半边旗5F对系统性硬皮病患者成纤维细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性及其酶原活化的影响

目的探讨半边旗5F对系统性硬皮病成纤维细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）活性及其酶原活化的影响，进而了解该酶诱导系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞凋亡的机制。方法用光度检测法和蛋白质印迹法测定半边旗5F对Caspase3的酶活性及酶原蛋白表达量的变化。结果分别用20、40、80μg／ml的半边旗5F 24h后，Caspase3酶活性分别为（145．5±4．1）％、（276．5±7．5）％、（423．9±14．3）％，作用48h后各浓度分别为（171．9±13．5）％、（286．7±7．3）％、（444．9±5．5）％，在半边旗5F作用下，Caspase3的酶活性增高，酶原蛋白表达量减少，活化增加。这些变化在一定范围内随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强。结论半边旗5F通过影响Caspase3的酶原蛋白表达量而增高酶的活性，是诱导系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞的凋亡机制之一。

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以MTT法检测5F对高转移卵巢癌细胞HO8910PM细胞增殖的影响;以细胞粘附人工重组基底膜实验检测5F对HO8910PM细胞粘附能力的影响;用Transwell小室法检测5F对HO8910PM细胞的侵袭能力和趋化运动能力的影响;Westernblot法检测5F对HO8910PM细胞NFκB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。结果50μmol·L-1的5F作用细胞6h后能抑制HO8910PM细胞体外侵袭人工基底膜、趋化运动和粘附能力,抑制率分别为(37.57±0.62)%,(28.42±0.67)%,(46.07±4.49)%;5F能明显下调HO8910PM细胞中NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达。结论5F能抑制高转移卵巢癌细胞HO8910PM的侵袭、运动和粘附能力。5F抗肿瘤侵袭转移的作用机制与NFκB(P65)和VEGF蛋白的表达下调有关。

半边旗提取物5F对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及作用机制的实验研究

目的:探讨半边旗提取物5F(简称5F)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响及其作用机制。方法:以MTT法检测5F对HO-8910PM细胞增殖的影响;流式细胞术分析5F对HO-8910PM细胞周期的影响;Western blot分析NF-κB(P65)、焦点粘附激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达及FAK酪氨酸磷酸化水平。结果:不同浓度的5F分别处理细胞24h后,对HO-8910PM细胞增殖有明显的抑制作用;使G0/G1期的细胞减少,阻断细胞于G2/M期;5F可使NF-κB(P65)的表达下调,上调FAK的表达,并下调FAK酪氨酸磷酸化水平。结论:5F通过影响HO-8910PM细胞周期、下调NF-κB(P65)表达及促进FAK的表达来抑制细胞生长。

五肽YIGSR修饰的半边旗提取物5F脂质体的制备及理化性质研究

目的:制备五肽YIGSR修饰的半边旗提取物5F脂质体(YIGSR-5F-LP)并研究其理化性质。方法:采用薄膜分散-超声法制备5F-LP,以包封率为指标,通过正交试验考察磷脂胆固醇质量比、药脂质量比、超声时间及反应温度对脂质体制备工艺的影响;采用后插入法修饰载药脂质体表面,制备表面含YIGSR的5F-LP。透射电镜法观察脂质体的形态和粒径;鱼精蛋白沉淀法测定脂质体包封率;高效液相色谱法测定脂质体中5F含量;透析法评价载药脂质体的体外释放性能。结果:优选的最优制备工艺为磷脂胆固醇质量比6∶1、药脂质量比1∶10、超声时间10 min、反应温度45℃。所制YIGSR-5F-LP呈球形或类球形,平均粒径为174.8nm,包封率为88.9%,载药量为8.2%;其体外释放比5F溶液慢,在48 h释放完全。结论:成功制得YIGSR-5F-LP,其具有缓释特性。

半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402生长抑制作用及增殖细胞核抗原表达的影响

目的研究半边旗提取物5F对肝细胞癌BEL-7402细胞生长的抑制作用。方法 MTT法检测5F对BEL-7402细胞的生长抑制作用;用Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测5F对细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测5F对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果 5F抑制BEL-7402细胞的生长,其效果与5F的浓度和作用时间相关,24、48和72h的IC50分别为60.33、21.32和11.22 mg/L;荧光双染色法显示经5F作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体;细胞被阻滞在G2/M,PCNA阳性表达率降低。结论 5F在体外能有效地抑制BEL-7402细胞的生长,其诱导凋亡作用可能与下调增殖细胞核抗原(PCNA)表达有关。

