栉孔扇贝(Chlamys farreri)与华贵栉孔扇贝(C.nobilis)远缘杂交子代的胚胎发生及幼虫生长发育的初步研究

采用单一自由度独立比较的方法,研究了两个栉-华杂交组合HCH(栉孔扇贝长岛群体×华贵栉孔扇贝)和HJH(栉孔扇贝胶南群体×华贵栉孔扇贝)以及栉孔扇贝种内交配组合ZZ的胚胎发生及幼虫生长发育过程。结果表明,栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝的种间杂交F1在生长和发育的两个环节上是不一致的,在涉及器官及其功能形成的发育环节上,杂交表现负效应;而在涉及形态变化和增大的生长环节上,杂交表现正效应,存在杂种优势现象。两个杂交组合中,HJH综合效果较好,授精22h平均孵化率达到95.8%,与ZZ基本接近;30日龄平均变态率达61.5%,明显好于组合HCH的42.0%;8日龄幼虫平均大小达143.4μm×123.2μm,表现出更强的生长优势。这些结果为全面评价栉孔扇贝与华贵栉孔扇贝杂交体系应用价值和选配优良杂交组合提供了理论依据。

体重和温度对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)耗氧率和排氨率的影响

采用室内实验生态学方法对华贵栉孔扇贝的耗氧率和排氨率进行了研究。旨在为华贵栉孔扇贝养殖容量的调查及生态生理的研究提供参考,并可为海洋生态系统动力学和贝类能量学研究提供科学依据。实验结果表明,在实验温度(13—33℃)范围内,华贵栉孔扇贝的耗氧率(OR)和排氨率(NR)与体重(W)都呈负相关,可以用Y=aW-b表示。华贵栉孔扇贝的耗氧率和温度的关系可以表示为OR=-c+b1T-b2T2。在13—28℃温度范围内,华贵栉孔扇贝的耗氧率随温度的升高而增加,28℃时,耗氧率达到最大值,温度升高到33℃时,耗氧率反而下降。而排氨率与温度的关系可以表示为1NR=c1edT,在实验温度范围内,排氨率随温度的升高则呈持续升高趋势。华贵栉孔扇贝呼吸和排泄Q10值范围分别为0.466—2.471和1.129—2.437。在23—28℃温度范围内,不同规格华贵栉孔扇贝的耗氧率和排氨率的比值(原子数O:N)较高。方差分析表明,体重、温度及二者的交互作用对华贵栉孔扇贝的耗氧率和排氨率均有极显著的影响(P<0.01)。华贵栉孔扇贝的日常代谢明显高于标准代谢,耗氧率和排氨率平均值分别提高29.9%和69.4%。

华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)壳色与闭壳肌颜色遗传规律的研究

华贵栉孔扇贝壳色和闭壳肌颜色具有多态性,其中贝壳的桔黄色表型和闭壳肌的黄色表型具有重要的经济价值,是选择育种中的重要目标性状,对这些性状遗传规律的研究可为选择育种提供理论依据。采用自交、正反杂交和卡方检验方法对华贵栉孔扇贝的桔黄色与枣褐色等2个壳色和黄色与白色等2个闭壳肌颜色的遗传规律进行了研究。结果表明,华贵栉孔扇贝贝壳颜色和闭壳肌颜色均属质量性状,受基因控制,可以遗传,不受环境影响;贝壳桔黄色表型对枣褐色表型为显性;闭壳肌白色表型对黄色表型为显性;壳色和闭壳肌颜色为两个互不连锁的独立性状,在后代遗传过程中可以自由组合,独立遗传,不受母性影响;枣褐色贝壳或黄色闭壳肌个体均为隐性纯合体,其后代性状均与亲代相同;由于不能确定桔黄色贝壳或白色闭壳肌个体属于显性纯合还是杂合,显性纯合家系的获得必须通过建立家系并繁育2代才能实现。

