华卟啉钠在SD大鼠体内代谢产物的质谱分析

目的考察灌胃给药华卟啉钠在大鼠体内的主要代谢产物和代谢途径。方法收集华卟啉钠灌胃后大鼠的血浆、尿液和粪便,采用Thermo Q Exactive Orbitrap四极杆-轨道阱高分辨质谱仪对大鼠尿、粪及血浆中的代谢产物进行研究,通过获得的精确分子量、二级碎片图谱,推断SD大鼠尿、粪及血浆中的代谢物,并绘制华卟啉钠在SD大鼠体内的代谢途径。结果在大鼠的尿、粪及血浆样品中共检测到10个代谢产物,主要为两卟啉之间的醚键断裂后的产物及其进一步加氢、N-甲基化和O-甲基化产物。结论华卟啉钠在大鼠体内以Ⅰ相代谢产物为主。

华卟啉钠光动力疗法对细胞异常增殖影响的体内、外实验研究

目的观察华卟啉钠(DVDMS)光动力疗法(PDT)对细胞异常增殖的影响。方法采用小动物活体成像仪观察DVDMS在小鼠体内的吸收和分布;采用MTT法观察DVDMS-PDT对HaCaT细胞和人口腔表皮样癌细胞(KB)细胞增殖的影响;采用小鼠阴道上皮模型观察DVDMS-PDT对细胞异常增殖的影响。结果 DVDMS在小鼠皮肤组织中分布均匀,静脉注射和局部给药后在小鼠皮肤中均具有较高浓度;DVDMS-PDT可显著抑制HaCaT细胞和KB细胞的增殖,当光斑直径固定时,改变照射时间和输出功率对增殖抑制率和IC_(50)值影响不大;DVDMS-PDT可显著抑制己烯雌酚诱导的小鼠阴道上皮细胞过度增殖,一次PDT治疗即可达到较好的治疗效果。结论 DVDMS-PDT可显著抵制细胞异常增殖,作用机制尚需进一步研究。

华卟啉钠的光漂白性质研究

目的:观察华卟啉钠(DVDMS)在不同溶液中及动物皮肤中的光漂白性质。方法:采用微量分光光度计,测量不同浓度DVDMS(10、20、40μg/m L)在生理盐水(NS)、RPMI-1640培养基(RPMI-1640)、含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基(RPMI-FBS)和Ha Ca T细胞悬液中的吸收峰;设置DVDMS浓度1、2.5、5、10、20、40μg/m L,采用酶标仪分别检测在激光照射3、6、10、20、40、50、60、120、180 min后DVDMS在上述4种溶液中的光漂白;正常和银屑病裸鼠均尾静脉注射DVDMS 2 mg/kg,采用小动物活体成像仪观察DVDMS在皮肤组织中的分布及激光照射后在银屑病模型动物皮肤组织中的漂白现象。结果:DVDMS 10、20、40μg/m L在本实验设置的4种溶液中特征吸收峰明显;在前期药效学研究的条件下(激光照射3 min),DVDMS在4种溶液中发生了光漂2白;在180 min内,DVDMS的光漂白呈现先快后慢的二相过程;DVDMS在正常和银屑病模型动物组织中分布均匀,在9.6 J/cm激光照射后,DVDMS在银屑病模型动物皮肤组织中发生了明显光漂白。结论:DVDMS体外光漂白受光剂量、初始浓度、溶剂种类的影响,符合二级动力学模型,在银屑病模型动物皮肤组织中被激光照射后可发生光漂白。

