半胱氨酸酶-3在依托利酸诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨选择性环氧合酶 (COX)抑制剂依托利酸 (etodolac)诱导肝癌SMMC772 1细胞凋亡的分子机制。方法 采用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳法测定细胞凋亡情况 ;West ernblotting法检测不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax表达的变化 ;并以流式细胞术检测半胱氨酸酶 3 (Caspase 3 )酶活性的变化。 结果 流式细胞术显示etodolac(0、0 .2 5、0 .5 0、1.0 0、2 .0 0mmol/L)作用SMMC772 1细胞 48h后 ,对照处理组 (0mmol/L)没有出现凋亡峰 ,其余各组(0 .2 5、0 .5 0、1.0 0、2 .0 0mmol/L)出现明显的凋亡峰 ,其凋亡率分别为 (16.3± 3 .1) %、(19.9±3 .6) %、(2 2 .9± 3 .2 ) %、(3 1.2± 3 .3 ) % (P <0 .0 0 1) ;DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNALad der ;不同浓度etodolac处理后凋亡相关蛋白Bcl 2表达下降 ,Bax表达增加 ;随着etodolac处理浓度的增加 ,表达活性Caspase 3的细胞百分率分别为 (3 .61± 0 .3 2 ) %、(2 .93± 0 .15 ) %、(10 .2 9±0 .3 9) %、(2 7.3 3± 1.2 8) %、(5 7.40± 1.69) % (P <0 .0 0 1)。结论 选择性COX 2抑制剂可能通过调节Bcl 2、Bax蛋白表达活化Caspase 3 ,从而诱导肝癌SMMC772 1细胞凋亡。

西洛他唑对全脑缺血大鼠海马磷酸化蛋白激酶B及半胱氨酸天冬酶-3表达的影响

目的研究西洛他唑对全脑缺血大鼠海马磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)的影响。方法用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。将112只(模型成功率为75(,死亡后补充动物)约300g的健康成年SD大鼠随机分为3组:假手术组(n=16)、缺血模型对照组(n=48)及治疗组(n=48)。治疗组于缺血前6h和2h各灌胃给予1次西洛他唑,以后每隔24h在相应时间点给药,其它各组灌胃给予等量二甲基亚砜。缺血模型对照组和治疗组于缺血10min再灌注0h、1h、12h、24h、72h、7d后断头取脑,免疫组织化学方法分析再灌注后不同时间点海马CA1区p-Akt和再灌注后caspase-3表达水平的变化。结果全脑缺血后0h、1h,治疗组海马CA1区p-Akt平均光密度值明显高于模型组(P<0.01;P<0.05)。缺血后24h、72h、7d,治疗组海马CA1区caspase-3平均阳性细胞数明显低于模型组(P<0.05)。结论西洛他唑可以降低大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区caspase-3表达水平,并可抑制再灌注后p-Akt水平的急剧降低。

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。

砷对大鼠生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3表达及血清中黄体生成素浓度的影响

目的研究亚慢性砷中毒对大鼠睾丸生精细胞半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)表达及血清黄体生成素(LH)的影响。方法将40只健康成年清洁级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为对照组(蒸馏水)组和0.4、2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组,每组10只,采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒14周。测定大鼠血清LH浓度及生精细胞caspase-3阳性率。结果与对照组比较,各剂量亚砷酸钠染毒组大鼠生精细胞caspase-3阳性率均较高,2、10 mg/kg亚砷酸钠染毒组大鼠血清LH浓度均较低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);且随着亚砷酸钠暴露剂量的升高,大鼠生精细胞caspase-3阳性率呈上升趋势,血清LH浓度呈下降趋势。结论砷暴露导致的生精细胞caspase-3表达增加可能是其雄性生殖毒性效应的机制之一。

