半边莲(Lobelia Chinensis Lour.)离体茎段再生植株的研究

半边莲去叶带节茎段接种于MS基本培养基中,附加2,4—D、NAA、6—BA等不同浓度激素,获得了愈伤组织和完整植株。并建立了一个半边莲快速繁殖程序:(1)MS+6—BA4mg/L用于诱导丛芽的形成;(2)MS+NAA2mg/L用于诱导根的形成。完整植株移栽成活率可达95％。

基于新一代高通量测序技术开发巨人半边莲Lobelia deckenii的SSR标记

为了开发东非半边莲属特有植物的微卫星分子标记（SSR）,本研究基于Illumina-HiSeq 2000测序平台对巨人半边莲Lobelia deckenii的基因组进行高通量测序。利用MISA软件对获得的基因组数据库进行搜索与分析,共鉴别出58 966个SSR位点,并利用Primer软件成功设计出3558对特异性的SSR引物。利用L.deckenii 3个居群的6个样品对随机挑选的40对SSR引物进行扩增效率检验,发现有32对重复性好且可扩增出清晰条带。利用筛选出的32对SSR引物对来自肯尼亚山居群的24株个体进行PCR扩增并采用荧光分型技术检测多态性,结果显示有14对可扩增出稳定的多态性条带,共有86个等位基因,各SSR位点的等位基因数（NA）为4~9个,观测杂合度（Ho）和期望杂合度（He）分别为0.000~1.000和0.625~0.854。本研究结果表明,通过高通量测序技术开发东非特有植物巨人半边莲的SSR标记是一种简单而高效的途径,这些新的SSR分子标记为巨人半边莲的居群遗传多样性、遗传结构以及对其开展保护生物学研究提供了工具。

基于网络药理学及分子对接探讨半枝莲半边莲药对治疗肺癌的作用机制

本研究旨在运用网络药理学、分子对接及动物试验,探寻半枝莲-半边莲药对治疗肺癌的作用机制。本研究运用TCMSP平台查询半枝莲-半边莲药对的化合物成分,使用Cytoscape3.7.2软件绘制成分-靶点网络图。利用GeneCards和OMIM数据库查询肺癌靶点,通过相互作用数据库平台STRING进行靶蛋白互作分析。构建核心活性成分、核心靶点与关键通路相互作用关系图,并对核心活性成分与靶点进行分子对接。雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药组(6.3g/kg),每组6只,采用气管内灌注致癌碘化油溶液法建立肺癌大鼠模型,并采用病理学检查验证造模是否成功;采用Western blot检测肿瘤组织中p-PI3K,p-Akt,EGFR和IL-6蛋白的表达情况。结果分析显示,有效活性成分及其对应靶点分别为44个、108个,主要有效活性成分为Quercetin,Kaempferol,Luteolin,Wogonin,Baicalein等。共筛选出肺癌靶点2 057个,Venny图显示二者交集靶点74个。PPI网络分析度值较高的靶蛋白为IL-6,EGFR,CASP3,ESR1,MYC,VEGFA,CCND1,MAPK8。GO分析显示,富集于多个生物过程、分子功能及细胞组分。KEGG信号通路分析显示主要富集在TNF信号通路,PI3K-Akt信号通路,p53信号通路等通路。成分-靶点-通路网络图显示,半枝莲-半边莲药对可能由Quercetin,Kaempferol,Luteolin,Wogonin,Baicalein等活性成分组成,通过作用于IL-6,EGFR,CCND1,MYC,VEGFA,MAPK8等靶蛋白,调节PI3K-AKT信号通路,MAPK信号通路等来发挥治疗肺癌作用。分子对接结果显示,IL-6与槲皮素,EGFR、MYC、CCND1与汉黄芩素有良好的结合能力。Western blot结果表明,相较于模型组,中药组中大鼠瘤组织中p-PI3K、p-Akt、EGFR和IL-6蛋白表达均明显下降(P <0.05)。半枝莲-半边莲药对对肺癌的治疗作用是通过多种活性成分,多个靶点,多途径来实现的,本研究为今后进行深入的机制研究提供了理论依据。