华卟啉钠介导的光动力疗法在体外和体内对肿瘤生长的抑制作用

目的:观察华卟啉钠(sinoporphyrin sodium,DVDMS-2)介导的光动力疗法(DVDMS-2-PDT)在体内外对肿瘤生长的抑制作用及其强度。方法:用噻唑蓝(MTT)法检测DVDMS-2在体外对4种肿瘤细胞(人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞H460、人胃癌细胞BGC823和人肾癌细胞Ketr-3)的生长抑制作用。采用小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型,按2mg/kg单次尾静脉注射给予DVDMS-2,给2药24h后进行光动力治疗,分别设低、中、高剂量照射组(分别为38、76、152J/cm),另设生理盐水阴性对照组和阳性对照组(给予210mg/kgPhotofrin,按76J/cm进行光照射),实验结束后,称瘤质量,计算各组肿瘤生长抑制率。采用裸鼠H460细胞荷瘤动物模型,设DVDMS-2低、中、高剂量组(分别为0.5、1.0、2.0mg/kg),另设生理盐水阴性对照组和阳性对照组(给予10mg/kg2Photofrin),激光照射条件为76J/cm,试验结束后,计算各组肿瘤质量、肿瘤体积、相对肿瘤增殖率T/C(%)等指标。利用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果:DVDMS-2对HepG2、H460、BGC823和Ketr-3细胞均有明显的生长抑制作用,MTT法测定其IC值为0.207～0.584μg/mL。小鼠肉瘤S180移植性肿瘤模型抑制实验中,低、中、高剂量照射组的平均肿瘤抑制率分别为5082.83%、88.56%、95.59%,与阴性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。裸鼠H460细胞荷瘤动物模型中,DVDMS-20.5、1.0和2.0mg/kg对裸鼠异体移植瘤的抑制率分别为38.8%、47.9%和53.9%,与阴性对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:DVDMS-2体内外应用对肿瘤生长均有明显的抑制作用。

华卟啉钠的抗肿瘤作用研究进展

光动力疗法(PDT)是肿瘤治疗的新策略,其关键因素包括光敏剂和匹配的光源。作为新一代高纯度光敏剂,华卟啉钠(DVDMS)具有活性成分明确、含量高、有效剂量低、治疗后避光时间短等特点,安全性也较好。随着其声敏性的发现,DVDMS介导的声动力治疗进一步拓展了其研究和应用范围。研究表明DVDMS有望用于抗肿瘤、抗菌、治疗银屑病、开发治疗诊断试剂等,具有较好的开发和应用前景。本文将对华卟啉钠的抗肿瘤活性及其机制的研究进展进行综述。

华卟啉钠介导的声动力疗法联合声诺维促脑胶质瘤凋亡的体内外实验研究

目的 探讨华卟啉钠介导的声动力疗法(SDT)联合声诺维对脑胶质瘤的凋亡作用。材料与方法 将体外培养的C6胶质瘤细胞随机分为对照组、华卟啉钠组、超声组、超声联合微泡组、SDT组和声动力联合微泡组(SDT-MB组),治疗后采用电子自旋共振法检测活性氧的产生。将建模后的C6胶质瘤荷瘤大鼠同样随机分为6组,每组20只,治疗后采用Tunel染色检测细胞凋亡率,透射电镜观察细胞形态学变化,免疫组化检测Caspase-9、Caspase-3、CD31、Claudin-5、Caveolin-1的表达和Cyt-c的释放,记录6组荷瘤大鼠的生存期。结果 与其他4组相比,SDT组和SDT-MB组检测到单线态氧的产生。与其他实验组相比,SDT-MB组荷瘤大鼠胶质瘤细胞的凋亡率最高[(37.10±0.77)%,F=2.35,P<0.05],细胞形态学改变最为明显,并且存活时间显著延长[(29.60±4.45)d,F=12.65,P<0.05];免疫组化结果显示SDT-MB组Caspase-9、Caspase-3、Claudin-5表达、Cyt-c释放显著上调,Caveolin-1、CD31表达显著下调。结论 华卟啉钠介导的声动力疗法联合声诺维可在体外导致单线态氧的产生,并且能促进荷瘤大鼠脑胶质瘤凋亡、引起荷瘤大鼠血-脑屏障发生破坏、延长荷瘤大鼠的生存时间,而且这一凋亡过程与线粒体内源性凋亡途径有关。

华卟啉钠光动力疗法对人舌鳞癌SCC-15细胞的作用

目的:研究华卟啉钠( DVDMS)介导的光动力治疗( DVDMS-PDT)对舌鳞癌细胞SCC-15 体外增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:体外培养SCC-15 细胞,CCK-8 法检测DVDMS 药物毒性,酶标仪M3 及荧光显微镜确定孵育时间。将SCC-15细胞随机分成空白对照组、单药组、单光组、DVDMS-PDT 组,CCK-8 检测细胞存活率,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果: DVDMS 浓度≤2 μg /ml 对SCC-15 细胞无明显杀伤作用,其在SCC-15 细胞内的最佳孵育时间为6 h,浓度为2 μg /ml 的DVDMS-PDT 对SCC-15 呈剂量依赖性抑制作用( P < 0. 05)。DVDMS-PDT 诱导SCC-15 凋亡率显著高于对照组、单药组和单光组( P < 0. 001)而划痕愈合百分比明显低于各对照组( P < 0. 05)。结论: DVDMS-PDT 能抑制舌鳞癌SCC-15细胞的增殖和迁移能力,促进细胞凋亡。