锰对大鼠生精细胞半胱氨酰天冬氨酸酶-3和细胞色素C表达的影响

目的研究锰对大鼠生精细胞中半胱氨酰天冬氨酸酶-3(caspase-3)和细胞色素C(cytochrome-c)表达的影响。方法将健康雄性清洁级SD大鼠48只随机分为高(30mg/kg)、低剂量(15mg/kg)MnCl2染毒组和空白对照组(生理盐水),每组16只。采用腹腔注射方式染毒,每天1次,每周5天,连续染毒6周。分别于染毒第4、6周末称重,处死大鼠,分离睾丸,采用免疫组化法检测睾丸生精细胞中caspase-3与cytochrome-c的阳性细胞率。并进行病理学观察。结果与空白对照组比较,高、低剂量MnCl2染毒组大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且随着锰染毒剂量的升高,大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率呈上升趋势,cytochrome-c阳性细胞率呈下降趋势。与染锰第4周比较,高、低剂量MnCl2染毒组第6周大鼠生精细胞中caspase-3阳性细胞率均升高,cytochrome-c阳性细胞率均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。直线相关分析发现,各组大鼠生精细胞caspase-3阳性细胞率与cytochrome-c阳性细胞率呈显著负相关(r=-0.876,P<0.01)。结论染锰可通过线粒体途径促进大鼠生精细胞caspase-3表达,而降低cytochrome-c表达,且存在一定的剂量-效应和时间-效应关系。这可能是导致大鼠生精障碍的主要机制之一。

血清同型半胱氨酸和半胱氨酸天冬酶-3水平与慢性阻塞性肺疾病患者认知障碍的关系研究

背景血清同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)水平与神经退行性病变有关,但二者与慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者认知障碍的关系尚未明确。目的分析血清Hcy和caspase-3水平与COPD患者认知障碍的关系。方法选取2016年1月—2019年6月邯郸市中心医院呼吸内科收治的COPD患者156例作为病例组,根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分将其分为A组58例(认知功能正常)、B组65例(轻度认知障碍)及C组33例(中重度认知障碍);另选取同期体检健康者150例作为对照组。比较病例组和对照组受试者动脉血气分析指标〔包括动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)及pH值〕、肺功能指标〔包括第1秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰值流速(PEF)、最大呼气中段流量(MMEF)及用力肺活量(FVC)〕、MoCA评分,对照组、A组、B组、C组受试者血清Hcy、caspase-3水平;血清Hcy和caspase-3水平与COPD患者MoCA评分的相关性分析采用Pearson相关分析;绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)以评价血清Hcy和caspase-3水平对COPD患者认知障碍的预测价值。结果(1)病例组患者PaO2、pH值低于对照组,PaCO2高于对照组,FEV1和FVC小于对照组,PEF和MMEF慢于对照组(P<0.05)。(2)病例组患者视空间与执行功能、命名、记忆、注意、语言、抽象思维、延时回忆、定向评分及MoCA总分均低于对照组(P<0.05)。(3)A组、B组、C组患者血清Hcy和caspase-3水平高于对照组,B组和C组患者血清Hcy和caspase-3水平高于A组,C组患者血清Hcy和caspase-3水平高于B组(P<0.05)。(4)Pearson相关分析结果显示,血清Hcy、caspase-3水平与COPD患者MoCA评分呈负相关(r值分别为-0.553、-0.567,P<0.01)。(5)ROC曲线显示,血清Hcy水平预测COPD患者认知障碍的曲线下面积(AUC)为0.781〔95%CI(0.695,0.886)〕,最佳截断值为13.56 ng/L,灵敏度、特异度分别为70.75%、92.62%;血清caspase-3水平预测COPD患者认知障碍的AUC为0.776〔95%CI(0.691,0.873)〕,最佳截断值为7.83 ng/L,灵敏度、特异度分别为71.34%、91.08%。结论血清Hcy和caspase-3水平与COPD患者认知功能呈负相关,且二者均对COPD患者认知障碍具有一定预测价值。