基于燃烧稳定性和微量元素指标板蓝根、半边莲、薄荷多指标计量分析

选择来自广西金秀生产的板蓝根、半边莲、薄荷3种中草药作为研究对象,测定板蓝根、半边莲和薄荷的燃烧热、燃烧稳定性、脂肪、粗纤维、灰分、微量元素,并用化学计量方法从多指标方面进行品质评价。结果表明,板蓝根、半边莲、薄荷的燃烧热含量在19518.87~24282.02 J/g之间;燃烧稳定性排序为广西金秀半边莲>广西金秀板蓝根>广西金秀薄荷;脂肪质量分数在0.10%~1.07%之间,大小顺序为广西半边莲>广西金秀薄荷>广西金秀板蓝根;灰分质量分数在5.27~12.03%之间,大小顺序为广西金秀薄荷>广西金秀半边莲>广西金秀板蓝根;粗纤维质量分数在11.65%~27.77%之间,大小顺序为广西金秀薄荷>广西金秀板蓝根>广西金秀半边莲。燃烧热、燃烧性(板蓝根、半边莲和薄荷的燃烧稳定性)、脂肪含量、灰分、粗纤维、微量元素含量多指标的顺序为广西金秀薄荷>广西金秀半边莲>广西金秀板蓝根。本研究建立来自广西金秀的板蓝根、半边莲和薄荷的多指标分析及评价体系,为广西金秀的板蓝根、半边莲和薄荷质量评价和其综合利用提供一定的理论基础和科学指导。

半边莲不同提取物镇痛抗炎作用

目的研究半边莲不同溶剂提取物的镇痛抗炎作用。方法制备半边莲水提取物和75%乙醇提取物,采用醋酸扭体实验和热板实验测定半边莲提取物镇痛作用,二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验和10%蛋清致小鼠足跖肿胀实验测定半边莲提取物抗炎作用。结果半边莲水提取物可明显抑制醋酸所致小鼠扭体反应(P<0.01);给予半边莲水提取物和醇提取物1,2 h,小鼠热板痛阈值明显提高(P<0.05或P<0.01);半边莲提取物能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.05或P<0.01);半边莲提取物在致炎后0.5,1,2,4 h能显著抑制10%蛋清所致小鼠足跖肿胀(P<0.05或P<0.01)。结论半边莲提取物有明显的镇痛和抗炎作用。

半边莲化学成分研究

目的：研究半边莲全草的化学成分。方法：半边莲全草95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位,经硅胶、Sephadex LH-20以及ODS柱层析等多种色谱手段分离纯化,并通过理化常数和NMR、MS等光谱数据鉴定化合物的结构。结果：共分离鉴定了12个化合物,分别为：6,7-二甲氧基香豆素（1）、6-羟基-5,7-二甲氧基香豆素（2）、5-羟基-7-甲氧基香豆素（3）、5-羟基-6,7-二甲氧基香豆素（4）、3′-羟基芫花素（5）、芹菜素（6）、槲皮素（7）、木犀草素（8）、蒙花苷（9）、luteolin 3′,4′-dimethylether-7-O-β-D-glucoside（10）、异阿魏酸（11）和迷迭香酸乙酯（12）。结论：化合物1~5、10~12均为首次从该植物中分离得到。

半边莲药理作用及机制的研究进展

目的:对半边莲的药理作用及其作用机制进行综述和分析。方法:对近年来有关半边莲的药理作用及其作用机制的文献进行总结与分析。结果:半边莲具有显著的抗肿瘤、对内皮细胞的调节、镇痛消炎、抑制α-葡萄糖苷酶、抗心肌缺血再灌注等药理作用。结论:半边莲中含有许多有效成分,具有广泛的生物活性,其产生生物活性的作用机制有待于进一步深入的研究。

