半边旗叶绿体基因组及其结构分析

目的获得半边旗Pteris semipinnata L.叶绿体基因组序列信息,明确其叶绿体基因组的结构特点和系统进化关系。方法通过高通量测序技术进行半边旗叶绿体基因组的测序,使用生物信息学方法对其进行组装和注释,分析其密码子偏好性、简单重复序列,比较其与近缘物种的序列变异,并构建系统进化树。结果半边旗叶绿体基因组大小为162270 bp,为环状双链四分体结构,包括81963 bp的大单拷贝区,21125 bp的小单拷贝区,以及两个29591 bp的反向重复区。半边旗叶绿体基因组共注释到131个基因,其中蛋白编码基因88个,rRNA基因8个,tRNA基因35个。半边旗叶绿体基因组偏好使用以A/T碱基结尾的密码子,且检测到的59个简单重复序列中,以A或T碱基的单核苷酸重复为主。序列比对和系统进化分析显示半边旗与同属植物井栏边草、蜈蚣草同源性最高。结论该研究丰富了蕨类药用植物的叶绿体基因组资料,也为半边旗的物种鉴别、遗传多样性和进化发育等可持续性研究奠定了基础。

薄层色谱法鉴别半边旗和刺齿半边旗

目的:研究半边旗和刺齿半边旗化学成分的差异,促进用药安全、有效。方法:采用薄层色谱法,展开剂为石油醚∶丙酮∶冰醋酸(7∶3∶0.05)。结果:二者薄层斑点数目不同,荧光显色也有区别。结论:两种药材的化学成分有差异,不能盲目等同使用。

半边旗5种成分体外细胞毒活性比较及构效关系分析

用多种人癌细胞株以ＭＴＴ试验，体外筛选半边旗抗肿瘤活性成分。结果显示：化合物５Ｆ，６Ｆ，Ａ及半边旗乙醇提取物ＰＳＥ对５种人癌细胞均有不同程度的杀伤作用，且呈明显的剂量依赖关系。其中６Ｆ的活性最强，其次是Ａ，５Ｆ，而化合物４Ｆ和Ｂ对５种细胞均无细胞毒活性。分析它们的构效关系可以推测，αβ亚甲基环戊酮结构是其活性部位，结构中羟基数目和位置的不同可以影响化合物的活性强度。

半边旗中二萜类化合物的植化及抗肿瘤活性初步研究

目的：对半边旗中二萜类有效成分及抗肿瘤活性作进一步研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇氯仿（１０∶１）洗，减压浓缩后上硅胶柱，甲醇氯仿（９０∶２）洗脱，得纯化合物，经二维核磁共振（ＮＭＲ）确定了化合物的空间结构。以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定肿瘤细胞存活率，。ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：共分得５个化合物Ｂ，４Ｆ，５Ｆ，６Ｆ及Ａ，其中Ａ是新化合物，６Ｆ是首次从该植物中分离得到。５Ｆ，Ａ，６Ｆ明显抑制人白血病粒细胞ＨＬ６０，人低分化胃腺癌上皮细胞ＭＧＣ８０３、人低分化鼻咽癌上皮细胞ＣＮＥ２Ｚ和人肝癌上皮细胞ＢＥＬ７４０２的增殖，活性依次增强。６Ｆ对ＨＬ６０细胞的活性最强［ＩＣ５０为（０．０９±０．０１）μｍｏｌ·Ｌ－１］，阳性对照５Ｆｕ的ＩＣ５０为：（５２．５±２．８）μｍｏｌ·Ｌ－１。结论：从半边旗分离得到的一类二萜化合物具有显著抑制多种癌细胞增殖的活性，其中６Ｆ活性最强。