华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)壳色遗传规律的研究

采用双列杂交方法对华贵栉孔扇贝三种壳色(桔黄色、枣褐色、紫褐色)的遗传规律进行了研究。结果显示,桔黄色♂×枣褐色♀和桔黄色♂×紫褐色♀的子代均全部表现为桔黄色,桔黄色♀×枣褐色♂和桔黄色♀×紫褐色♂的子代壳色比例分别为桔黄色:枣褐色=1:1和桔黄色:紫褐色=3:1,表明桔黄色对枣褐色和紫褐色均为显性,且不存在母性遗传;在桔黄色♂×桔黄色♀的两个家系中,一个家系的子代全部表现为桔黄色,另一个家系的子代中桔黄色:枣褐色约为3:1,表明第1家系有一个亲本为显性纯合,第2家系2个亲本均为杂合;在枣褐色♂×枣褐色♀和紫褐色♂×紫褐色♀两个家系中,其子代分别全部表现为其亲本的颜色,表明枣褐色和紫褐色个体均为隐性纯合体。实验所设各家系子代壳色均表现出了与亲本相同的颜色,表明华贵栉孔扇贝的壳色属质量性状,能够稳定遗传,并非由环境决定,对华贵栉孔扇贝壳色的选育有效。

一种电转染华贵栉孔扇贝基因编辑的应用方法

目前,CRISPR/Cas9基因编辑技术已成为动植物遗传育种领域研究的热点。为解决CRISPR技术在贝类生产实践中应用难的问题,本文探究了一种电转染的双壳贝类基因编辑方法。利用本方法分别对华贵栉孔扇贝受精卵的SRB-like-3和MSTN进行编辑,并成功地将编辑后的幼虫培养到稚贝。在编辑后5 d和10 d的D-型幼虫及40 d的稚贝中都检测到了荧光,并且编辑MSTN后的10 d幼虫,其壳长显著大于编辑SRB-like-3组和对照组。本研究表明:电转染基因编辑技术在贝类中具有可行性。本方法具有成本低、操作简单、易推广等优点,可以广泛应用于贝类的遗传育种领域。

儿茶酚胺类激素对华贵栉孔扇贝循环生理的影响

【目的】探究儿茶酚胺类激素对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)循环生理的影响,为贝类应对环境胁迫的生理响应研究提供基础。【方法】将0.2、1.0、2.0μmol/L的儿茶酚胺类激素(多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素)注射到华贵栉孔扇贝体内,运用多普勒超声成像技术实时监测扇贝在0、5、20、40、60、180、300 min时的心率、舒张末期速度、收缩峰值速度、血流量等循环生理指标变化情况。【结果】注射0.2μmol/L的多巴胺和肾上腺素后,扇贝的心率相对变化率与海水对照组之间均无显著差异(P> 0.05),而舒张末期速度、收缩峰值速度、血流量分别在注射后20、40 min显著高于对照组(P <0.05);注射0.2μmol/L的去甲肾上腺素后,仅舒张末期速度在注射后5 min显著高于对照组(P <0.05);注射1.0μmol/L的儿茶酚胺类激素后,扇贝各循环生理指标的相对变化率平均值在40 min前低于对照组,在60 min时高于对照组;注射2.0μmol/L的儿茶酚胺类激素后,扇贝各循环生理指标的相对变化率平均值在40 min前均低于对照组且为负值,在180 min时高于海水对照组。【结论】低浓度(0.2μmol/L)的儿茶酚胺类激素对扇贝的部分循环生理指标起兴奋作用;中、高浓度(1.0、2.0μmol/L)的儿茶酚胺类激素对扇贝的循环生理指标有先抑制后兴奋的双相调节作用,且浓度越高抑制效果越明显。

石油烃分散液对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)的急性毒性影响

本文通过石油烃分散液对华贵栉孔扇贝的急性毒性试验,经SPSS的probit分析结果表明,石油烃分散液对华贵栉孔扇贝的24 h LC50、48 h LC50、72 h LC50和96 h LC50浓度依次是233.08、147.30、81.67和75.16 mg/L,安全浓度Sc是17.65 mg/L。通过生物富集试验结果显示,华贵栉孔扇贝在120 h内对石油烃的富集效果与浓度和时间成正比。石油烃分散液胁迫下对华贵栉孔扇贝血清中POD、SOD酶活的影响呈现出低浓度促进、高浓度抑制的特征,并对其肝、鳃组织AKP酶活性具有促进作用。