二氯醋酸二异丙胺对LPS/D-GalN致小鼠肝损伤的保护作用研究

目的研究二氯醋酸二异丙胺(DADA)对脂多糖(LPS)加D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导的小鼠肝细胞凋亡的作用及其机制。方法 D-GalN/LPS腹腔注射构建小鼠肝细胞凋亡模型。实验分为3组,各组注射D-GalN/LPS后6h,检测血清ALT、TBIL、TNF-α水平,TUNEL法与DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Western blotting检测Caspase-3、tBid、细胞色素C,在肝细胞浆中的表达。结果模型组与对照组相比,血中ALT、TBIL、TNF-α水平明显升高,肝细胞凋亡加重;肝细胞浆中,tBid、Caspase-3及细胞色素C的表达明显增加。与模型组相比,保护组肝功能改善,TNF-α水平明显降低;同时,肝细胞凋亡减轻,tBid、Caspase-3及细胞色素C的表达减少。结论 DADA可能通过下调TNF-α水平,抑制tBid的表达及细胞色素C的释放来减轻D-GalN/LPS诱导的肝细胞凋亡。

三氧化二砷和四乙铵对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a增殖和凋亡影响的研究

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)和四乙铵(tetraethylammonium,TEA)对人肺腺癌细胞AG-ZY-83-a增殖和凋亡的影响,探讨As2O3诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法体外细胞培养人肺腺癌AGZY-83-a细胞株,采用MTT法检测As2O3和TEA对细胞增殖的影响。透射电镜(TEM)、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况。比色法检测细胞内Caspase-3活性改变。结果As2O3和TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01)。As2O3组对AGZY-83-a细胞增殖抑制率低于TEA+As2O3组(P<0.05)。As2O3和TEA使AGZY-83-a细胞凋亡率,Caspase-3增加,单用As2O3组的细胞凋亡率、Caspase-3活性分别高于TEA+As2O3组(P<0.05)。结论应用TEA部分抑制了As2O3诱导AGZY-83-a细胞凋亡;As2O3诱导AGZY-83-a细胞凋亡可能和As2O3对细胞膜不同的钾离子通道作用有关系。

知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究

目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。

Livin、Caspase-3、MTA1在结肠癌组织中的表达及相关性的研究

目的探讨Livin、Caspase-3及MTA1蛋白的表达与结肠癌的临床病理学特征的关系,以及它们三者之间的相互关系。方法采用免疫组织化学染色方法检测88例结肠癌组织中Livin,Caspase-3及MTA1的表达情况。结果(1)结肠癌组织中Livin的阳性表达率显著高于癌旁组织,且Livin的表达与结肠癌的组织分化程度及淋巴结转移程度显著相关。(2)结肠癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率显著高于癌旁组织,且Caspase-3蛋白的表达与结肠癌的组织分化程度显著相关。(3)结肠癌组织中MTA1的阳性表达率显著高于癌旁组织,且MTA1的表达与结肠癌的组织分化程度及淋巴结转移程度显著相关。(4)Caspase-3蛋白的表达又与Livin的表达呈显著负相关。结论(1)Livin在结肠癌组织中过表达,它可能是促进结肠癌发生的重要因素之一。(2)Caspase-3蛋白在结肠癌组织中表达被抑制而降低,且与Livin的表达呈负相关。因此,抑制Caspase-3蛋白的活性是Livin促进结肠癌发生的途径之一。(3)MTA1对结肠癌的组织分化及淋巴转移发挥重要作用。