半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究

目的：半边旗的植化研究及其有效部位和有效成分的抗肿瘤活性研究。方法：半边旗乙醇提取物上活性炭柱，乙醇洗脱液减压浓缩得粗提物（Ｃ），甲醇氯仿（２∶１）洗脱液浓缩后以硅胶柱层析分离，得到一个倍半萜（Ｂ），两个二萜（４Ｆ、５Ｆ）。Ｂ、４Ｆ、５Ｆ的结构经光谱鉴定，尤其是用二维ＮＭＲ确证了空间结构。以台盼蓝染色作活细胞计数，算出药物对细胞的生长抑制率，ＩＣ５０按改良Ｋａｒｂｅｒ公式计算。结果：分离得到三个化合物，确定了结构。以ＨＬ６０细胞为筛选模型，结果表明：粗提物（Ｃ）、化合物５Ｆ明显抑制ＨＬ６０细胞增值。结论：药理实验表明，粗提物的抗肿瘤活性明显高于５Ｆ，预示粗提物中仍有高活性化合物，值得进一步研究。

半边旗有效成分5F注射液体内外抗肿瘤药理作用研究

目的 观察半边旗有效成分 5F注射液体外体内抗瘤活性、急性毒性作用及其对免疫器官的影响。方法 用MTT法观察 5F注射液对SPCA 1,K5 6 2瘤株的体外抗肿瘤作用 ;采用荷瘤小鼠瘤重、抑瘤率检测 5F注射液对小鼠移植性肿瘤S180、HepA肝癌的抑制作用 ;通过检测LD50 、胸腺指数、肝脏指数、脾脏指数、白细胞数等指标观察 5F注射液的急性毒性及对其免疫器官的影响。结果 5F注射液对SP CA 1,K5 6 2瘤株有显著的体外抗肿瘤作用 ;对荷瘤小鼠肝癌HepA、S180在体内也有抗肿瘤活性 ,5F注射液的半数致死量 (LD50 )为 4 14 4mg·kg-1。结论 5F注射液具有一定的体内体外抗肿瘤活性 ,同时对免疫功能有一定抑制作用。

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。

半边旗体内外抗癌作用及急性毒性研究

本文观察了半边旗水提液(PWE)和醇提液(PAE)体内外抗癌活性及急性毒性。结果表明,PWE和PAE对培养的人白血病细胞株HL—60和K562有明显抑制细胞增殖的作用,呈浓度依赖性;并明显降低HL—60细胞的分裂指数;PWE对小鼠S180肉瘤和小鼠HepA肝癌有明显的抑瘤作用,低10倍剂量的PWE与低剂量5—Fu联合用药可使5—Fu抑瘤率提高,在抑瘤的同时不降低荷瘤鼠末梢血白细胞数(p>0.05);以75g生药/kg/d小鼠灌胃,连续观察一周无异常;PWE和PAE溶血试验均为阴性。提示急性毒性很低。

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测5F对HO8910PM细胞粘附能力的影响;用Transwell小室法检测5F对HO8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法检测5F对HO8910PM细胞NFκB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。结果50μmol·L-1的5F作用细胞6h后能抑制HO8910PM细胞体外侵袭人工基底膜、趋化运动和粘附能力,抑制率分别为(37.57±0.62)%,(28.42±0.67)%,(46.07±4.49)%;5F能明显下调HO8910PM细胞中NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达。结论5F能抑制高转移卵巢癌细胞HO8910PM的侵袭、运动和粘附能力。5F抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达下调有关。

半边旗二萜类化合物5F对高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中癌相关基因表达的影响

目的深入探讨半边旗(Pteris semipinnataL,PsL)二萜化合物5F(PsL5F)抗癌作用的分子机制,全面了解其对卵巢癌中癌相关基因表达的影响。方法应用人癌相关基因芯片观察PsL5F对多种癌相关基因表达的影响,并用实时定量PCR和Western blot对部分基因和蛋白进行验证。结果在芯片所含440种基因中,PsL5F明显上调52个基因的表达,明显下调25个基因的表达。差异表达明显的基因可粗略分为3类:影响p53及相关基因;②影响TGF-β通路相关基因;③抑制细胞外基质和粘附分子的表达。结论芯片结果明显深化了对PsL5F抗癌分子机制的认识,其作用机制与p53、TGF-β相关基因及细胞外基质和粘附分子表达有关。

