构建载基因多功能高分子微泡靶向乳腺癌细胞

背景:高分子微泡的稳定性好,具有更长的体内存留时间。目的:构建载基因靶向高分子微泡,评估其体外靶向结合受体的能力。方法:以高分子聚合物单甲氧基聚乙二醇左旋聚乳酸共聚物、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇-COOH及胆固醇3β-N-(二甲基-氨基-乙基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐作为微泡外壳材料,全氟戊烷气体为内核,单乳化法制备高分子微泡,利用电荷的静电作用将质粒DNA连接到微泡上,碳二亚胺法靶向修饰微泡,形成载基因靶向高分子微泡,显微镜观察微泡形貌、大小、粒径及分布,荧光显微镜及流式细胞术鉴定微泡与质粒DNA及抗体的连接率。观察人类表皮生长因子受体2(+)乳腺癌细胞生长至融合度约80%时,分2组干预:一组加入高分子微泡孵育1 h;另一组预先加入曲妥珠单抗孵育1 h,再加入高分子微泡孵育1 h,显微镜下观察微泡体外靶向结合人类表皮生长因子受体2(+)乳腺癌细胞的能力。结果与结论:①载基因靶向高分子微泡呈圆形,分散良好,平均粒径(3.0±1.5)μm,大小分布较均匀,浓度为8.8×1010 L-1;②荧光显微镜下可见载基因靶向高分子微泡表面曲妥珠单抗-IgG-FITC发出绿色荧光、质粒DNA-PI发出红色荧光,流式细胞术测得高分子微泡同时连接质粒DNA与曲妥珠单抗的比率为96.28%;③载基因靶向高分子微泡与乳腺癌细胞孵育1 h后,显微镜下观察可见细胞表面结合了大量微泡,而曲妥珠单抗阻断后,高分子微泡与细胞结合量显著减少;④结果表明单乳化法制备的高分子微泡,可有效携带质粒DNA及抗体药物,并且具有良好的靶向功能。

高分子微泡超声对比剂制备条件的优化

背景:前期实验采用左旋聚乳酸-甲基端聚乙二醇包裹液态氟碳全氟戊烷成功制备了高分子微泡超声对比剂,其在体内外低机械指数二次谐波超声造影模式下显影良好。目的:优化高分子微泡超声对比剂的制备条件,以制备产量大、粒径适宜且分布均匀的微泡。方法:采用单乳化法制备包裹液态氟碳全氟戊烷的高分子微泡超声对比剂,以微泡产量与粒径大小及分布为评价指标,分别对高分子聚合物质量与液态氟碳体积比(4/1、2/1、1/1、1/2)、电动内切匀浆的转速(18 000,26 000,35 000 r/min)、匀浆时间(15,30,60,120 s)3个制备条件进行优化。以优化条件制备的高分子微泡超声对比剂进行新西兰大白兔肾脏超声造影,TCA软件分析造影的始增时间、达峰时间、峰值降半时间及峰值强度等参数。结果与结论:高分子微泡超声对比剂的优化条件为:高分子聚合物质量与液态氟碳体积比为2/1,匀浆转速为26 000 r/min,匀浆时间为60 s,此时微泡产量为(1.8±0.4)×109/mL,粒径(3.7±1.3)μm且分布较均匀。新西兰大白兔肾脏造影的始增时间为(3.1±0.6)s,达峰时间为(2.9±0.5)s,峰值降半时间为(4.0±0.7)s,峰值强度为(4.7±1.1)×10-5 AU,说明高分子微泡体内造影效果好。