真养产碱杆菌112R_4的二羧酸单酰胺酰胺水解酶

在一株具有环酰亚胺转化活性的真养产碱杆菌 1 1 2R4 中发现了一种特异性的二羧酸单酰胺酰胺水解酶 (半酰胺酶 ) ,它催化环酰亚胺代谢的第二步反应 ,将二羧酸单酰胺水解为二羧酸和氨。该酶的底物仅限于此代谢途径的第一个酶———酰亚胺酶的产物二羧酸单酰胺 ,而对其它的酰胺类化合物没有明显水解活性。真养产碱杆菌 1 1 2R4 中的半酰胺酶和酰亚胺酶在表达上具有相关性 ,环酰亚胺 (如琥珀酰亚胺 )和二羧酸单酰胺 (如琥珀酰胺酸 )对它们有正调控作用 ,游离氨离子显示出负调控作用 ,琥珀酸则在酶合成和活性两方面均表现出影响作用。对重组大肠杆菌中表达的半酰胺酶粗酶的部分性质进行了研究。钴离子对半酰胺酶的活性表现出促进作用 ,比活力提高到 3.37倍 ,表明半酰胺酶可能是一种金属结合酶。

多形性日光疹皮损中板层小体分布、神经酰胺酶表达与皮肤屏障功能

目的探讨多形性日光疹（PLE）表皮中板层小体的分布、神经酰胺酶的表达与皮肤屏障受损的相关性。方法选取PLE患者47例及正常人对照40例，通过电镜观察两组皮损处颗粒层、棘层板层小体的数量及分布情况，运用免疫组化测定皮损处神经酰胺酶的表达，采用无创性皮肤测试仪测量皮损处经皮水分丢失（TEWL）、角质层含水量及皮脂含量。结果透射电镜结果显示：与对照组相比，PLE患者颗粒层、棘层板层小体数量明显少于正常人对照组，分布较正常人对照组紊乱。免疫组化结果显示：PLE患者皮损处神经酰胺酶表达20例阳性、21例弱阳性、6例阴性；正常人对照组中36例阳性、4例弱阳性，差异有统计学意义（P〈0．01）；皮损处TEWL（34．2191±12．70）较正常人对照组（16．8350±6．50）高，角质层含水量（22．7319±8．71）较正常人对照组（29．4250±5．08）低，差异有统计学意义（P〈0．01）；皮脂含量两者之间差异无统计学意义。结论PLE患者存在神经酰胺合成障碍，可能是皮肤屏障受损的原因之一。

人神经生长因子对DPN大鼠坐骨神经CGT的作用

目的 观察人神经生长因子 ( h NGF)对早期糖尿病多发性神经病 ( DPN)大鼠坐骨神经中半乳糖神经酰胺转移酶 m RNA( CGTm RNA)表达的影响。方法 用链脲佐菌素 ( STZ)一次性腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型 ,在 DPN 4周 (造模后 4周 )腹腔注射 h NGF( 90 U .kg- 1 .d- 1 ) ,共 4周。用 RT- PCR和免疫组化方法观察坐骨神经CGTm RNA,NGFm RNA和蛋白表达。结果 DPN 8周大鼠坐骨神经 CGTm RNA升高 ,NGFm RNA和蛋白表达减少。用 h NGF治疗的 DPN大鼠 CGTm RNA明显降低 ,NGFm RNA和蛋白表达增加。结论 h NGF治疗能纠正早期DPN大鼠坐骨神经 CGTm

赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用(英文)

目的:观察赛特铂对人卵巢癌细胞A2780的凋亡诱导作用及对细胞周期的影响。方法:MTT法观察药物对细胞增殖的抑制作用,碘化丙锭染色分析细胞周期变化,电镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,多参数流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率,并测定caspase-3的活性变化及caspase抑制剂对细胞存活率的影响。结果:赛特铂可抑制A2780细胞的增殖并诱导凋亡,具有明显的剂量依赖性,作用与顺铂相当。赛特铂主要导致A2780细胞S期细胞明显增加,G2/M期细胞少许增加。经赛特铂作用后漂浮细胞呈现典型凋亡细胞形态学改变。caspase-3活性随着细胞凋亡率增加而增加,caspase抑制剂不完全抑制细胞死亡。结论:赛特铂影响A2780细胞周期分布,可体外诱导A2780细胞凋亡。caspase依赖性和caspase非依赖性途径参与了其凋亡过程,其中caspase依赖性途径又包括caspase-3依赖性和非caspase-3依赖性途径。