HPLC-APCI-MS分析半边旗中二萜类化合物

目的 建立一种准确可靠的分析半边旗中二萜类化合物的方法。方法 用高效液相色谱 (HPLC) 大气压化学电离源 (APCI) 质谱 (MS)联用的方式 ,以选择离子监测 (SIM)方式进行测定。主要的二萜类化合物 5F和 4F的准分子离子为 [M -H]- 1 ,发生源内分子离子碰撞活化解离 (CID)现象时 ,出现 [M -H]- 1 和 [M -H2 O -H]- 1 离子峰。采用 [M -H]- 1 为选择监测离子 ,以色谱保留时间和选择监测离子流峰面积定量 ,优选质谱条件和色谱条件。分析色谱柱为DiamonsilODS ,4 6mm× 15 0mm ,流动相为 3 0 %CH3CN 70 % 2mmol·L- 1 NH4 Ac,流速 1 0mL·min- 1 ,进样 5 μL。以测定半边旗中二萜类化合物 5F为例 ,对此方法进行了应用。结果 半边旗中二萜类化合物 5F为 1 18mg·g- 1 ,方法线性范围 0 0 5～ 2 5 μg,相关系数均优于 0 999,检出限达 0 4ng(进样 5 μL)。 5F的加标回收率为 97 8% (n =3 ) ,5F保留时间为 4 3min。结论 本法灵敏、准确、可靠 。

半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用

目的研究半边旗提取物5F对非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长的抑制作用。方法MTT法检测5F对NCI-H460细胞的生长抑制作用;用PI-Hoechst荧光双染法和TUNEL法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测5F对DNA含量的影响。结果5F抑制NCI-H460细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48、72h的IC50分别为:21.40、4.52、1.02μg/ml;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G2/M期。结论5F在体外能有效地抑制NCI-H460细胞的生长,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化及其体外增效作用

目的 寻找半边旗中二萜类有效成分之一 5F纯化的新方法 ,研究 5F对常用抗肿瘤药物的体外增效作用。方法 应用结合了AgNO3的普通层析用硅胶来纯化 5F ,应用台盼蓝拒染法测定药物对细胞的抑制率。结果 纯化后所得到的产品中 5F的含量达到 99%以上 ,是迄今为止纯度最高的产品。较低浓度的 5F分别与氟尿嘧啶 (5 Fu)、顺铂 (CD DP)及长春新碱 (VCR)合用可以增强它们对HL 60、K562细胞株的杀伤作用。结论 结合了AgNO3的普通硅胶可有效地分离纯化 5F。 5F可增强上述几种药物对HL 60、K562细胞的杀伤作用 。

半边旗中黄酮成分的分离鉴定与抗氧化活性研究

半边旗干燥的全草经粉碎后,以80%乙醇回流萃取得浸膏,浸膏再用石油醚、氯仿和乙酸乙酯依次抽提,将乙酸乙酯抽提物减压蒸干得到半边旗黄酮样品。样品经薄板层析、化学显色反应及紫外光谱分析,初步鉴定了其中的黄酮物质成分;样品经液相色谱-质谱联用分析,进一步确证了半边旗黄酮中含有芹菜素、木犀草素和木犀草素葡萄糖苷。样品用Na2S2O3-I2滴定试验考察发现其具有良好的抗氧化活性。

半边旗中二萜类化合物6F对肝癌细胞SPC-A-1细胞周期及细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响

目的研究半边旗中二萜类有效成分之一６Ｆ对肺癌细胞细胞周期及细胞中ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成的影响。方法采用体外培养的人癌细胞株——肺腺癌上皮细胞ＳＰＣ－Ａ－１作实验对象，以噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞存活率；用细胞光度术（ＦＣＭ）测定６Ｆ对ＳＰＣ－Ａ－１细胞周期的影响［３Ｈ］－ＴｄＲ、［３Ｈ］－ＵＴＲ和［３Ｈ］－Ｌｅｕ参入的方法观察６Ｆ对ＳＰＣ－Ａ－１细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质合成的影响。结果化合物６Ｆ可强烈抑制ＳＰＣ－Ａ－１细胞的生长，２４ｈ的半数抑制浓度ＩＣ５０为２．３４μｍｏｌ·Ｌ－１；细胞周期分析显示６Ｆ作用细胞２４ｈ后，均能使细胞的Ｇ２／Ｍ期细胞比例升高，同时Ｇ０／Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，６Ｆ对［３Ｈ］－ＴｄＲ、［３Ｈ］－ＵＴＰ和［３Ｈ］－Ｌｅｕ参入作用在培养２４ｈ后均有明显抑制作用，且呈剂量依赖关系。结论化合物６Ｆ明显抑制ＳＰＣ－Ａ－１细胞的生长，阻断细胞于Ｇ２／Ｍ期，抑制细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ和蛋白质的合成。