华卟啉钠介导的光动力疗法对人舌鳞癌细胞株HSC-4的增殖和迁移能力的影响

目的:探讨华卟啉钠(sinoporphyrin sodium,DVDMS)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的口腔舌鳞状细胞癌(oral tongue squamous cell carcinoma,OTSCC,简称鳞癌)细胞株HSC-4的增殖及迁移能力的影响。方法:检测DVDMS细胞毒性,细胞摄取药物情况,将细胞分为对照组以及不同浓度的DVDMS-PDT处理组(DVDMS孵育浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0mg/L),激光能量密度为0.75、1.50、3.00、6.00J/cm2,细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测DVDMS-PDT对细胞增殖能力的影响,划痕实验和Transwell小室实验观察细胞迁移能力的变化。结果:DVDMS毒性实验显示单纯药物对细胞毒性较小,联合激光照射后,可显著抑制HSC-4细胞增殖(P均<0.05),与对照组比较,划痕愈合率降低,Transwell小室穿膜细胞数减少(P均<0.05)。DVDMS药物浓度2.0 mg/L,体外孵育6h,光能量密度在3.00J/cm2以上可有效杀伤HSC-4。结论:DVDMS-PDT可有效杀伤舌鳞癌细胞,抑制HSC-4的迁移。光敏剂浓度、孵育时间、光能量密度是影响疗效的重要因素。

HPLC法测定荷瘤小鼠血浆中华卟啉钠含量及药动学研究

目的建立HPLC法测定荷瘤小鼠体内华卟啉钠的含量,并分析其在荷瘤小鼠体内的药动学情况。方法采用Waters XBridge C_(18)(3.0 mm×100 mm,3.5μm)色谱柱,流动相为A:乙腈-甲醇(20∶80),B:水(1%乙酸、0.1%三乙胺),梯度洗脱,流速0.7 ml/min,检测波长380 nm。荷瘤小鼠尾静脉给药后在规定时间点采血,分离得到血浆,乙腈沉淀蛋白后按照上述方法进行样品检测,采用DAS 2.0软件进行统计矩计算和分析。结果华卟啉钠浓度在70.8~14 160 ng/ml范围内线性关系良好(r=0.999 8)。华卟啉钠主要药动学参数:c_(max)=(24 127.59±1 415.23)ng/ml,t_(max)=0.083 h,t_(1/2)=(9.59±1.25)h,MRT_(0-∞)=(11.77±1.73)h,AUC_(0-∞)=(34 775.83±6 185.43)h·ng/ml。结论该方法充分考虑光敏剂华卟啉钠的样品稳定性对检测准确度的影响,具有灵敏、快速、准确、样品处理简单等特点,适用于华卟啉钠临床前荷瘤小鼠血浆样本的分析和研究。

华卟啉钠介导的光动力疗法对裸鼠人舌鳞癌移植瘤杀伤作用的实验研究

目的:探讨华卟啉钠(sinoporphyrin sodium,DVDMS)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)移植瘤治疗的疗效,为今后的临床治疗方案提供理论依据。方法:通过采用BALB/c-nu裸鼠体内移植瘤实验评估DVDMS-PDT对舌鳞癌的杀伤作用。治疗后定期测量小鼠体重、肿瘤体积,计算抑瘤率、生命延长率以评估杀伤作用;通过TUNEL分析和抗Bax、Bcl-2抗体的免疫组织化学法检测细胞凋亡情况。结果:本实验显示,各处理组肿瘤体积均小于对照组,DVDMS-PDT组肿瘤体积减小最明显(P<0.01);DVDMS-PDT组抑瘤率为53.57%,抑瘤效果明显优于其他组(P<0.0001);DVDMS-PDT组生命延长率为61.51%,生存期最长(P<0.05);DVDMS-PDT组Bax蛋白表达明显上调、Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.0001);DVDMS-PDT组TUNEL分析绿色荧光亮点最多(P<0.0001)。结论:DVDMS-PDT对舌鳞癌移植瘤具有明显的杀伤作用,可促进细胞凋亡,抑制细胞增殖。