3’取代吲哚类衍生物诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的 :研究 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺诱导HL 6 0细胞凋亡的作用机制。方法 :用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺对HL 6 0细胞的凋亡诱导作用 ,检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase) 8和Caspase 3活性来研究其对HL 6 0细胞的凋亡诱导途径 ,并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl 2表达的影响。结果 :1 8%DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNAladder” ,流式细胞仪检测 3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺对HL 6 0细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase活性检测表明 ,Csapase 3活性明显升高而Caspase 8活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl 2的表达随着受试物浓度的升高而下降。结论 :3 吲哚乙基 (3’ 甲基 2’ 酮 )戊酰胺可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,其诱导凋亡与Bcl 2表达及Caspase 3活性有关。

鼻咽癌细胞中EBER、GALC、CyclinD1表达的意义

目的探讨鼻咽癌细胞中EBER和GALC、Cyclin D1蛋白表达的意义。方法收集13例鼻咽黏膜慢性炎标本作为对照组,55例未分化型非角化性鼻咽癌标本作为实验组,用原位杂交法检测EBER表达,用免疫组化SP法检测GALC和Cyclin D1蛋白的表达。结果对照组和实验组中,EBER的表达阳性率分别为0%(0/13)和94.55%(52/55),GALC蛋白的表达阳性率分别为69.23%(9/13)和34.55%(19/55),Cyclin D1蛋白的表达阳性率分别为46.15%(6/13)和81.82%(45/55),组间差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。55例鼻咽癌中GALC与Cyclin D1蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.285,P<0.05)。结论 EBER、GALC、Cyclin D1可能在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。

Krabbe病1例临床分析并文献复习

目的探讨Krabbe病临床特点、诊断及患儿预后。方法选择2022年03月15日于甘肃省妇幼保健院就诊的1例Krabbe病患儿(患儿1)为研究对象。采用回顾性分析方法对其临床资料和影像学资料进行分析,并采用二代基因测序技术对患儿1及其父母进行基因检测;采用本研究设定的检索策略,对国内外数据库中Krabbe病相关研究进行文献复习。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》,监护人对患儿的诊治及基因检测均知情同意。结果①患儿1,女性,4个月龄,主要临床表现为阵发性发热、易激惹、喂养困难、运动发育倒退及肌张力增高。视频脑电图监测可见其睡眠期左侧额、额极、中央中线、中后颞区较多低中波幅尖波、尖慢复合波阵发性同步簇发、散发。头颅MRI结果显示双侧小脑半球,双侧内囊后肢及双侧侧脑室旁可见对称性异常信号,呈长T1长T2信号。二代基因测序结果显示,患儿1的GALC基因有2个杂合突变,分别为c.908+1(IVS8)G>A的剪接点突变(致病性突变),以及c.194(exon1)G>A,导致氨基酸改变p.G65E,这2个突变分别来源于其母亲、父亲。患儿1被确诊为Krabbe病(早发婴儿型)。对患儿1未予特殊治疗,随访期内患儿1主要表现为喂养困难、异常姿势及反复呼吸道感染,于9个月龄时死亡。②文献复习结果:在国内外数据库中共计检索出7篇关于Krabbe病研究相关文献,涉及患儿11例(患儿2~12),加上本研究患儿1,共计12例Krabbe病患儿。这12例患儿的主要临床表现为哭闹、喂养困难和精神运动发育倒退。结论Krabbe病患儿主要临床表现为易激惹、喂养困难,精神运动发育迟缓或倒退。其头颅MRI表现为双侧对称性脑白质或内囊后肢异常信号,GALC基因突变有助于确诊该病患儿。对该病患儿迄今尚无特异性治疗措施,患儿预后差。

