氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca^(2+)]_i的影响

目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca2+]i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L-1氧化苦参碱对[Ca2+]i无明显影响;但10 μmol·L-1氧化苦参碱对60mmol·L-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。

大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的 研究大黄素 (Emodin)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法 酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,用与钙离子特异性结合的Fluo 3 Am标记细胞内游离钙离子 ,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测钙荧光强度 (FluorescentIntensity ,FI)的变化 ,以平均荧光强度代表 [Ca2 + ]i。结果 在静息状态下 ,大黄素 1～10 0 μmol L对 [Ca2 + ]i 均无影响 ;大黄素 1μmol L对KCl 6 0mmol L诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有促进作用 ,平均荧光强度由 1876 .7± 5 5 1.3增加至 2 90 4 .8± 739.1(n =8,P <0 .0 5 ) ;10 μmol L对其无影响 ;10 0 μmol L则表现为抑制作用 ,平均荧光强度降至 12 14 .1± 334.8(n =8,P <0 .0 5 )。结论 大黄素低浓度 (1μmol L)对KCl诱导的细胞内钙增高有促进作用 ;高浓度 (10 0 μmol L)则表现为抑制作用。因此 。

植物雌激素α-ZAL和17βE_2对大鼠单个心室肌细胞缩舒功能和胞内钙瞬时变化的影响

目的:比较植物雌激素α-ZAL和17βE2对大鼠心肌细胞缩舒和胞内钙瞬变的影响。方法:从成年雌性大鼠心脏分离单个心肌细胞,应用美国Ionoptix视频跟踪计算机图像分析系统在0.5Hz的电刺激下测定离体单个心肌细胞的收缩参数,其中包括最大收缩幅度(PS)、最大收缩幅度时间(TPS)、90%舒张幅度时间(TR90)和最大收缩速率(+dL/dttmax)及最大舒张速率(-dL/dttmax);同时用Fura2/AM钙荧光指示剂测定胞内钙浓度的变化。结果:10-9~10-5mol/L17βE2能使PS产生浓度依赖性的增加,最大增加35%,高浓度的17βE2对TPS有显著影响(P<0.05),能够使ΔFFI最大增加25%;而10-9~10-5mol/Lα-ZAL无论是心肌细胞缩舒功能还是胞内钙含量均无明显变化。且α-ZAL和17βE2对心室肌细胞静息状态下胞内钙浓度和胞内钙的荧光衰减率均无显著影响。结论:α-ZAL对心室肌细胞的作用与17βE2有很大不同,17βE2对心肌细胞缩舒有直接刺激作用,增强心肌收缩可能是通过胞内钙释放与胞外钙内流所介导;而α-ZAL无这种作用,它可能是通过抑制胞外钙内流和其抗氧化反应达到保护心室肌细胞的作用。

二乙酰基莲心碱对心室肌细胞内向整流钾电流和瞬时外向钾电流的影响

目的:探讨二乙酰基莲心碱(diacetyl-linesinine)对家兔心室肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响。方法:选取5只体重1.5～2.0kg的健康新西兰大耳白兔,酶解法分离单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术观察10、30、100μmol/L的二乙酰基莲心碱对心室肌细胞膜瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的作用。结果:二乙酰基莲心碱浓度依赖性减少瞬时外向钾电流和内向整流钾电流,10、30、100μmol/L的二乙酰基莲心碱可使峰值瞬时外向钾电流降低14.7%、26.7%和36.6%;使内向整流钾电流降低13.7%、25.3%和31.1%。结论:二乙酰基莲心碱可浓度依赖性阻滞兔心室肌细胞的瞬时外向钾电流和内向整流钾电流。

洛士辛对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的作用

采用膜片钳技术 ,研究Lot对单个豚鼠心室细胞L型钙通道电流 (ICa -L)的影响。Lot1～ 2 0 0 μmol/L浓度依赖性地增加ICa -L幅值 ,EC50 为 38μmol/L ,Lot30 μmol/L使最大峰值电流增加 6 0 %。其促钙作用无明显使用依赖性 ,略促进钙通道电流激活 ,显著地减少钙电流的稳态失活。表明Lot增加L型钙电流作用主要与减少钙电流的稳态失活有关。

缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的作用

目的:观察缬沙坦对豚鼠心室肌细胞动作电位的直接作用,以探讨其可能的抗心律失常作用。方法:采用Langendorff主动脉逆行灌流酶解分离法分离单个心室肌细胞。采用全细胞膜片钳记录,电流钳模式记录单个心室肌细胞的动作电位。实验分3组:对照组(n=5),普通细胞外液灌流,不含缬沙坦;缬沙坦5μM组(n=5);缬沙坦100μM组(n=5)。结果:缬沙坦5μM对豚鼠心室肌细胞静息膜电位、动作电位幅度、动作电位时程均无明显影响。缬沙坦100μM可延长心室肌细胞动作屯位时程,尤其是APD50从(334.2±14.4)ms延长至(375.2士12.0)ms(P<0.01)及APD30从(395.4士13.3)ms延长至(451.4±9.5)ms(P<0.01),对细胞静息膜电位、动作电位幅度无显著影响。结论:高浓度缬沙坦延长心室肌细胞动作电位时程APD50及APD90,而不影响动作电位的静息膜电位及动作电位幅度。适度延长动作电位时程,从而延长心室有效不应期,有助于折返引起的快速室性心律失常的防治,类似Ⅲ类抗心律失常药物的作用。提示缬沙坦可能通过此机制起抗心律失常的作用。

壬基苯酚对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响

目的：观察环境内分泌干扰物质——壬基苯酚（Nonylphenol，NP）对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流和动作电位的影响。方法：应用酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞，用全细胞膜片钳方法记录不同浓度NP作用下单个心室肌细胞L-型钙电流（如。）和动作电位（AP）的变化。结果：1）NP（10^-5、10^-7、10^-6、10^-5mol．L^-1）使ICa-l峰值电流密度分别从-3．72±1．5pA／pF减少到-2．44±0．4pA／pF（P〈0．05），-2．34±0．6pA／pF（P〈0．05），-1．79±0．8pA／pF（P〈0．01），以及-1．66±0．7pA／pF（P〈0．01）；2）NP使ICa-l的I—V曲线上移，但其形状和峰值电压无明显变化；3）NP对ICa-l稳态激活曲线无明显影响；4）NP可缩短动作电位复极50％和90％的时程（APD50，APD50），但对静息电位（RP）和动作电位幅值（APA）无明显影响。结论：NP能剂量依赖性地抑制豚鼠心室肌细胞ICa-l，并能够缩短动作电位时程。

豚鼠心肌细胞分离方法及电生理特性的观察

目的:建立膜片钳实验室单个心肌细胞的分离方法和膜片钳技术平台。方法:采用酶解法分离豚鼠心室肌细胞;在膜片钳全细胞模式下记录不同基础刺激周长时的动作电位以及L-型钙电流、延迟性整流钾电流。结果:酶解法分离豚鼠心室肌可以得到90%的存活细胞;豚鼠的单个心室肌细胞静息电位为(-74.0±2.2)mV,基础刺激周长1000ms时复极90%的动作电位时程(APD90)为(313.2±20.72)ms;APD90和复极50%的动作电位时程(APD50)均随着基础刺激周长的延长而延长。L-型钙电流峰值电流密度为(-7.36±1.10)pA/pF,0.1mmol/Lverapamil灌流后为(-1.22±0.49)pA/pF,100μmol/LCdCl2灌流后内向电流消失;延迟性整流钾电流密度为(4.88±0.96)pA/pF,2μmol/L Dofetilide灌流后降低为(3.48±0.37)pA/pF。结论:酶解法分离的豚鼠心室肌细胞可以满足膜片钳实验的要求,此膜片钳技术可作为更深入电生理研究的平台。

