微波辅助萃取人参总皂苷与单体皂苷含量分析

通过单因素试验和正交试验对微波辅助萃取人参皂苷的工艺条件进行优化,采用分光光度法和高效液相色谱法对萃取物中的人参总皂苷及8种单体皂苷进行测定,考察不同提取条件下所得人参皂苷产率和组成的差异。结果表明:1)以总皂苷为提取目标时,最佳提取条件为萃取功率600 W、萃取温度45℃、萃取时间5 min、料液比1∶20,萃取3次;2)以8种单体皂苷为提取目标时,最佳提取条件为萃取功率300 W、萃取温度35℃、萃取时间15 min、料液比1∶25,萃取3次(提取率为0.98%);3)在最佳提取条件下,以体积分数80%甲醇为提取溶剂时,总皂苷提取率为6.02%,而单体皂苷提取率之和为0.43%;以水饱和正丁醇为提取溶剂时8种单体皂苷提取率达到0.71%。综上所述,人参质量评价和工艺优化结果与提取方法、提取条件、评价指标密切相关。

西洋参总皂苷及单体皂苷对胰脂肪酶活性的影响

首次对西洋参总皂苷及各单体皂苷进行了降脂活性的研究。结果表明 :西洋参总皂苷较人参总皂苷对体外胰脂肪酶活性的抑制作用强 ,在 0 5mg/mL浓度时抑制率分别为 90 %和 35 2 % ;人参皂苷Rc、Rb1、Rb2 对胰脂肪酶活性均有很强的抑制作用 ,在 0 5mg/mL浓度时抑制率分别为 10 0 %、96 %、97% 。

人参单体皂苷Rh_2诱导小鼠前列腺癌RM-1细胞凋亡

目的：探讨人参单体皂苷Rh2抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测不同浓度Rh2与RM-1细胞株存活率的关系;吖啶橙染色观察Rh2诱导细胞凋亡情况;流式细胞仪分析细胞凋亡周期,计算细胞平均凋亡指数。结果：RM-1细胞经Rh2处理后,细胞生长明显受抑制,当Rh2浓度为5、15、25和30mg·L^-1时,其生长抑制率分别为12.0%、36.1%、51.2%和69.3%,呈明显的浓度依赖性;吖啶橙荧光染色可见经药物处理的细胞呈现明显的凋亡形态;细胞周期G1期前出现凋亡峰,Rh2浓度为15和25mg·L^-1时,细胞凋亡率分别为41.9%和48.9%。结论：5-30mg·L^-1Rh2可诱导RM-1细胞凋亡,其具有明显的抗肿瘤作用。

人参单体皂苷Rh2抑制缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞增殖及整合素αvβ3表达的研究

目的探讨人参单体皂苷Rh2对缺氧条件下人视网膜血管内皮细胞生长及整合素(integrin)αvβ3表达的影响。方法建立人视网膜血管内皮细胞缺氧模型,并给予其不同浓度的人参单体皂苷Rh2,应用MTT法观察人参单体皂苷Rh2对人视网膜血管内皮细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测人视网膜血管内皮细胞凋亡的情况;用RT-PCR检测对Integrinαv和β3基因的表达。结果MTT结果显示,缺氧对照组细胞增殖活性明显强于正常对照组(P<0.05);缺氧细胞加用Rh2后的增殖明显受到抑制,与缺氧对照组比差异具有显著性(P<0.05);流式细胞结果显示,加用Rh2后的细胞凋亡率与缺氧对照组比无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR结果表明,和正常对照组比,缺氧对照组的细胞Integrinαv和β3基因的表达明显增强,Rh2可显著下调Integrinαv和β3基因表达。结论人参单体皂苷Rh2在缺氧条件下能明显抑制人视网膜血管内皮细胞的生但无明显诱导凋亡的作用。

