具有中和功能的抗单体C-反应蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

目的:制备单体C-反应蛋白(monomeric C-reactive protein,mCRP)的单克隆抗体。方法:用合成的人C-反应蛋白末端八肽氨基酸,与牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1的比例融合,间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;制备腹水抗体;采用Protein G亲和层析法纯化抗体,用间接ELISA和Western blot方法测定抗体特异性,并采用该单抗研究其对mCRP干预的乳大鼠心肌细胞的保护作用。结果:得到1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化后的单克隆抗体纯度达98%,抗体活性良好,并且该抗体可以降低mCRP导致的心肌细胞TGF-β的表达。结论:成功获得1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对其初步应用进行了鉴定,并证实其可以中和mCRP引起的心肌细胞的损伤作用。

C-反应蛋白研究进展及热点争议

长期以来,C-反应蛋白(CRP)作为炎症标示因子被应用于临床检测,用来表征急性炎症反应.近期大量研究表明CRP在与慢性炎症相关的心血管疾病中扮演预报因子和参与者的双重角色,而后者逐渐成为邻域内研究的热点.但是,CRP参与病理过程的机制尚未明确,研究结果还存在各种争议.流行病调查、体外效应、动物模型及免疫组化多方面的数据调研显示:除了研究方法的原因外,CRP存在不同的天然异构体形式(五聚体pCRP和单体mCRP),或许可以更为合理地解释目前研究中所存在的争议.

C-反应蛋白的构象变化和动脉粥样硬化关系的研究进展

炎症在动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的发展中具有重要作用。C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是典型的急性期蛋白质和炎症标志因子,大量的研究表明, CRP不仅是心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)的风险预测因子,而且还有可能是CVD的调控因子。CRP主要存在两种异构体,即五聚体CRP (pentameric C-reactive protein, pCRP)和单体CRP (monomeric C-reactive protein, mCRP)。本文对已有的研究成果进行了总结与分析,发现CRP的功能活性与其构象相关,并阐述了在AS和局部炎症中CRP的变构以及其发挥作用的机制,可为全面深入了解CRP在AS中的作用及其后续相关研究提供建议与参考。

C反应蛋白单体的制备,鉴定及其初步应用研究

C反应蛋白单体参与了机体的炎性反应,在多种无菌性炎症及动脉粥样硬化形成过程中起着重要作用,因此获得高纯度具有免疫原性的C反应蛋白单体(Monomeric CRP,mCRP)对于mCRP的诊断及指导靶向mCRP的治疗具有重要的临床应用价值。研究将CRP五聚体(Pentameric CRP,pCRP)在解离缓冲液(40 mmol/L Tris+500 mmol/L NaCl+2 mmol/L EDTA+8 mol/L脲)中解离60 d后采用Superdex 200 Increase10/300G分子筛分离解离产物,利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹(WB)鉴定mCRP蛋白的纯度及免疫原性,化学发光免疫分析法研究急性心肌梗死患者血清样品中mCRP与pCRP交叉反应性;SDS-PAGE及WB结果显示pCRP在解离缓冲液中解离60 d后可部分解离为mCRP,进一步采用分子筛分离后分段收集分离产物,SDS-PAGE及WB显示解离获得的mCRP在相对分子质量约23000位置见单一明显条带,提示采用解离+分子筛方法可获得高纯度具有免疫原性的mCRP,随后作者采用化学发光免疫分析法建立的检测体系提示获得的mCRP抗原与mCRP单克隆抗体具有良好的反应性,交叉反应试验提示mCRP与pCRP不具有交叉反应性。本研究提示采用解离法结合分子筛技术可以获得具有免疫原性高纯度的mCRP蛋白,并可用于临床mCRP的定量检测。

血浆mCRP、GAS与急性ST段抬高型心肌梗死患者冠状动脉病变程度的关系

目的探讨血浆单体C-反应蛋白(m CRP)、整体面积应变(GAS)与急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者冠状动脉病变程度的关系。方法选取STEMI患者137例,按照冠状动脉病变程度(Gensini积分)将其分为轻度组32例(0分<Gensini积分≤40分)、中度组58例(40分<Gensini积分<80分)、重度组47例(Gensini积分≥80分),并随机选取同期体检者50例为对照组,比较各组血浆m CRP、GAS水平,并分析m CRP、GAS与Gensini积分的相关性。结果轻度组、中度组、重度组患者血浆m CRP、GAS值均高于对照组,且中度组、重度组患者血浆m CRP、GAS值高于轻度组,重度组患者血浆m CRP、GAS值高于中度组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson积矩相关分析显示m CRP、GAS值与Gensini积分均呈正相关(r分别为0.573、0.509,P均<0.05)。结论STEMI患者血浆m CRP、GAS与冠状动脉病变严重程度有关。

急性ST段抬高型心肌梗死患者mCRP、GAS与冠状动脉病变程度相关性研究

目的:探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆单体C-反应蛋白(mCRP)水平、整体面积应变(GAS)与冠状动脉(冠脉)病变程度的相关性。方法:选取就诊于我院心内科的180例患者,分为STEMI组150例和对照组30例。其中STEMI组依据Gensini积分分为:轻度组(0<积分≤40)、中度组(40<积分<80)和重度组(积分≥80)。分析血浆mCRP水平及左室射血分数(LVEF)值、GAS值在各组间的差异,Pearson相关分析研究mCRP水平、GAS值与Gensini积分的相关性。结果:(1)STEMI组患者血浆mCRP水平显著高于对照组(P<0.05),STEMI组各亚组间差异亦有统计学意义(P<0.05);STEMI组GAS值低于对照组(P<0.05),各亚组间差异亦有统计学意义(P<0.05)。(2)mCRP水平与Gensini积分正相关(r=0.672,P<0.05),GAS值与Gensini积分呈负相关(r=-0.56,P<0.05)。结论:mCRP水平、GAS与STEMI冠脉病变严重程度密切相关,提示mCRP水平联合GAS可以早期、无创评估STEMI病情严重程度。

外周血CRP、ACA、FM联合检测对下肢创伤骨折患者深静脉血栓的预测价值

目的研究外周血C-反应蛋白(CRP)、抗心磷脂抗体(ACA)及纤维蛋白单体(FM)联合检测对下肢创伤骨折患者深静脉血栓(DVT)的预测价值。方法2019年1月—2022年6月经下肢血管彩色多普勒超声确诊的56例下肢创伤性骨折术后并发DVT患者纳为DVT组,同期64例未并发DVT的下肢创伤性骨折患者纳为NDVT组,检测并比较2组术后第1天外周血CRP、ACA及FM水平,分析以上指标在预测DVT中的价值。结果DVT组患者术后第1天外周血CRP、FM及D-D水平及ACA阳性率均高于NDVT组(P<0.05);DVT患者术后第1天CRP、FM浓度及ACA阳性率均与D-D水平成正相关(P<0.05);术后第1天外周血FM在预测DVT中的效能与D-D相似,高于CRP与ACA,而CRP、FM、ACA联合应用可有效提高各物质单独应用效能,CRP、FM、ACA联合D-D诊断效能更高。结论创伤性下肢骨折患者术后第1天CRP、ACA及FM与外周血D-D水平成正相关,在诊断DVT中均具有良好的效能,多指标联合应用可有效提高诊断效能。

激活因子XⅡ升高预示心梗后心血管事件复发

一份大规模前瞻性研究充分说明了急性心肌梗死(MI)后几天中，血浆中高水平激活因子XⅡ(FXⅡa)提示未来可能再次发作冠心病。