华贵栉孔扇贝主要经济性状对闭壳肌重的影响效果分析

闭壳肌是华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis(Reeve)的产品形式,它的大小成为选择育种的一个重要目标性状,由于其不易测性给选育工作带来困难。采用多元回归和通径分析来了解各经济性状对闭壳肌重的影响程度,从而找出与闭壳肌重的关联度最大的性状作为选育目标性状是本研究的目的。随机挑取同一养殖群体中的152只1龄华贵栉孔扇贝,对其壳长、壳高、壳宽、铰合线长、活体重、软体部重和闭壳肌重等7个性状进行测定并计算性状间的相关系数。以闭壳肌重为依变量,其它性状为自变量进行多元回归和通径分析,计算出对应的通径系数和决定系数。结果表明,7个性状间的相关系数均达到极显著水平(P<0.01);通径分析表明软体部重对闭壳肌重的直接影响最大(0.712),其次是壳宽(0.394),其它经济性状对闭壳肌重的影响是通过软体部重、壳宽来间接实现的;决定系数分析表明其结果与通径分析呈现一致的变化趋势。经多元回归分析,逐步剔除偏回归系数不显著的壳高和铰合线长,建立了壳长、壳宽、活体重和软体部重对闭壳肌重的回归方程:Y=-4.403+0.032X1+0.243X2-0.035X3+0.228X4,R2=0.856。本研究为华贵栉孔扇贝的选择育种提供理论依据。

镉、硒胁迫下华贵栉孔扇贝消化腺差异蛋白表达

【目的】应用蛋白组学技术解析镉(Cd)、硒(Se)胁迫对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)组织中蛋白表达的影响,为扇贝金属蓄积和耐受机制研究提供数据。【方法】将华贵栉孔扇贝置于分别含有Cd、Se、Cd+Se的海水中,采用非标记定量Label-free蛋白组学技术分析对照组和处理组扇贝消化腺的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并对其进行GO富集、KEGG通路富集和蛋白质相互作用网络分析。【结果】CT组的闭壳肌和外套膜中的Cd质量分数显著高于鳃、性腺和消化腺(P<0.05)。除闭壳肌外,在镉、硒、Cd+Se胁迫下扇贝其他组织中的Cd或Se质量分数均显著增加(P<0.05)。Se+Cd胁迫下扇贝闭壳肌、外套膜和消化腺中的Se质量分数显著降低(P<0.05),说明扇贝中Se和Cd相互拮抗。共鉴定出887个DEPs;与对照组相比,Se组45个上调蛋白、9个下调蛋白,Cd组15个上调蛋白、10个下调蛋白,CdSe组13个上调蛋白、3个下调蛋白。生物信息学分析发现,Cd、Se胁迫的DEPs主要涉及参与细胞过程、代谢过程和生物调节,这些过程与KEGG通路分析所强调的信号通路有关。【结论】Cd、Se胁迫影响华贵栉孔扇贝消化腺多种蛋白的表达,导致相关代谢紊乱。

温度与盐度对华贵栉孔扇贝幼贝存活与生长的互作效应研究

在室内实验条件下,采用二因素五水平的正交实验方案,设置了5个温度梯度(15、19、23、27、31℃)和5个盐度梯度(18、22、26、30、34),研究了温度与盐度对华贵栉孔扇贝幼贝存活与生长的互作效应。结果表明:(1)华贵栉孔扇贝在最适盐度范围内,幼贝适宜的存活温度为15.0～30.5℃;最适存活温度19.0～27.0℃;适宜生长温度15.0～30.4℃,最适生长温度23.3～27.9℃。在最适温度范围内,幼贝适宜的存活盐度为20.3～34.0;最适存活盐度27.9～34.0;适宜生长盐度19.3～34.0,最适生长盐度21.9～34.0。(2)温度和盐度对幼贝存活和生长的影响存在互作效应。当盐度处于最适宜范围时,幼贝的适宜及最适温度范围达到最大;当盐度向两个极端移动时,幼贝的适宜及最适温度范围变小;但是适宜及最适温度范围的中心点不会随盐度的改变而改变。当温度处于最适宜范围时,幼贝的适宜及最适盐度范围达到最大;当温度向两个极端移动时,幼贝的适宜及最适盐度范围变小;但是适宜及最适盐度范围的中心点不会随温度的改变而改变。(3)幼贝对低温的适应能力强于对高温的适应能力,对高盐的适应能力强于对低盐的适应能力。

栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝及其种间杂交子代、种内交配子代的ISSR分析

通过对栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝及其两者的种间杂交子代、种内交配子代的ISSR标记分析,研究了4种子代群体之间以及子代群体与共享亲本个体间的遗传关系。使用3组ISSR引物,得到清晰的扩增位点169个,平均多态位点检出率66.44%。分析结果显示:杂交子代个体中具有来自父母本的扩增位点,表明杂交子代确为杂种;杂交子代群体不仅具有较高的遗传多样性,而且在与亲本个体和其他子代群体间的遗传关系上表现出与种内交配子代的明显差异;另外杂交子代与2种亲本的遗传关系上并不对等,表现出明显的倾向性,更加偏向于母本一方。