半边莲生物碱缓解肾性高血压大鼠的血管重塑

目的:探讨半边莲生物碱对肾性高血压大鼠主动脉血管重塑的影响。方法:制备两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠模型,灌服半边莲生物碱或卡托普利8周,用放射免疫技术测定血浆肾素活性(plasma rennin activity,PRA)。用Weigert法染色并测量腹主动脉中膜厚度及中膜截面积等血管重塑形态学参数。分别用Masson三色法和免疫组化方法测腹主动脉总胶原蛋白含量和Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:高血压大鼠与假手术组相比PRA明显升高(P<0.05),使用半边莲生物碱后PRA显著降低(P<0.05);卡托普利对PRA无明显影响。高血压大鼠中膜厚度、中膜厚度/血管内径、中膜面积和腹主动脉胶原含量与假手术组相比明显升高(P<0.05);半边莲和卡托普利均可使高血压组大鼠上述指标显著降低(P<0.05)。结论:肾性高血压大鼠存在血管重塑现象,半边莲生物碱能抑制胶原的表达、降低肾素活性,对缓解血管重塑有一定作用。

3种半边莲提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

为研究半边莲水提取物、半边莲总黄酮、半边莲总生物碱体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,本试验建立了Marc-145细胞模型,在研究其对Marc-145细胞最大安全质量浓度的基础上,结合细胞病变形态观察和MTT法,设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组,对病毒进行阻断、抑制和直接杀灭3种作用方式的测定。结果显示,半边莲水提取物、半边莲总黄酮、半边莲总生物碱和利巴韦林的最大安全质量浓度分别为2.5、1.25、0.63和0.016 mg·mL^-1。在体外抗PRRSV作用的试验中,半边莲水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为52.1%、60.2%、52.6%,极显著低于阳性对照利巴韦林(P<0.01),且各作用方式下均出现明显的细胞病变。半边莲总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为51.1%、85.0%、93.9%,其抑制和直接灭活作用较强,极显著高于阳性对照利巴韦林(P<0.01),且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。半边莲总生物碱对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为91.2%、57.8%、58.1%,其对PRRSV在抑制作用和直接灭活作用下的抑制率显著低于阳性对照利巴韦林(P<0.05),对PRRSV阻断作用极显著强于阳性对照利巴韦林(P<0.01),且在阻断作用下细胞轻微病变。综合3种作用方式,3种半边莲提取物均具有体外抗PRRSV的作用,其中,半边莲总黄酮抗PRRSV的效果最好,其次是半边莲总生物碱,半边莲水提取物抗PRRSV效果最弱。

半边莲总黄酮提取工艺及抑菌活性的研究

研究了乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间对半边莲中总黄酮提取率的影响,并通过正交实验优化了半边莲中总黄酮的提取工艺条件,结果表明:当乙醇浓度60%,料液比为1∶40(g/m L),提取温度60℃,提取时间2.5 h,从半边莲中提取总黄酮的得率为1.69%。考察了半边莲总黄酮提取物对几种常见微生物的抑菌作用,结果表明半边莲总黄酮提取物具有一定的抑菌活性,对革兰氏阴性菌的抑制作用大于革兰氏阳性菌,低浓度下对青霉菌和酵母菌抑制效果不明显。

半边莲生物碱抑制内皮素-1诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的:探讨半边莲生物碱(LCLA)对内皮素-1(ET-1)诱导人脐动脉平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制效应及其作用机制。方法:采用细胞计数、[3H]-TdR掺入、流式细胞术、免疫细胞化学染色及Fura-3/AM荧光探针标记方法检测VSMC增殖;并用台盼蓝拒染、乳酸脱氢酶(LDH)检测方法观察LCLA对VSMC的毒性反应。结果:LCLA(100、200和400mg/L)、BQ-123(10-6mol/L)、ST(10-7mol/L)均抑制ET-1所诱导的VSMC增殖(均P<0.05):明显降低VSMC的细胞数目、[3H]-TdR掺入量、S期和G2/M期的数目百分比,增加G0/G1期的数目百分比;减弱细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达强度和Ca2+荧光强度;LCLA的抑制作用存在明显的剂量依赖关系,但对VSMC存活率和LDH释放量均没有影响。结论:LCLA浓度依赖性地抑制ET-1所诱导的人脐动脉VSMC增殖,其机制与降低VSMC内Ca2+含量有关。

