,P均<0.05。C、D两组NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9比较,P均>0.05。结论高脂血症性急性胰腺炎大鼠胰腺组织中NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9均高表达。NCX1、LC3Ⅱ、Beclin-1、Caspase-3、Caspase-9可能在高脂血症性急性胰腺炎的发生发展中发挥作用。

肺结节组织中Caspase 3和Caspase9蛋白表达在良恶性诊断及肺癌临床病理特征中的价值研究

目的探讨肺结节组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspastic acid-specific protease,Caspase)3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspastic acid-specific protease,Caspase)9蛋白表达在其良恶性诊断及肺癌临床病理特征中的价值研究。方法选择2018年1月~2020年7月在陕西省森工医院诊治的86例肺结节患者作为研究对象,并根据病理诊断结果分为良性结节46例(良性组)和恶性结节40例(恶性组)。然后采用免疫组织化学法检测两组患者肺结节组织中Caspase 3,Caspase 9蛋白表达情况,调查恶性肺结节的病理特征,并进一步分析Caspase 3和Caspase 9表达阳性率与病理特征的相关性。结果恶性组的Caspase 3和Caspase 9表达阳性率分别为70.0%和82.5%,显著高于对照组(13.0%,15.2%),差异均有统计学意义(χ^(2)=29.035,38.932,均P<0.001)。在恶性组中,不同组织学分化、淋巴结转移、临床分期患者的Caspase 3,Caspase 9表达阳性率对比差异有统计学意义(χ^(2)=5.614~15.920,均P<0.05)。Pearson相关性分析显示组织学分化、淋巴结转移、临床分期与Caspase 3,Caspase 9表达阳性率均呈显著正相关(r=0.591~0.762,均P<0.05)。结论肺结节组织中Caspase 3,Caspase 9蛋白呈现高表达状况,也与患者的病理特征存在相关性,因此其临床检测有利于肺结节良恶性的临床鉴别诊断。