葡萄糖酸氯己定对牙龈卟啉单胞菌结合华卟啉钠的影响研究

目的探讨葡萄糖酸氯己定(chlorhexidine gluconate,CHX)对牙龈卟啉单胞菌结合华卟啉钠(sinoporphyrin sodium,DVDMS)的影响。方法根据牙龈卟啉单胞菌菌液中加入DVDMS的质量浓度分为4个实验组(10、20、40、80μg/mL DVDMS组)与1个对照组(不加DVDMS),每组再根据加入CHX的质量分数(0、0.05%、0.10%)分为3个亚组,分别记为PBS、0.05%CHX、0.10%CHX亚组。使用光谱仪检测在入射光为405 nm时各组的光谱数据,导入Origin 7.0软件中进行处理,绘制荧光光谱曲线图,并计算各实验组累计相对荧光强度。结果同一质量分数CHX的各实验组随着DVDMS质量浓度的增加,累计相对荧光强度均有上升趋势。在同一质量浓度DVDMS组中,各不同质量分数CHX亚组累计相对荧光强度总的比较,差异均有统计学意义(10、20、40、80μg/mL DVDMS组的F值分别为531.94、1259.04、3585.47、8611.56,均P<0.05);其中,0.05%CHX亚组的累计相对荧光强度大于0.10%CHX亚组,0.10%CHX亚组的累计相对荧光强度大于PBS亚组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论质量分数为0.05%和0.10%的CHX均可增加牙龈卟啉单胞菌与DVDMS的结合,0.05%CHX的作用效果更佳。

癌症光动力治疗和新抗癌光敏剂华卟啉钠

光动力疗法是治疗肿瘤的一种很有前景的新疗法,包括光敏剂和可见光两种因素。将光敏剂注入患者体内后,会很快富集于肿瘤组织,再用特定波长的可见光照射肿瘤病变组织,光敏剂会产生致死性的细胞毒剂(单态氧),杀死肿瘤细胞,同时使肿瘤组织的微血管完全封闭使其营养枯竭,从而导致肿瘤组织坏死。近年来,由于新一代光敏剂(单一的化合物)的创制发明,使光动力疗法治疗恶性肿瘤发展到一个新阶段。在学习、改进、创新的思想指导下,我们对第1代光敏剂Photofrin进行了系统剖析和研究,从中找出了3个有效成分,其光敏活性几乎相同,但比Photofrin强10倍,选择其中之一成分开发成了新型光敏剂华卟啉钠(sinoporphyrin sodium),它将成为我国在抗癌光敏剂领域里有中国知识产权、高效低毒、可产业化生产的新一代高纯度的光敏剂。

声动力疗法对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的观察华卟啉钠声动力治疗(DVDMS-SDT)效应对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用。方法将人增生性瘢痕成纤维细胞悬液分为四组,分别采用MTT法检测人增生性瘢痕成纤维细胞存活率。经流式细胞仪检测,罗丹明123检测线粒体跨膜电位,二氯荧光黄双乙酸盐检测细胞内活性氧,乙酰甲酯衍生物检测细胞内钙离子浓度的变化,33258核染色观察细胞核的形态改变。结果 MTT检测法显示DVDMS-SDT组细胞存活率与其他组间同一时间段比较,差异有统计学意义(P<0.01)。经流式细胞仪检测,线粒体膜电位降低的细胞百分比、细胞内活性氧增高和细胞内钙离子增高的细胞百分比,SDT组与其他组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。33258细胞核染色显示坏死与凋亡、细胞核浓缩和絮状改变、核边集。结论 DVDMS-SDT能显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性,增殖活性受抑制可能与细胞内活性氧和细胞内钙离子浓度增高、膜损伤有关。