半边旗中二萜类化合物5F对K562细胞几种癌基因表达的影响

目的 研究半边旗中二萜类化合物 5F(11α 羟基 15 氧 16 烯 ent贝壳杉烷 19酸 )对K5 6 2细胞癌基因Bcl 2、Bax、c Fos、c Jun表达的影响。方法 5F作用K5 6 2细胞 2 4h后 ,用蛋白印迹法检测Bcl 2、Bax、c Fos、c Jun的表达。结果 半边旗中二萜类化合物 5F作用于K5 6 2细胞 2 4h后 ,Bcl 2表达减少 ,Bax、c Fos、c Jun表达增多。结论 推测化合物 5F抗肿瘤的机制之一是上调Bax、c Fos、c Jun表达和下调Bcl

半边旗抗肿瘤有效成分5F的纯化工艺研究

目的:探索D101大孔吸附树脂制备半边旗中抗肿瘤有效成分贝壳杉烷类二萜5F的工艺。方法:以HPLC为检测手段,以5F在浸膏中的含量为指标,比较甲醇和氯仿提取5F的专属性;以HPLC和TLC为检测手段,考察D101大孔吸附树脂对5F的吸附和洗脱条件。结果:半边旗药粉采用氯仿提取,制成含乙醇20%的药液上柱后,先用2BV30%的乙醇除去极性杂质,再用4BV60%的乙醇洗脱,得到质量分数为32.25%的5F。结论:建立了一种5F的纯化工艺,并达到要求的标准。

半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PMNF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响

目的研究半边旗二萜类化合物5F(11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝克杉烷-19酸)对人高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞内核转录因子κBP65亚基[NF-κB(P65)]、Smad3蛋白及NF-κB(P65)、ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;Westernblot分析NF-κB(P65)及Smad3蛋白的表达;RT-PCR分析NF-κB(P65)及ETS-1mRNA的表达。结果5F能抑制HO-8910PM细胞的增殖,抑制率随剂量的增加而增加,具有剂量依赖性;25～100μmol/L5F作用HO-8910PM细胞24h后,NF-κB(P65)、Smad3蛋白表达水平明显下降,并呈剂量效应关系;5F明显下调NF-κB(P65)mRNA的表达,轻微下调ETS-1mRNA的表达。结论5F抗肿瘤活性与NF-κB(P65)、Smad3蛋白和NF-κB(P65)、ETS-1mRNA的表达有关。

半边旗二萜类化合物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的 研究 5F对人病理性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法 将 5F作用于体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞 ,通过3H -脯氨酸掺入法、检测细胞上清液羟脯氨酸含量及人PCⅢ放免试剂盒测定成纤维细胞胶原合成含量。结果 5F可减少成纤维细胞3H -脯氨酸掺入量、细胞上清液胶原蛋白总量及Ⅲ型前胶原的含量。结论

半边旗提取物5F对SPCA-1细胞周期及DNA、RNA合成的影响

目的:观察半边旗提取物5F对SPCA-1细胞的抑瘤作用及对细胞周期、DNA、RNA合成的影响。方法:用MTT法观察5F对SPCA-1细胞的抑瘤作用;流式细胞术分析细胞周期变化;[3H]-TdR和[3H]-UTR掺入法观察5F对SPC-A-1细胞DNA、RNA合成的影响。结果:5F对SPCA-1细胞有显著抑制生长作用;在一定剂量5F作用下SPCA-1细胞表现为G1期明显减少,而G2和S期相对增多;5F作用24 h后细胞[3H]-TdR和[3H]-UTR掺入量明显减少。结论:半边旗提取物5F具有体外抗肿瘤活性;干扰肿瘤细胞的周期;对肿瘤细胞DNA、RNA合成有抑制作用。