基于rbcL序列的半边莲与通泉草的分子鉴别方法

市场流通中半边莲容易与通泉草相互混淆,拟基于rbcL序列建立半边莲与通泉草的分子鉴别方法。采集不同产地的半边莲样品9份,通泉草样品7份,所有受试样品提取总DNA。对其叶绿体DNA中rbcL片段进行扩增、测序,用ClustalX 2.1软件进行多重序列比对后,应用Meg 5.0软件构建NJ系统聚类树进行聚类分析,根据二组样品间的SNP位点设计相互鉴别的特异性引物,建立特异PCR鉴别方法,并应用SYBR Green I染料法建立对2种中草药进行快速检测的方法。本研究建立了对半边莲与通泉草2种中草药进行分子鉴别的方法,并建立了荧光快速检测方法。

半边莲生物碱抑制内皮素诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖

目的研究半边莲生物碱对内皮素诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用。方法用内皮素1刺激大鼠主动脉平滑肌细胞增殖，以细胞计数试剂盒计数细胞个数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入检测DNA的合成量、免疫细胞化学技术观察增殖细胞核抗原的表达活性作为细胞增殖的指标，并应用台盼兰拒染、乳酸脱氢酶检测观察半边莲生物碱的细胞毒性反应。结果内皮素1（10^-7 mol／L）可明显促进细胞增殖（与对照组相比，P〈0.01）；半边莲生物碱和BQ-123均可抑制内皮素1所诱导的细胞增殖（与内皮素1组相比，P〈0，05）；半边莲生物碱的抑制作用与浓度存在明显的依赖关系，但对活细胞数目和乳酸脱氢酶释放量均没有影响（P〉0，05）。结论半边莲生物碱（50～200mg／L）可浓度依赖性地抑制内皮素1所诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖，且此抑制作用并非是通过细胞毒性作用实现的。

离子液体辅助超声萃取-高效液相色谱同时测定半边莲中6种黄酮类化合物

目的：通过单因素试验和正交试验对离子液体辅助萃取半边莲中黄酮类化合物的条件进行优化,建立高效液相色谱法同时分离测定半边莲中芦丁、槲皮素、柚皮素、橙皮素、山柰酚和芹菜素的方法.方法：采用InertSustain C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）进行分离;流动相为甲醇（B）-乙酸溶液（A,pH 3.0）,梯度洗脱;流速1.0 mL/min;紫外检测波长285 nm;柱温35 ℃.结果：以黄酮类化合物的提取量为指标,最佳提取条件为甲醇体积分数80%、固液比1∶80（g/mL）、萃取时间30 min、离子液体浓度0.6 mol/L.在优化的色谱条件下,芦丁、槲皮素、柚皮素、橙皮素、山柰酚和芹菜素分离效果良好;定性检出限（RSN = 3）依次为0.001 2、0.002 3、0.002 6、0.000 2、0.001 0、0.000 6 μg/mL;样品回收率为91.77%～102.53%.结论：该萃取方法操作简单快速,为半边莲中黄酮类化合物的提取分离及检测提供了有效的方法.

半边莲生物碱对高血压鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察半边莲生物碱对高血压鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖的作用.方法：分别使用50、100和150mg/L不同剂量半边莲生物碱孵育高血压鼠脑基底动脉平滑肌细胞,以细胞计数试剂盒计数各组细胞个数、[3H]-TdR掺入检测各组DNA的合成量作为细胞增殖的指标.结果：各组细胞数量下降;各组血管平滑肌细胞DNA的合成量均下降,以100mg/L组下降最为明显.结论：半边莲生物碱可抑制高血压所诱导的脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,提示半边莲生物碱可用于高血压诱发的脑血管重构.

蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶表达的对比研究

目的:探讨蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素和内皮型一氧化氮合酶表达的影响,并比较两种制剂的药效差别。方法:提取蚤休总皂甙与半边莲生物碱,观察两种制剂对高脂血症大鼠主动脉内皮细胞内皮素(ET)合成、血浆ET浓度和血浆内皮型一氧化氮合酶(ecNOS)浓度的影响。结果:高脂喂养大鼠动脉内皮细胞ET-1的合成与释放明显增高,而ecNOS明显降低;应用蚤休总皂甙60d后,动脉内皮细胞ET的合成与释放显著低于高脂对照组(P<0.05),但血浆ecNOS含量无明显变化;应用半边莲生物碱60d后,动脉内皮细胞ET的合成、释放减少(P<0.05)的同时,血浆ecNOS含量较高脂对照组显著升高。结论:蚤休总皂甙与半边莲生物碱均能抑制ET的合成和释放,半边莲生物碱同时还能够促进ecNOS合成和释放,其药效优于蚤休总皂甙。

半边莲属药用植物研究进展

综述了近年来国内外对半边莲属药用植物的研究进展，以期能有效利用云南产丰富的此属植物资源。

半边莲黄酮苷提取工艺优化

[目的]研究超声辅助提取半边莲黄酮苷的最佳工艺条件。[方法]以乙醇溶液为提取剂,采用正交试验法对半边莲黄酮苷提取过程中的乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比4个因素进行优选。[结果]最佳提取工艺条件为:乙醇浓度为50%,提取时间为35min,提取温度50℃,料液比为15∶0。在此条件下,黄酮苷的含量可达4.209 2 mg/g。[结论]该法提取率高、稳定性好,适合半边莲黄酮苷的测定。

半边莲的化学成分和药理作用研究进展

半边莲为中国药典收录的常用中药,主要化学成分有黄酮、生物碱和香豆素类等,有显著的抗肿瘤、抗氧化、镇痛抗炎、抑制α-葡萄糖苷酶等药理作用,在临床上常用来治疗支气管炎、支气管肺炎、呼吸道感染和婴儿腹泻等。因此,进一步开展半边莲中化学成分的作用机制和质量控制研究具有重要的实际意义。

半边莲生物碱抑制肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA和蛋白表达

目的观察半边莲生物碱对肾性高血压大鼠内皮素1 mRNA表达、蛋白合成和释放的影响。方法采用两肾一夹高血压大鼠模型,随机分为高血压组、半边莲组、卡托普利组和假手术组。用原位杂交技术观察大鼠外周血白细胞内皮素1 mRNA的表达,应用免疫组织化学染色计数大鼠主动脉内皮细胞铺片内皮素阳性细胞率(反映内皮素1蛋白的合成),用放射免疫技术测定大鼠血浆内皮素的含量。结果与假手术组比较,高血压组外周血白细胞内皮素1mRNA表达增强(34.64%±8.39%比9.34%±4.47%,P<0.05),动脉内皮细胞合成内皮素增多(7.42%±0.24%比1.58%±0.24%,P<0.05),血浆内皮素水平显著升高(221±24ng/L比138±19ng/L,P<0.05)。应用半边莲生物碱8周后,与高血压组比较,内皮素1 mRNA表达(20.38%±11.31%比34.64%±8.39%,P<0.05)、内皮素合成(3.53%±0.21%比7.42%±0.24%,P<0.05)和血浆内皮素水平(191±21ng/L比221±24ng/L,P<0.05)均受到显著抑制。结论肾性高血压大鼠伴有内皮素表达增强,半边莲生物碱能抑制内皮素基因的转录、蛋白合成及翻译,对防治肾性高血压所致的血管病变具有一定作用。