基于DVDMS/IR780复合纳米粒抗肿瘤声动力实验研究

目的制备一种搭载华卟啉钠(sinoporphyrin sodium, DVDMS)、IR780与全氟己烷(perfluorinated hexane, PFH)的聚乳酸-乙醇酸(poly lactic-co-glycolic acid, PLGA)肿瘤靶向多功能复合纳米粒(DIPP-NPs),评估其理化性质,探讨敏化剂DVDMS、IR780的协同增强声动力治疗(sonodynamic therapy, SDT)作用。方法用超声双乳化法制备DIPP-NPs,对其进行基本表征;采用光镜记录超声辐照前后纳米粒的变化;超声/光声成像系统评价其体外成像能力;激光共聚焦显微镜评价PP-NPs、DPP-NPs、IPP-NPs、DIPP-NPs 4种纳米粒对4T1乳腺癌细胞的体外靶向能力;单线态氧检测法(singlet oxygen sensor green reagent, SOSG)评价其体外活性氧产量;CCK-8法评价其细胞毒性;将4T1乳腺癌细胞分为阴性对照组、仅US组、仅DIPP-NPs组、DPP-NPs+US组、IPP-NPs+US组、DIPP-NPs+US组(n=3),通过CCK-8法检测各组细胞存活率来评价其体外SDT效果;建立4T1乳腺癌荷瘤鼠模型并分为阴性对照组、仅US组、仅DIPP-NPs组、DPP-NPs+US组、IPP-NPs+US组、DIPP-NPs+US组(n=3),通过测量各组荷瘤鼠肿瘤体积/质量,计算肿瘤体积/质量抑制率来评价其体内SDT效果。结果成功制备DIPP-NPs,不同显微镜下观察呈圆球形,大小均一,粒径(341.17±16.97)nm,电位(-12.77±0.88)mV,DVDMS、IR780的包封率分别为(92.84±1.58)%、(96.57±1.48)%;DIPP-NPs经超声辐照后发生相变,光镜下观察到其直径随辐照时间延长而增大,体外超声成像显示其回声强度随辐照时间延长而增强;体外光声成像显示其光声信号随纳米粒浓度升高而增强;激光共聚焦显微镜观察到DIPP-NPs组中4T1细胞周围的纳米粒明显多于其他3组;SOSG体外活性氧检测结果发现DIPP-NPs的活性氧产量随辐照时间延长而增加;CCK-8细胞毒性检测结果显示不同浓度DIPP-NPs未见明显细胞毒性;体外SDT结果显示DIPP-NPs+US组的细胞存活率为(56.04±2.28)%,明显低于DPP-NPs+US组[(76.83±1.52)%]、IPP-NPs+US组[(74.03±2.64)%],差异具有统计学意义(P<0.05);体内SDT实验结果显示DIPP-NPs+US组的肿瘤体积/质量抑制率为(73.28±1.58)%/(75.76±3.49)%,明显高于DPP-NPs+US组[(46.93±4.41)%/(43.50±2.27)%]与IPP-NPs+US组[(47.44±1.27)%/(44.87±4.30)%],差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备肿瘤靶向多功能复合纳米粒DIPP-NPs,其具有良好的协同增强SDT作用。

载DVDMS-Mn脂质体用于双模态影像引导声动力治疗研究

目的 构建集成像与治疗为一体的多功能诊疗颗粒DVDMS-Mn-LPs,探讨其荧光分子成像、MR分子成像及声动力治疗（SDT）潜能.方法 采用薄膜-水化法制备DVDMS-Mn-LPs,观察其形态,检测平均粒径、表面电荷、包封率和Mn2＋含量.通过小动物荧光成像系统拍摄不同质量浓度（0、40、80、120、160μg/ml）DVDMS-Mn-LPs的荧光图片,检测其荧光分子成像效果.通过3.0 T MR仪扫描DVDMS-Mn-LPs T1 WI图像,检测其MR分子成像效果.设置空白对照组、单独超声组（实验组1）、DVDMS-Mn-LPs组（实验组2）与超声＋DVDMS-Mn-LPs组（实验组3）,通过CCK8试验检测各组细胞的活性,以检验DVDMS-Mn-LPs的SDT效果.采用单因素方差分析和最小显著差异t检验处理数据.结果 制得呈球形、分布均匀的DVDMS-Mn-LPs,包封率为（65.56±1.47）%,Mn2＋与DVDMS的物质的量比为1.6：1.荧光分子成像结果显示,随着DVDMS-Mn-LPs质量浓度的升高,荧光强度逐渐升高;MR分子成像结果显示,DVDMS-Mn-LPs的弛缘效率r1值为23.74 mmol·L-1·s-1.体外SDT实验中,实验组3的细胞活性为（54.82±8.55）%,明显低于实验组2的（86.54±2.67）%和实验组1的（8376±6.48）%（F=60.11,t值：-8.35和-9.15;均P〈0.001）.结论 成功构建了DVDMS-Mn-LPs,该脂质体不但具有荧光分子成像、MR分子成像潜能,还具有良好的体外SDT效果,这将为后续体内双模态影像引导下脑胶质瘤的SDT奠定基础.