马齿苋多糖干预大鼠溃疡性结肠炎Caspase-3 Caspase-8表达的研究

目的:观察大鼠溃疡性结肠炎结肠黏膜上皮细胞凋亡及其凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8的表达,以及马齿苋多糖对上述指标的影响,探讨马齿苋多糖干预溃疡性结肠炎的效应机制。方法:48只雄性SD大鼠按体重随机分为正常组、模型组、治疗组,对照组,每组12只。用5%2,4,6TNBs100mg/kg灌肠建立大鼠UC模型,第3天开始,除正常组外,各组分别给予等剂量0.9%氯化钠、马齿苋多糖,惠迪(美沙拉嗪)处理,连续给药7天后处死动物。应用HE染色结合肉眼评价各组大鼠组织病理学变化;应用TUNEL染色技术检测结肠上皮细胞凋亡率;应用免疫组化染色技术检测Caspase-3、Caspase-8阳性表达。结果:结肠组织形态学评分表明,治疗组与对照组比较,无统计学意义(P>0.05);治疗组与模型组相比,有统计学意义(P<0.01)。治疗组结肠黏膜上皮细胞凋亡呈下降趋势,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。治疗组Caspase-3、Caspase-8蛋白阳性表达减少,与模型组比较,有统计学意义(P>0.05);与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。结论:马齿苋多糖可能通过下调结肠黏膜上皮细胞凋亡关键调控酶Caspase-3、Caspase-8的表达,延缓肠上皮细胞凋亡,促进肠黏膜屏障修复,发挥缓解溃疡性结肠炎的效应。

Calpain抑制剂-3对新生大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Caspase-3表达和神经元凋亡的影响

目的钙依赖中性蛋白酶Calpain的活化可引起神经元凋亡,其抑制剂3(MDL28170)对成年动物脑缺血有治疗作用,但尚不清楚MDL28170对新生动物缺氧缺血性脑损伤(HIBD)是否也有治疗作用。本研究观察了MDL28170对新生大鼠HIBD后海马CA1区Caspase3表达及细胞凋亡的影响,探讨其神经保护作用机制。方法将7日龄新生SD大鼠随机分为HIBD模型组(n=40)、干预组(n=40)及对照组(n=8),干预组在HI后0h、2h、4h予腹腔注射MDL2817050mg/kg,模型组和对照组同时予腹腔注射生理盐水。干预组和模型组大鼠在HI后6h、12h、24h、48h、72h各处死8只,用免疫组化染色和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测海马CA1区Caspase3的表达和神经凋亡。结果HIBD组大鼠损伤侧海马CA1区Caspase3阳性细胞在HI后6h时较对照组增多(13.4±3.5/HPvs2.6±0.6/HP,P=0.028),于48h(27.1±4.1/HP)达到高峰,72h仍高于对照组(22.6±4.8/HP,P<0.001);TUNEL阳性细胞于HI后6h开始增多,12h时与对照组比较差别有显著性(25.0±1.7/HPvs2.3±1.5/HP,P<0.001),48h(67.8±2.6/HP)到达高峰,72h仍处于较高水平(44.3±6.8/HP)。MDL28170干预可明显减少Caspase3及TUNEL阳性细胞数量,与模型组比较48h内差异有显著性,72h以后作用不明显。结论MDL28170可通过抑制海马CA1区Caspase3的表达,减少脑细胞凋亡,起到脑保护作用。

宫颈癌组织中钙激活中性蛋白酶6的表达及其与半胱氨酸天冬氨酸酶-3和微血管密度的相关性研究

目的探讨宫颈癌组织中钙激活中性蛋白酶6(Calpain 6)的表达及其与半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase-3)和微血管密度(MVD)的相关性。方法选择2011年1月-2015年12月安吉县人民医院(浙江医院安吉分院)妇产科宫颈癌组织标本120例作为宫颈癌组,正常宫颈标本120例作为对照组。采用免疫组化法测定组织中Calpain 6、caspase-3和MVD表达。结果宫颈癌组Calpain 6阳性率明显高于对照组(P<0.05),宫颈癌组caspase-3阳性率明显低于对照组(P<0.05),宫颈癌组MVD水平高于对照组(P<0.05)。有淋巴结转移、低分化、宫颈癌Ⅲ期者Calpain 6阳性率高于无淋巴结转移、中-高分化、宫颈癌Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。低分化者caspase-3阳性率低于中-高分化者(P<0.05)。有淋巴结转移、低分化程度、FIGO分期Ⅲ期、腺癌者的MVD水平高于无淋巴结转移、中-高分化程度、FIGOⅠ~Ⅱ期、鳞癌者(P<0.05)。宫颈组织中Calpain 6与caspase-3呈负相关(P<0.05),与MVD呈正相关(P<0.05)。结论宫颈癌组织中Calpain 6阳性率和MVD水平升高,caspase-3阳性率下降,宫颈组织中Calpain 6与caspase-3呈负相关,与MVD呈正相关。