浒苔多糖对华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活性的影响

于华贵栉孔扇贝体内注射了0.1%,0.25%,0.5%3个不同浓度的浒苔多糖后,在24,48,72 h分别测定了华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活力。结果表明:0.1%和0.25%实验组扇贝血淋巴中SOD酶活仅在注射24h后显著地高于对照组(P<0.05),而0.5%实验组在注射24 h后极显著高于对照组(P<0.01),而且在注射48h和72 h后仍显著高于对照组(P<0.05);0.1%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶的作用无显著影响,而0.25%和0.5%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶活力在不同测定时间都表现出明显的促进作用,其中0.5%实验组对血细胞中溶菌酶作用效果极显著(P<0.01);说明浒苔多糖具有增强华贵栉孔扇贝免疫活性的作用。

栉孔扇贝♀×华贵栉孔扇贝♂受精及早期胚胎发育过程的细胞学荧光显微观察

为探讨贝类杂交优势 ,利用HOECHST3 3 2 5 8对已固定样品进行染色的方法 ,连续观察了栉孔扇贝♀×华贵栉孔扇贝♂受精的细胞生物学过程 ,初步证明了这 2种远缘扇贝种类之间进行杂交的可行性。结果表明 ,栉孔扇贝的成熟未受精卵子处于第一次减数分裂中前期 ,部分来自华贵栉孔扇贝的异源精子可顺利进入卵子并激发后者完成 2次减数分裂 ,排出第一及第二极体。成熟的雌雄原核形成后完成融合过程 ,形成合子核 ,受精过程结束。大部分杂交受精卵及杂种早期胚胎可以正常发育 ,但其发育进程较种内近交对照组有明显的差别 ,具体表现在延缓性和不同步性 2个方面。

华贵栉孔扇贝1龄贝数量性状的相关性及通径分析

为了查明华贵栉孔扇贝数量性状间的相关性及影响产量的因素组成,随机选取203只1龄贝,对其形态性状(壳长、壳高、壳宽)和重量性状(活体重、闭壳肌重)等5个数量性状进行测量,并应用遗传相关、多元回归、通径分析等方法对数据进行了分析。结果表明受测的5个数量性状间的相关系数均达到极显著水平(P<0.001)。3个形态性状对2个重量性状的影响并不相同:对活体重起直接作用最大的是壳高,其直接决定作用达20.31%,通过壳长的间接决定作用达25.27%;对闭壳肌重直接作用最大的是壳长,其直接决定作用达22.48%,通过壳宽的间接决定作用达16.10%。建立了利用形态性状估计重量性状的回归方程。该结果为华贵栉孔扇贝选择育种提供了理论依据,即以提高活体重为目标,主要选择壳高,同时加强对壳长的协同选择;以提高闭壳肌重为目标,主要选择壳长,同时加强对壳宽的协同选择。

华贵栉孔扇贝数量性状的相关性及通径分析

为查明华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)数量性状间的相关性,随机选取526只扇贝,对其形态性状(壳高、壳长、绞合线长和壳厚)和质量性状(总质量、贝柱鲜质量、鲜肉质量、干肉质量和贝柱干质量)进行测量,采用多元回归与通径分析方法研究了5个易测数量性状(壳高、壳长、绞合线长、壳厚和总质量)对鲜肉质量、贝柱鲜质量和贝柱干质量的影响。结果表明,总质量与鲜肉质量、贝柱鲜质量和贝柱干质量呈极显著的正相关(P<0.01)。多元回归与通径分析显示,这5个易测数量性状指标中,总质量对3个经济性状的正面影响非常大,其他指标的影响较小甚至不明显。

低温和饥饿对华贵栉孔扇贝幼虫生长和存活的影响

为了弄清我国南方低温季节能否利用自然水温进行华贵栉孔扇贝人工育苗以及饵料缺乏对幼虫的影响,于2008年10月上旬和11月下旬,分别在水温25.5—28.0℃和18.2—22.5℃条件下,研究了低温和饥饿对幼虫生长、存活的影响。实验分两次设置常温、低温和饥饿3个组进行。结果表明,低温情况下,幼虫摄食较少,活力差、绝大部分沉入水底,生长缓慢,发育迟缓,但存活率仍较高;饥饿不但抑制幼虫的生长和发育,同时也显著地降低幼虫的存活率。此外,低温和饥饿的结合会加剧对幼虫生长、发育、存活等的抑制作用。这些结果说明在我国南方水温低于23℃的季节利用自然水温已不适合进行华贵栉孔扇贝苗种生产。