人参单体皂苷Rh_2与顺铂联合应用诱导小鼠前列腺癌凋亡

目的人参单体皂苷Rh2与顺铂联合应用诱导小鼠前列腺癌凋亡的作用。方法 C57BL-6J雄性小鼠40只,共分5组,Rh2组,顺铂(CDDP)小剂量组,CDDP大剂量组,Rh2+CDDP小剂量组,模型组。建立小鼠前列腺癌动物模型,于第三日开始给药1次/d,连续给药15 d。量取瘤,体重,计算抑瘤率。采用RT-PCR技术及免疫组化试剂盒检测前列腺癌组织中半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA与蛋白的表达情况。结果 Rh2组与模型组小鼠体重相近(P>0.05)。Rh2与小剂量CDDP联合应用,抑瘤作用明显高于单纯小剂量CDDP的作用效果,其肿瘤抑制率与大剂量CDDP相近,Rh2与小剂量CDDP联合组caspase-3 mRNA及蛋白表达显著高于单纯CDDP及Rh2组(P<0.05)。结论人参单体皂苷Rh2与顺铂联合应用不但可以减少副作用而且可以通过明显增强caspase-3 mRNA表达而增强诱导小鼠前列腺癌细胞凋亡的作用。

人参单体皂苷动态变化分析

为明确4、5、6年生栽培人参参根中单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re和Rg1的含量及其在生育期内的动态变化,应用HPLC法测定栽培人参参根中单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re和Rg1的含量。结果表明:Rb1和Rb3随着参龄的增加,其平均含量逐渐增加;Rc、Rd和Rg1的含量以6年生的参根最高,5年生的参根最低。Rb2的含量以4年生参根最高,6年生的参根最低。Re的含量以4年生参根最高,5年生的参根最低。1年内不同时期参根中单体皂苷含量不同。总体而言,单体皂苷含量在年内以7、8月份最低。结果可为人参规范化生产及人参单体皂苷提取提供指导。

冷水七单体皂苷抗炎镇痛和免疫活性研究

目的:研究从冷水七单体皂苷(Impatiens pritzellii saponins,IPS)A^E的抗炎镇痛和免疫抑制活性。方法:采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀实验考察冷水七单体皂苷的抗炎活性,采用小鼠醋酸扭体实验考察镇痛活性,采用血清溶血素实验考察冷水七单体皂苷的免疫调节活性。结果:IPS B、IPS D、IPS E有明显抗炎作用;IPS D有较好的镇痛作用;IPS A对体液免疫有较强的抑制作用。结论:冷水七单体皂苷有一定的抗炎镇痛或免疫抑制作用。

林下山参不同部位的人参总皂苷与单体皂苷的含量分析

采用香草醛-高氯酸比色结合紫外-可见分光光度法对4个部位中的人参总皂苷进行含量测定。叶中总皂苷含量最高(21.4%),其次为茎(5.1%)、根(4.4%)和籽(3.9%)。运用高效液相色谱法对单体皂苷进行含量测定,关于单体皂苷(元),根中含较多的-Rb1、-Rg1、-RC、-Re和-Rd(0.46%、0.36%、0.30%、0.20%和0.15%),占总皂苷的33.4%;茎中含较多的Re、-Rd、原人参三醇(-PPT)和-Rb3(0.21%、0.19%、0.17%和0.16%),占总皂苷的14.4%;叶中含较多的Re、-Rd、-Rg1、-Rb3、-Rc、-Rb2和-PPT(1.56%、1.49%、0.71%、0.43%、0.34%、0.33%和0.20%),占总皂苷的23.6%;籽中含较多的Re、-Rg1和-Rd(0.68%、0.35%和0.28%),占总皂苷的33.5%。根、茎、叶和籽中总皂苷含量及各单体皂苷(元)的含量均存在较大差异,这为林下山参各部位的质量评价以及茎、叶等地上部分的进一步开发与利用提供了科学依据。

不同产地西洋参总皂苷及单体皂苷Rb_1、Re、Rg_1的含量测定

目的测定国内外不同产地西洋参总皂苷及单体皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。方法采用比色法测定总皂苷含量,用高效液相色谱测定单体皂苷含量。结果国内外不同产地西洋参中总皂苷及单体皂苷有较大差异,除吉林长白西洋参外,其他产地西洋参资源均符合国家标准。结论西洋参资源质量受生长环境影响较大,我国部分西洋参资源质量低于原产地,因此应加强西洋参的育种工作,为更好的利用和开发西洋参资源奠定实验基础。