补中益气汤对A549荷瘤小鼠脾脏上Caspase-3蛋白表达影响研究

目的研究补中益气汤对半胱氨酸天冬氨酸酶—3(Caspase—3)在人肺腺癌细胞株(A 549)荷瘤小鼠脾脏上表达的影响。方法随机对照法将24只A 549荷瘤BALB/c小鼠分为空白对照组,补中益气汤低剂量组、补中益气汤高剂量组,顺氯氨铂(cisplatin,DDP)组,补中益气汤每日给药2次连续10天,顺铂每日给药1次连续3天,在连续15天后将所有荷瘤小鼠的脾脏取出。将新鲜的脾脏组织固定后制作石蜡切片。免疫组织化学法检测各组脾组织中Caspase—3蛋白表达的部位与含量多少,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组组织中Caspase—3 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示与空白对照组相比,补中益气汤低剂量组Caspase—3蛋自的表达量显著增多(P<0.05),补中益气汤高剂量组蛋白的表达量增多(P<0.05)。而DDP组与空白对照组相比无统计学意义,DDP组与补中益气汤低剂量组、补中益气汤高剂量组相比的差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RT—PCR结果同免疫组化结果具有一致性。结论补中益气汤可增加A 549荷瘤小鼠脾脏上Caspase—3蛋白的表达,从而使Caspase—3诱导肿瘤细胞凋亡的作用增强。

姜黄素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及Caspase-3表达的影响

目的:观察姜黄素(Cur)对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化及对其肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法:采用皮下注射400g/L四氯化碳复制模型,造模后给予姜黄素治疗,观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级和血清生化学检测;免疫组化法测定肝组织中TGF-β1及Caspase-3蛋白表达的变化,RT-PCR检测肝组织中TGF-β1mRNA表达.结果:Cur治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组显著减轻(P<0.01);并且大鼠血清ALT(nkat/L),AST(nkat/L),ALP(nkat/L)水平明显降低[(757±234)vs(1677±252),(2776±238)vs(4865±403),(1850±191)vs(4310±728),P<0.05或P<0.01],A/G比值提高[(0.89±8.06)vs(0.60±7.48),P<0.05];Cur治疗组TGF-β1mRNA,TGF-β1表达较模型组显著下降[(3.13±1.55)vs(9.56±2.01),(0.32±0.12)vs(0.87±0.40),P<0.05或P<0.01];Caspase-3表达较模型组显著升高[(5.47±1.06)vs(1.56±0.61),P<0.05].结论:Cur对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TGF-β1表达、促进Caspase-3表达相关.

盐酸纳美芬对大脑中动脉缺血再灌注模型大鼠脑组织的作用及其机制研究

目的探究盐酸纳美芬对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型大鼠的神经保护作用。方法将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、盐酸纳美芬组,各12只。盐酸纳美芬组大鼠复制MCAO/R模型前10 min尾静脉注射20μg/kg盐酸纳美芬注射液,假手术组和模型组注射等体积生理盐水。随后除假手术组外,其余两组采用线栓法复制MCAO/R模型。采用Longa评分标准评估大鼠神经功能,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,苏木精-伊红(HE)染色和TUNEL染色观察脑组织病理变化和细胞凋亡情况,Western blotting检测脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果假手术组大鼠神经功能评分低于模型组和盐酸纳美芬组(P<0.05);盐酸纳美芬组大鼠神经功能评分低于模型组(P<0.05)。模型组、盐酸纳美芬组SOD活性低于假手术组(P<0.05),MDA含量高于假手术组(P<0.05);与模型组比较,盐酸纳美芬组SOD活性升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。HE染色结果显示,假手术组细胞轮廓清晰,排列有序;模型组细胞破损,数量减少,炎症浸润严重;盐酸纳美芬组细胞数量较多,轮廓清晰,炎症浸润减少。模型组、盐酸纳美芬组凋亡细胞数多于假手术组(P<0.05);盐酸纳美芬组凋亡细胞数少于模型组(P<0.05)。模型组、盐酸纳美芬组Caspase-3、Bax蛋白相对表达量高于假手术组(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量低于假手术组(P<0.05);与模型组相比,盐酸纳美芬组Caspase-3、Bax蛋白相对表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论盐酸纳美芬可以降低MCAO/R大鼠脑组织氧化应激水平,减少神经细胞凋亡,具有良好的神经保护作用,其作用机制与调节Caspase-3/Bcl-1/Bax通路有关。