白细胞介素-2对大鼠心肌收缩功能的影响涉及一氧化氮机制

为深入研究细胞因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)对心肌收缩功能的影响及其可能机制,本实验采用酶解分离成年大鼠心室肌细胞模型,用视频跟踪计算机系统记录测定单个心室肌细胞收缩反应并用双波长荧光系统检测细胞[Ca^(2+)]_i。心肌细胞收缩参数包括最大收缩幅度(dL)、细胞最大收缩速度(+dL/dtmax)、细胞最大舒张速度(-dI/dtmax)和舒张末期细胞长度。结果显示,IL-2(2-1000U/ml)浓度依赖性地抑制心肌细胞dL、±dL/dtmax和舒张末期细胞长度;用一氧化氮(ni-tric oxide,NO)合酶抑制剂L-NAME(100mmol/L)和可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂ODQ(10mmol/L)可减弱IL-2对心肌细胞收缩的抑制作用,iNOS抑制剂Aminoguanidine(100mmol/L)对IL-2的作用则无明显影响。200U/ml的IL-2可降低单个心室肌细胞电刺激诱导的钙瞬变幅度;ODQ(10mmol/L)可明显抑制IL-2对心肌细胞钙瞬变的作用。以上结果提示IL-2对大鼠心肌细胞收缩功能具有直接抑制作用,其机制可能通过刺激NOS活性,增加NO的生成,激活可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)从而导致细胞内Ca^(2+)含量降低所致。

罗哌卡因和布比卡因对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响

目的观察罗哌卡因和布比卡因对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响,探讨其心肌负性肌力作用的机制。方法以急性酶解法获得豚鼠的单个心室肌细胞,用标准的全细胞膜片钳技术记录ICa-L。结果100/μmol/L的罗哌卡因和布比卡因分别使豚鼠心室肌细胞ICa-L峰值降低(37±3)%和(42±5)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);两种药物均使电流密度-电压曲线上移,但不改变激活ICa-L的电压和曲线的形态。罗哌卡因和布比卡因均呈浓度依赖性阻滞豚鼠心室肌细胞ICa-L,半最大抑制浓度分别为212±38、(161±20)μmol/L。结论罗哌卡因和布比卡因均呈浓度依赖性阻滞豚鼠心室肌细胞ICa-L,可能是其产生心肌负性肌力作用的主要机制。

异丙酚对兔未成熟心室肌细胞动作电位及L型钙通道电流的影响

目的探讨异丙酚对心血管系统抑制作用的机制,以及对缺血心肌保护作用的分子学机制,为临床合理安全应用异丙酚提供新的理论依据.方法采用改良的Taniguchi法分离3～4周龄幼兔心室肌细胞.随机选取单个心室肌细胞,按Hamill法用膜片钳全细胞记录技术记录两种浓度异丙酚(50μmol/L,250μmol/L)灌流前、后的单个心室肌细胞的AP及ICal的变化.结果与给药前相比,两种浓度异丙酚(50 μmol/L,250μmol/L)灌流均能明显缩短心室肌细胞动作电位时程(APD)(P分别＜0.05和＜0.01),高浓度异丙酚(250μmol/L)较低浓度异丙酚(50 μmol/L)更能缩短APD(P＜0.05),但不改变动作电位幅度(APA);与给药前相比,低、高两种浓度异丙酚均使各指令电位下ICal明显减小,分别使钳制电位+10 mV时ICal峰值由对照组的769.6±83.2 pA(n=6)减小至573.4±25.1 pA(P＜0.05,n=6)和368.1±31.4 pA(P＜0.05,n=6).结论异丙酚能明显减小未成熟心室肌细胞ICal,从而降低细胞内Ca2+浓度,抑制兴奋收缩耦联过程.

心肌延迟整流钾通道的特性及β受体的调节作用

心肌延迟整流钾通道的特性及β受体的调节作用崔毅（第四军医大学基础部药理教研室，西安７１００３２）心肌钾通道种类繁多，目前已知多达七种，其中延迟整流钾通道（ｄｅｌａｙｅｄｒｅｃｔｉｆｉｅｒＫｃｈａｎｎｅｌ，Ｉｋ）最为重要。Ｉｋ参与心肌动作电位复极，受体...