华贵栉孔扇贝不同壳色后代早期发育阶段性状比较

为了提高华贵栉孔扇贝的产量以及通过人工选择培育新品种,利用同一养殖群体中的橙色、褐色、橙褐色个体为亲本,采用个体间随即交配的方法,于2008年10月14日、16日和18日分批建立了橙色、褐色、橙褐色三个不同群体。为了减少环境效应,自受精卵孵化开始,三个群体一直被培养在相同的环境条件下。结果发现,三个群体在受精卵孵化率、幼虫存活率、幼虫及稚贝生长等方面都存在显著差异。就孵化率而言,橙色的最高、褐色的次之、橙褐色的最低,分别为97.5%、92.6%和91.3%;就幼虫存活率而言,橙褐色的最高、褐色的次之、橙色的最低,10日龄时分别为67.0%、43.8%和16.0%;就幼虫期生长而言,褐色生长最快、橙褐色次之、橙色生长最慢,壳长的日增量分别为9.49μm、8.30μm和7.73μm,壳高的日增量分别为8.18μm、7.17μm和6.61μm,且壳长比壳高生长得快;就稚贝期生长而言,橙褐色生长最快、橙色次之、褐色生长最慢,壳长的日增量分别为64.6μm、58.6μm和49.0μm,壳高的日增量分别为78.6μm、70.5μm和59.5μm,但壳高比壳常生长得快。很明显,华贵栉孔扇贝的壳色与其生长、存活有密切的联系,这为其选择育种提供了理论依据。

不同贝龄华贵栉孔扇贝数量性状的通径分析

对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)3月龄、6月龄、7月龄、9月龄和15月龄的4个数量性状(壳高、壳长、壳宽和体质量)进行了测量,分析了性状间的表型相关性及形态性状对体质量的影响程度。结果表明,4个数量性状两两间呈正相关,其相关系数达到极显著水平(P<0.001)。形态性状与体质量间,壳长对体质量的相关系数较高,壳宽对体质量的相关系数较小。通径分析显示壳宽对体质量的通径系数最小,除7月龄外,壳高对体质量的通径系数大于壳长。相关指数分析的结果与通径分析结果相似,形态性状对体质量的相关指数为0.910～0.943。经多元回归分析,建立了4个月龄时期壳高、壳长和壳宽对体质量的线性回归方程。研究表明,在6月龄后以壳高为主要选择指标,可达到对体质量的选择,研究结果为华贵栉孔扇贝选择育种中选育指标的确立提供了理论指导。

华贵栉孔扇贝三倍体的研究

本文报道了用细胞松驰素B、高温和低温休克等方法诱导华贵栉孔扇贝（Chloamysnobilis）三倍体的实验结果。在26.0～28．0℃条件下，选用不同浓度的细胞松驰素B0．1、0．3、0．5、0．7和1．0mg／dm3，在受精后15min，处理受精卵15min，三倍体诱导率分别为12．5％、37．5％、68．0％、66．6％和81．0％，其中0．5～1．0mg／dm3浓度的细胞松驰素B对改变倍性最有效。高温休克选用31．0、33.0、35.0和37．0℃处理受精卵，最高三倍体诱导率达46.7％（33．0℃，处理15min）。低温休克选用6．0、8．0、10．0和12．0℃处理受精卵，最高三倍作诱导率为40．7％（10．0℃，处理20min）。实验结果表明，随着处理强度的增大和处理时间的延长，三倍体诱导率增高、但孵化率下降，畸型率上升。用高温休克处理的实验组幼虫生长速度较对照组快。作者认为，在商业性生产中，温度休克是诱导扇贝三倍体的一种简便、有效的方法。文中还就细胞松驰素B与温度休克诱导三倍体的机制进行了讨论。

几种饵料对华贵栉孔扇贝浮游幼虫生长和成活率的影响

研究了湛江叉鞭金藻、亚心形扁藻、小球藻、干酵母、湛江叉鞭金藻与干酵母、湛江叉鞭金藻与亚心形扁藻对华贵栉孔扇贝幼虫生长和成活的影响。试验结果表明,投喂金藻和亚心形扁藻混合组生长速度最快,投喂金藻和酵母组次之,单独投喂小球藻和亚心形扁藻时生长速度最差。投喂酵母组成活率最高。