P38MAPK信号通路对缺血预处理减轻神经元凋亡作用机制的研究

目的探讨通过缺血预处理抑制P38丝裂素活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路以减轻神经元凋亡的机制.方法将原代培养的神经元及星形胶质细胞进行缺血预处理,将常规条件下培养的星形胶质细胞培养基作为条件培养基1(ACM1);在分泌GDNF最多时,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基2(ACM2);GDNF基因经转染质粒沉默后提取其培养基,作为条件培养基3(ACM3),将P38MAPK的抑制剂SB203580加入ACM3中,制备成ACM4.将对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组神经元孵育在不同条件培养基中,AO/EB荧光染色检测神经元凋亡情况,Western blot法检测神经元p-P38MAPK及Caspase-3的表达.结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后神经元凋亡较ACM1和ACM3两组均减少(P<0.05).预处理+缺血组和缺血组凋亡的神经元明显多于另外两组(P<0.05),加入ACM1和ACM3两种培养基后凋亡率高于ACM2组(P<0.05).预处理+缺血组及缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-P38MAPK及Caspase-3的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-P38MAPK及Caspase-3蛋白表达低于另外两组(P<0.05).结论星形胶质细胞经过缺血预处理后GDNF分泌增多,通过抑制P38MAPK信号通路及Caspase-3的表达减少神经元凋亡,进而发挥内源性神经保护机制.

丁酸诱导结肠癌细胞凋亡机制的实验研究

目的:探讨膳食纤维在结肠中的酵解产物丁酸(butyrate)诱导人结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:人传代结肠癌细胞株SW 1116经不同浓度(0、2、3、4、7和10 mmol/L)丁酸处理后,在不同时段(6、24、48和72 h)分别收集细胞,用RT-PCR和W estern B lotting检测肿瘤细胞bcl-2和bax基因及其蛋白表达的变化,并用流式细胞仪和荧光定量法分别测定其p53蛋白浓度和caspase-3活性的变化。结果:实验过程中,肿瘤细胞的bc l-2 mRNA及其蛋白均无表达,但随着培养液中丁酸浓度的不断增加和培养时间的延长,其bax mRNA及其蛋白的表达则逐渐增强,同时伴有p53蛋白浓度和caspase-3活性的增加。结论:丁酸以p53依赖方式通过上调肿瘤细胞bax mRNA及其蛋白的表达而诱导SW 1116细胞凋亡。

多发性骨髓瘤细胞中c-IAP2表达及其相关研究

目的探讨细胞凋亡抑制蛋白-2(cellular inhibitor of apoptosis protein-2,c-IAP2)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发病机制中的作用,为MM治疗提供新的思路和理论依据。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-IAP2mRNA在MM患者中的表达,分析c-IAP2mRNA与半胱氨酸-天门东氨酸酶-3(cysteine-aspartic proteases-3,caspase-3)蛋白、核因子-κBp65(NF-κBp65)mRNA的相互关系。结果初诊MM患者的c-IAP2mRNA表达水平高于对照组(P<0.05),c-IAP2mRNA与NF-κBp65mRNA表达水平呈正相关(r=0.681),与caspase-3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.547)。结论c-IAP2mRNA在多发性骨髓瘤中高表达,与对照组相比差异有统计学意义,经分析表明c-IAP2基因在多发性骨髓瘤发病中可能具有促进作用。