单个分子光学检测仪器的搭建和检验

在Nikon TE300倒置显微镜的基础上 搭建并检验了两套单个分子检测系统 即远场共焦显微镜和远场宽场照明显微镜。实验证明,所搭建的仪器达到了单个分子检测的水平 为利用单个分子光学检测技术研究生命科学中的问题奠定了基础。

罗丹明标记的磷脂分子在亲水表面的单个分子行为(英文)

单个分子实验有很重要的意义,一方面,对于非均相体系,单个分子实验可得到分子性质分布信息;另一方面,对于均相和非均相体系,单个分子轨迹直接记录了分子性质的涨落,包含了丰富的动力学信息.在诸多单个分子检测技术中,单分子光学检测技术具有快速、无损、可探测到凝聚相内部单个分子的能力.进行单分子检测的关键是消除拉曼和瑞利散射以及杂质荧光等背景的干扰,利用共焦、近场和隐失场激发减少激发体积和检测体积,可以降低背底,提高信噪比.本实验利用共焦荧光显微镜观测单个罗丹明标记的磷脂分子在亲水玻璃表面的扩散、脱附,及其荧光闪烁的行为.实验表明,除由表面的平均力场阻碍分子运动外,还有一些特殊位点会造成长时间的特异性吸附,并得到特异性吸附的分子的脱附速率,(5.9±0.2)s-1.用穿越时间分布函数测得分子在表面的扩散速率为(3.3±0.1)×10-8cm2·s-1,与分子在磷脂膜中的扩散速率相当.观测到了一些吸附的分子出现了荧光闪烁的现象,并对其产生原因进行了一些分析.

单个分子光学检测仪器的搭建和应用

单个分子光学检测技术是近20年来迅速发展起来,并在生命科学领域有广泛应用的一项新兴技术。以单个分子为研究对象可以得到基于单个分子的统计行为,这同传统的大量分子体系实验所得的平均值相比包含更多更深层次的信息。同时,在单个分子水平上可以直接观察单个事件的发生与发展,这在传统的大量分子体系中是做不到的。这一技术为生命过程在分子水平上的可视化开辟了道路。

在单个分子水平上研究罗丹明标记的磷脂分子的扩散(英文)

利用共焦荧光显微镜在单个分子水平上检测了罗丹明标记的磷脂分子(T1 391 )在溶液中和玻璃表面的扩散行为 ,并获得了单个分子分辨的荧光成像 .用穿越时间分布函数拟合分子通过焦点时发射荧光信号的宽度分布 ,得到 T1 391分子在水溶液中的扩散常数为 2 .3× 1 0 - 6 cm2 ·s- 1, 在亲水玻璃表面上的扩散常数为 3.4× 1 0 - 8cm2 ·s- 1.部分磷脂分子与玻璃表面发生强吸附作用 ,其停留在焦点内的时间较长 ,特征穿越时间为