串联质谱检测干血滤纸片多种溶酶体酶活性方法的建立

目的建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（GALC）、酸性α－葡萄糖苷酶（GAA）、α－半乳糖苷酶（GLA）、α－L－艾杜糖苷酸酶（IDUA）活性。方法 方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗传代谢性疾病筛查的2 175份干血滤纸片标本和2012年9月至2014年1月在新华医院儿科就诊的20例溶酶体贮积病（lysosomal storage disorders，LSDs）患儿干血滤纸片样本。干血滤纸片提取液与酶底物及内标孵育后，经液液和固相萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价方法的线性、精密度、准确度和最低检测限；检测2 175份新生儿－干血滤纸片样本，0.5～99.5百分位数法确立4种酶活性参考区间；同时检测20例LSDs患儿干血滤纸片样本进行临床验证。结果 酶活性测定批内和批间精密度为1.7%～11.8%，批内和批间准确度为85%～115%，产物和内标实测浓度比值与添加的理论浓度比值线性系数为0.997～0.999。GALC、GAA、GLA和IDUA的最低检测限分别为0.03 μmol/（L·h）、0.09 μmol/（L·h），0.12 μmol/（L·h），0.16 μmol/（L·h）；初步确定新生儿酶活性参考区间分别为GALC[0.51～8.51 μmol/（L·h）]，GAA[1.99～22.22 μmol/（L·h）]，GLA[1.68～41.59 μmol/（L·h）]，IDUA [2.36～19.21 μmol/（L·h）]；20例LSDs患儿酶活性明显低于参考区间，串联质谱法能有效检出Krabbe、Pompe、Fabry、MPSⅠ患儿。结论 成功建立了串联质谱法检测干血滤纸片中GALC、GAA、GLA、IDUA活性。

5-溴-4-氯吲哚-3-基-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷的合成

首次报道了以β-溴代四乙酰半乳糖和N-乙酰基-5-溴-4-氯-3-羟基吲哚为原料,经过7步化学反应,合成了用于检测白色念珠菌的N-乙酰胺基半乳糖苷酶底物5-溴-4-氯吲哚-3-基-N-乙酰基-β-D-氨基半乳糖苷,并通过核磁、质谱以及生物测定确证其结构。

^125I粒子照射诱导人前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨^125I粒子持续低剂量率照射诱导人前列腺癌细胞凋亡的作用机制。方法用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析^125I粒子持续低剂量率照射对PC3细胞的凋亡诱导作用，检测天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶Caspase-3活性来观察其对PC3细胞的凋亡诱导途径，并通过间接免疫荧光技术检测其对Bcl-2表达的影响。结果DNA琼脂糖凝胶电泳可观察到清晰的“DNA梯度”，流式细胞仪检测^125I粒子持续低剂量率照射对PC3细胞具有明显的凋亡诱导作用。Caspase-3活性检测表明，Caspase-3活性无明显变化。流式细胞仪分析表明Bcl-2的表达随^125I粒子剂量的增加而下降。结论^125I粒子持续低剂量率照射可诱导PC3细胞凋亡，其诱导凋亡与Bcl-2表达有关，与Caspase-3活性无关。

系统性红斑狼疮患者外周血Vα24 Vβ11 NKT细胞的初步研究

目的研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中Vα24 Vβ11 NKT细胞的数量以及经脂类物质α-半乳糖神经酰胺酶（α-Galeer）体外刺激后Vα24 Vβ11 NKT细胞的增殖情况。方法①运用流式细胞仪技术检NSLE患者外周血PBMC中Vα24 Vβ11 NKT细胞的表达；②在SLE患者PBMC体外培养体系中加入α-Galeer及白细胞介素（IL）-2，7d后观察Vα24 Vβ11 NKT细胞的增殖情况。结果SLE患者外周血PBMC中Vα24 Vβ11 NKT细胞数量减少（0.039±0.023）％低于正常对照组（0.200±0.060）％，差异有统计学意义（P〈0.05），经α-Galeer刺激后正常人Vα24 Vβ11 NKT细胞明显增殖（4.52±5.11）％，而SLE患者无增殖（0.06±0.11）％（P〈0.05）。结论SLE患者PBMC中Vα24 Vβ11 NKT数量下降且功能存在异常。