活性三七饮片指纹图谱研究及单体皂苷含量测定

目的:探讨活性三七饮片指纹图谱及单体皂苷含量测定结果。方法:采用高效液相色谱法,检测活性三七药材的五个指标成分含量,分析指纹图谱,并测定单体皂苷含量。结果:传统干燥三七供试液与活性三七供试液67min内均呈现所有成分的色谱峰,指纹图谱峰数无明显变化;相比传统干燥三七药材,活性三七药材中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Re及Rd含量明显提升,分别为0.28%、1.84%、1.88%、0.24%、0.45%。结论:活性三七指纹图谱峰能用于活性三七饮片的质量控制,且活性三七饮片中皂苷药效成分可最大限度保留。

HPLC法检测黑三七中20种单体皂苷含量

目的建立一种HPLC法测定黑三七中20种单体皂苷,即三七皂苷R1、R2(R),人参皂苷Rg1、Re、Rh1(S)、Rh1(R)、Rg2(S)、Rg2(R)、Rg5、Rh2(S)、Rh2(R)、PPD、Rb1、Rd、RK3、PPT、Rg3(S)、Rg3(R)、RK1、RK2。方法使用Thermo BDS Hypersil C(250mm×4.6mm,5μm)柱通过HPLC系统进行分析,乙腈-水梯度洗脱,检测条件为:波长203nm、流速1.0mI/min、柱温40℃。结果黑三七单体皂苷含量为0.006~15.150mg/g,干三七经加工炮制,随蒸制时间的变化,黑三七中单体皂苷含量也在变化,其中Rg3(R)、Rg3(S)、Rg5、RK3、RK1含量增加最明显,分别增加了112倍、23倍、10倍、9倍、8倍。结论干三七经加工炮制得黑三七,三七中主要单体皂苷通过水解转化为稀有皂苷,提高了药理活性,提升了药用价值和产品附加值,具有很好的开发前景。

高效液相色谱测定不同地域林下参单体皂苷含量的实验分析

探究使用高效液相色谱(HPLC)方法测定下不同地域林下参(Panax ginseng)中单体皂苷含量的差异,并分析该方法的可行性。方法 收集来自6个地域(黑龙江省双鸭山市、辽宁省恒仁县、新宾县、吉林省榆林镇、靖宇县、抚松县)针阔混交林荫坡下的林下参样品,并制备样品提取液,采用HPLC分析法,选用合适的色谱柱和流动相体系,对样品进行分析,通过建立外标法校准曲线,测定出样品中各个单体皂苷的含量。结果 6个产地人参皂苷Rbl、Rb2、 Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1,在35min内基线分离,线性良好(r=0.999)。 不同地域下的林下参样品中单体皂苷的含量存在一定的差异,其中,抚松县林下参单体皂苷Rg1、Rf含量最高。这可能是由于地域环境、土壤条件、气候等因素所导致的。结论 通过HPLC分析不同地域林下参样品中的单体皂苷含量,能够准确获得关于其化学成分的定量信息。该方式对于了解不同地域林下参的质量差异、选择合适的采购源以及优化利用林下参的方法具有重要意义。

人参、西洋参部分种质资源的单体人参皂苷测定分析

应用高效液相色谱法测定了样品的7种人参根部单体皂苷。结果表明,红果人参和黄果人参所含的7种人参单体皂苷总量比橙色系列果实的人参高,其中红果人参7个单体皂苷的总和为20.03g/kg,黄果人参为17.18g/kg,它们的Rg1含量也呈相同趋势。在以根部形态特征为分类依据的人参品种、类型中,大马牙类型的Rg1含量最高,而西洋参Rg1则远低于人参各品种、类型。人参×西洋参杂交1代的Rg1含量与人参各类型相近,Rb1的含量也更接近人参。

人参皂苷单体Rb1、Re及Rg1对肾上腺素所致小鼠耳廓微循环障碍的改善作用

目的:观察人参皂苷单体Rb1、Re及Rg1对肾上腺素所致小鼠耳廓微循环障碍的影响。方法:昆明种小鼠40只分为4组(每组10只),对照组、人参皂苷单体Rb1组、人参皂苷单体Re组及人参皂苷单体Rg1组。除对照组外,各组按10mg·kg-1·d-1腹腔注射给药一次,对照组腹腔注射同体积的生理盐水。连续给药4d,末次给药30min时将小鼠固定于微循环观测分析系统显微镜下,观测小鼠正常及腹腔注射盐酸肾上腺素(1mg·kg-1)10、20和30min时小鼠耳廓微血管的管径、血流速度及毛细血管交叉网开放数目。结果:与对照组比较,人参皂苷单体Re组及Rg1组小鼠在腹腔注射盐酸肾上腺素(10、20和30min)小鼠耳廓微血管管径均明显扩张(P<0.05或P<0.01),微血管血流速度均明显加快(P<0.05或P<0.01),微血管交叉网开放数目均明显增加(P<0.05);Re组与Rg1组比较差异无显著性(P>0.05)。人参皂苷Rb1组对肾上腺素所致微循环障碍无显著影响。结论:人参皂苷单体Re及Rg1对肾上腺素所致小鼠微循环障碍具有明显的改善作用。