半边旗提取物5F对不同类型NSCLC细胞的增殖抑制作用

目的观察半边旗提取物5F(Psl5F)对不同类型非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株的增殖抑制作用,并找出对其敏感的细胞株类型。方法采用MTT法观察不同浓度Psl5F分别在作用24、48、72 h时对不同类型的NSCLC细胞株(A549、SPCA-I、NCI-H460、PGCL3)生长增殖的影响。结果不同浓度的Psl5F对4种肺癌细胞作用24、48、72 h后,所有NSCLC细胞株生长增殖均受到不同程度的抑制,其中以对NCI-H460肺癌细胞的杀伤作用最强(P<0.01),对A549、SPCA-I、NCI-H460、PGCL3作用72 h后的半数致死量(IC50)分别是12.12、10.74、3.91、4.94 mg/L。结论Psl5F能有效抑制NSCLC细胞株的体外增殖,且对大细胞肺癌NCI-H460最为敏感。

半边旗二萜类化合物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的 研究 5F对人病理性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法 将 5F作用于体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞 ,通过3H -脯氨酸掺入法、检测细胞上清液羟脯氨酸含量及人PCⅢ放免试剂盒测定成纤维细胞胶原合成含量。结果 5F可减少成纤维细胞3H -脯氨酸掺入量、细胞上清液胶原蛋白总量及Ⅲ型前胶原的含量。结论

半边旗二萜类化合物5F对人翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 观察中药半边旗二萜类化合物 5F对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞 (humanpterygiumfibroblasts,HPF)增殖的影响。方法 用噻唑蓝比色法 (MTT)观察不同浓度梯度( 4、 8、 1 6、 3 2、 64、 1 2 8μg/ml)的 5F在不同作用时间内 ( 2 4、 48、 72、 96小时 )对HPF增殖的抑制作用。结果 用药 2 4小时浓度 1 6μg/ml开始明显抑制 (P <0 0 5) ;48小时 8μg/ml抑制作用更强 (P <0 0 1 ) ;50 %抑制率 (IC50 )浓度 3 2 μg/ml。同一浓度各时间组抑制率 (IR)与对照组比较 ,在 4μg/ml作用 2 4、 48及 72小时IR与对照组比较差异均无显著性 (P >0 0 5) ,持续作用96小时差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;1 6μg/ml以上 2 4～ 96小时各时间组IR与对照组比较差异均有显著性 (P <0 0 1 )。结论 体外培养HPF具较强增殖能力 ,5F对HPE的增殖具明显抑制作用 。

半边旗中二萜类化合物5F对乳腺癌生长和转移的体内抑制作用

为研究半边旗中二萜类化合物5F在体内对乳腺癌生长和转移的影响及其作用机制,以MDA-MB-231乳腺癌原位移植模型观察5F抗乳腺癌的效应。在治疗的同时,观察5F对裸鼠的不良反应。以RT-PCR、Western blot法检测5F对乳腺肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、激酶嵌入结构域受体(KDR)mRNA和蛋白表达的影响。结果显示,5F通过减少原发肿瘤体积和肺转移结节数目,显著抑制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤的生长和肺转移。这种抑制转移的作用不依赖于其对原发肿瘤的生长抑制作用。5F对裸鼠的肝肾功能无明显的影响。5F抗MDA-MB-231乳腺癌作用机制与5F下调肿瘤组织VEGF、KDR mRNA和蛋白表达水平有关。

半边旗二萜化合物5F和大黄素影响HO-8910PM细胞中GDF15表达的研究

目的:研究半边旗二萜化合物5F(简称PsL5F)和大黄素对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中生长分化因子15(GDF15)表达的影响,探讨它们抗肿瘤的作用机制。方法:应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F和大黄素对GDF15表达的影响。结果:PsL5F和大黄素都能明显上调GDF15表达。结论:PsL5F和大黄素的抗肿瘤作用与GDF15高表达有关。