高效液相色谱法测定农田人参中9种人参皂苷单体含量

为评价农田人参质量,建立同时测定农田人参中9种人参皂苷单体含量的方法。采用反相高效液相色谱法(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)对农田人参与伐林人参中9种人参皂苷单体含量进行比较分析,色谱条件:色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0min(18%A)→24min(22%A)→26min(26%A)→30min(32%A)→50min(33.5%A)→55min(38%A)],流速为1.0mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃。结果表明:农田人参含有与伐林人参相同种类的9种人参皂苷Rg 1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd;6年生农田人参9种皂苷含量均高于6年生伐林人参,但除Rg1含量差异显著外(P<0.05),其他8种皂苷含量均不显著(P>0.05);4年生农田人参除Rg1、Rf显著高于4年生伐林人参(P<0.05)外,其他7种皂苷含量与4年生伐林人参差异均不显著(P>0.05)。农田人参中Rgl、Rb1的含量、Rgl和Re含量之和、Rgl和Re含量之和均超过中国药典、欧洲药典与美国药典的要求。

紫、绿三七的总花色苷和总皂苷含量及皂苷单体组成

目的:研究紫、绿三七总花色苷和总皂苷含量及其皂苷单体组成,以比较紫、绿三七的药用品质和商业价值。方法:以三年生紫、绿三七为材料,总花色苷和总皂苷含量用分光光度法检测,皂苷单体组成用高效液相色谱检测,含量差异的显著性以方差分析判别。结果:紫三七的总花色苷和总皂苷含量分别比绿三七的高204.85%和33.86%;紫、绿三七均主要含5种皂苷单体,且含量趋势均为人参皂苷Rg1>人参皂苷Rb1>三七皂苷R1>人参皂苷Rd>人参皂苷Re;紫三七的三七皂苷R1、人参皂苷Rd和人参皂苷Re含量分别比绿三七的高约16.03%、10.83%和5.39%,但绿三七的人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量却分别比紫三七的高约0.93%和3.33%;相对于绿三七,紫三七中总花色苷含量较高且差别达到显著水平,但总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rd和人参皂苷Re含量较高以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量较低但差别均未达到显著水平。结论:三七总花色苷的积累意味着总皂苷和三七皂苷R1、人参皂苷Rd、人参皂苷Re含量的增加以及人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1含量的略微下降,但皂苷单体的种类及其相对含量不变;紫三七的药用品质和商业价值优于绿三七。

刺五加叶皂苷单体Sc3对培养大鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位的影响

目的：观察刺五加皂苷单体Ｓｃ３（ＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘＳｅｎｔｉｃｏｓｉｄｅＣ３）对培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞自发性搏动及动作电位电参数的影响。方法：将５０～８００μｇ／ｍｌＳｃ３，分别加入到培养４～６ｄ后的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞的培养液中，依次记录加药前、后自发性搏动及动作电位电参数的变化。结果：Ｓｃ３可剂量依赖性地抑制被培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心肌细胞的自发性搏动及动作电位的电参数，其作用与０．４μｇ／ｍｌ尼莫地平相似，而该作用被８０μｇ／ｍｌＣａ２＋所反转。