半边旗二萜类化合物5F下调BEL-7402细胞中PIK3CA和AKT的表达

目的：研究半边旗二萜化合物5F（简称PsL5F）对人肝癌细胞株BEL-7402中PIK3CA（Phosphoinositide-3-kinase，catalytic，alphapolypeptide）和AKT（V-akt murine thymoma viral oncogene homolog）表达的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用机制。方法：应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测PsL5F对PIK3CA和AKT表达的影响。结果：PsL5F能明显下调肝癌细胞中PIK3CA和AKT的表达。结论：PsL5F抗肿瘤作用与PIK3CA、AKT低表达有关。

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡的机制研究

目的研究半边旗5F(PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其分子机制。方法用PsL5F处理FRO细胞,MTT法测定其对FRO细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI标记法与流式细胞术联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用CM-H2DCFDA和Di OD6(3)标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位(MMP)的影响;Western blot方法分析Bax、Cyto C、凋亡诱导因子(AIF)及截断PARP的水平变化;Caspase-3活性用Caspase-3比色分析试剂盒测定。结果PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈现剂量和时间依赖性;PsL5F可诱导FRO细胞凋亡,表现出在100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用100 mg/L PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平即明显升高,ROS抑制剂还原型谷胱甘肽(GSH)可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡;100mg/L PsL5F处理可使FRO细胞MMP逐渐降低,GSH可抑制PsL5F诱导的MMP降低;同时,线粒体膜蛋白组分中Bax和细胞液蛋白组分中Cyto C、AIF逐渐增加;PsL5F处理使FRO细胞Caspase-3活性逐渐升高及其作用底物PARP断裂。结论PsL5F对人未分化甲状腺癌FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的。其中,细胞内ROS水平升高起到了非常重要的第二信使作用,线粒体是其作用的重要靶点。细胞凋亡是通过Bax转位到线粒体膜、引起MMP降低、Cyto C和AIF释放到细胞液、激活Caspases级联反应而进行的。

PsL5F诱导人未分化甲状腺癌FRO细胞凋亡与细胞内ROS水平对JNK信号通路的影响

目的研究半边旗5F(Pteris semipnnata L5F,PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平升高和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)激活的关系。方法MTT法测定PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用;流式细胞术与Annexin V-FITC/PI标记法联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用ROS特异反应试剂CM-H2DCFDA标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内ROS水平的影响;Western blot法分析PsL5F处理对FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平的影响。结果PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性;在PsL5F 100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平就表现出明显的升高,GSH可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡到对照水平;PsL5F处理可使FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化而被激活,JNK抑制剂Dicumarol可减轻PsL5F诱导的细胞凋亡,ERK和p38MAPK的抑制剂PD098059和SB203580加剧PsL5F诱导的细胞凋亡。结论PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的;细胞内ROS水平升高起到了非常重要的作用;PsL5F处理可导致FRO细胞MAPKs信号通路激活,其中JNK信号通路是促凋亡信号,而ERK和p38MAPK作为生存信号被激活来对抗PsL5F诱导的细胞凋亡。

Survivin RNAi联合PsL 5F影响MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨RNAi介导的基因治疗联合天然药物半边旗提取物5F(Ps L 5F)对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用腺病毒介导Survivin RNAi联合PsL 5F作用乳腺癌细胞MCF-7,免疫印迹法检验Survivin被沉默的程度,通过MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果免疫印迹实验发现Survivin蛋白的表达明显被抑制;MTT实验表明联合作用对细胞增殖的抑制作用从单独应用的50.00%(P<0.001),提高到86.12%(P<0.001);流式细胞术也发现联合应用能更大程度地促进细胞的凋亡。结论 Survivin RNAi和PsL 5F联合作用,可显著提高对MCF-7细胞增殖的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用,这为肿瘤的综合治疗提供了理论基础和实验室依据。

两种中草药活性成分对NAG-1表达的影响

目的：研究大黄素和半边旗二萜类化合物5F对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞中非类固醇抗炎药物激活基因（nonsteroidal anti-inflammatory drug-activated gene，NAG-1）表达的影响，探讨其抗肿瘤的作用机理。方法：应用肿瘤基因芯片、荧光定量实时PCR和Western blot法检测大黄素和半边旗二萜类化合物5F对NAG-1表达的影响。结果：大黄素和半边旗二萜类化合物5F均能强烈上调NAG-1表达。结论：大黄素和半边旗二萜类化合物5F抗肿瘤作用可能与NAG-1表达密切有关。