人参皂苷单体Rb1及Rg1对白血病细胞K562增殖的影响

背景:国内外研究发现人参皂苷及其单体在抑制白血病细胞增殖、增加化疗药物的敏感性和逆转耐药等方面均有疗效,目前主要集中于对实体瘤和急性白血病的研究,涉及慢性白血病的报道非常少。目的:探讨人参皂苷单体Rb1,Rg1对人慢性粒细胞白血病细胞K562增殖的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/2009-03在重庆医科大学干细胞与组织工程研究室和眼科实验室完成。材料:K562细胞由重庆医科大学临床检验系提供。纯度为98.6%的人参皂苷单体Rb1,Rg1由南京艾斯替么中药研究所提供。方法:取对数生长期的K562细胞,调整密度为7×108L-1,空白对照组予以常规培养;人参皂苷单体Rb1组分别加入20,40,80,160μmol/L的Rb1;人参皂苷单体Rg1组分别加入5,10,20,40,80μmol/L的Rg1。主要观察指标:MTT比色法、锥虫蓝拒染法检测K562细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果:人参皂苷单体Rb1,Rg1在体外对K562细胞增殖均有明显的抑制作用,在20～160μmol/LRb1和5～20μmol/LRg1浓度范围内,其抑制作用呈浓度依赖性,且均在作用48h时抑制率达高峰。与空白对照组比较,体外培养48h后160μmol/LRb1组细胞周期分布无变化;20μmol/LRg1组S期细胞比例明显增加(P<0.05),G1期细胞比例明显下降(P<0.05),且160μmol/LRb1组、20μmol/LRg1组均未出现"亚二倍体"峰。结论:人参皂苷单体Rb1,Rg1均可抑制K562细胞增殖,Rg1增殖抑制作用可能是通过将K562细胞阻滞于S期而实现的,而Rb1的增殖抑制作用与细胞周期的关系有待进一步分析。

人参皂苷单体Rh_2促使人脑胶质瘤U251细胞凋亡的实验研究

目的:观察人参皂苷单体Rh2(GS-Rh2)诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡作用,进而探讨其对端粒酶活性的影响和人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的机制。方法:人脑胶质瘤U251细胞经GS-Rh2处理后,采用MTT法检测细胞抑制率,免疫荧光技术观察凋亡小体,流式细胞仪经Annexin V-FITC/PI双染法观察细胞凋亡,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性改变,通过RT-PCR技术检测hTERT基因的表达。结果:GS-Rh2对U251细胞具有抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,免疫荧光技术观察到凋亡小体的出现,流式细胞仪检测GS-Rh2引起U251细胞凋亡并与药物浓度存在依赖关系,TRAP-ELISA法发现GS-Rh2可以降低端粒酶活性且呈剂量和时间依赖关系,RT-PCR证实GS-Rh2可降低hTERT基因的表达。结论:人参皂苷单体Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞发生凋亡,并抑制和降低细胞端粒酶活性,经过RT-PCR证实GS-Rh2作用于胶质瘤的分子生物学机制可能与抑制胶质瘤细胞hTERT基因有关,进而诱导细胞发生凋亡。

人参皂苷单体Rh2抑制人白血病KG1-α细胞增殖并促进其凋亡

目的研究人参皂苷单体Rh2对人白血病细胞KG1-α增殖、凋亡的影响。方法取对数生长期的KG1-α细胞,分别用不同浓度的人参皂苷单体Rb1、Rg1、Rh2诱导,另设空白对照组,阳性对照用阿糖胞苷。运用CCK-8法检测各单体对细胞增殖的影响,筛选出最强作用单体。用筛选出的皂苷单体诱导KG1-α细胞,用annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测人参皂苷单体对细胞凋亡的影响,PI染色流式细胞术检测对细胞周期的影响,Western blot法检测人参皂苷单体处理的KG1-α细胞中P53、P21、cylin D1、cleaved caspase-3的表达。结果 CCK-8实验结果显示人参皂苷Rh2、Rb1、Rg1、阿糖胞苷的IC50分别为(75、207、268、1058)μmol/L;与对照组相比,经人参皂苷Rh2诱导24、48 h后,annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术结果表明凋亡率由(5.37±0.02)%,分别增加至(8.37±0.015)%、(33.22±1.67)%(P<0.05);同样处理,细胞周期检测结果显示:G0/G1期由(26.78±3.14)%,分别上升至(29.26±2.31)%、(44.77±2.26)%;S期由(65.43±2.22)%,分别下调至(51.46±0.57)%、(48.29±1.80)%;Western blot结果显示,cleaved-caspase 3、P53和P21在75μmol/L Rh2处理后表达上调,而cyclin D1表达下调。结论人参皂苷Rh2可抑制KG1-α细胞的增殖,促进细胞凋亡。