丹参单体IH764-3对rhIL-8诱导的人嗜中性白细胞趋化游走过程的影响

目的和方法：采用两种体外细胞趋化游走实验体系及间接免疫荧光等方法，观察丹参单体（IH764－3）对rhIL－8诱导的人嗜中性白细胞（neutrophils，Neu）跨聚碳酸酯（PC）膜和人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells，HUVEC）单层趋化游走过程的影响，以分析IH764－3的抗炎作用机制。结果：与对照组比较、IH764－3对rhIL－8诱导的Neu跨PC膜趋化游走（P＜0．01）和跨HUVEC单层趋化游走（P＜0．01）均有明显地抑制作用。这种抑制作用是IH764－3抗炎作用机制之一，与对照组比较、IH764－3对rhIL－8诱导NeuCD11b表达（P＜0．01）及Neu与HUVEC单层粘附（P＜0．01）均有明显抑制作用。结论：这种抑制作用是IH764－3抑制Neu趋化游走的深层机制。

丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水通道蛋白表达的影响

目的观察丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠肾脏水通道蛋白(AQP)2、AQP4及肺脏AQP1表达的影响,探讨丹参单体IH764-3对糖尿病肾病大鼠水液代谢异常的调节机制。方法从60只SD大鼠中随机选择10只作为正常组,剩余50只采用高糖高脂饲料刺激加小剂量STZ诱导糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠30只随机分为模型组、对照组、研究组各10只。对照组给予卡托普利灌胃,研究组给予卡托普利灌胃同时腹腔注射丹参单体IH764-3,正常组和模型组灌胃等量蒸馏水。灌胃16周末处死大鼠,留取肾、肺组织行病理观察,采用免疫组化法、Western blot印记法、RT-PCR法检测肾组织中AQP2、AQP4及肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达情况。结果肾组织中AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达量模型组均明显高于正常组(P均<0.05),对照组、研究组均明显低于模型组(P均<0.05),研究组均低于对照组(P均<0.05)。肺组织中AQP1蛋白及mRNA表达量模型组均明显低于正常组(P均<0.05),研究组与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),对照组与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 AQP2、AQP4在肾脏组织表达的增多及AQP1在肺脏组织表达的减少可能是导致糖尿病水液代谢异常的重要机制之一。丹参单体IH764-3对水通道蛋白的表达有调节作用,这可能是其调节水液代谢作用的机制,也是其防治糖尿病肾病的基础。

丹参单体IH764-3对胆总管结扎大鼠胶原降解的作用及其机制

目的 研究丹参单体IH764-3抗胆总管结扎大鼠肝纤维化作用,观察其对胶原降解的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组、模型组及IH764-3预防组。预防组腹腔注射IH764-3 40mg·kg^(-1)·d^(-1),另两组注射等剂量生理盐水,共14天。应用免疫组织化学方法检测TIMP-1、TGF-β_1。结果 胆总管结扎大鼠14天后有明显肝纤维化形成,IH764-3可使肝组织内羟脯氨酸减少40.6％,同时TIMP-1、TGF-β_1蛋白质表达分别下降36.2％和32.5％。结论 丹参单体IH764-3可以减轻胆总管结扎大鼠肝纤维化程度,其抗肝纤维化作用机制之一是抑制TIMP-1和TGF-β_1蛋白的表达。

丹参单体IH764-3促进H_2O_2刺激的鼠肝星状细胞胶原降解

目的观察丹参单体IH764-3对鼠肝星状细胞株(HSCs)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子(TIMP-1)表达的影响。方法应用体外细胞培养技术,用RT-PCR检测HSCsMMP-13mRNA水平;原位杂交和Westernblotting技术分别检测上述细胞TIMP-1mRNA和蛋白水平。结果IH764-3干预2h组MMP-13mRNA的表达强度明显上调,同时TIMP-1mRNA表达受抑制;IH764-3干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论丹参单体IH764-3诱导HSCsMMP-13表达,抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。

丹参单体IH764-3对马兜铃酸致人肾小管上皮细胞损害的保护机制研究

目的探讨丹参单体IH764-3在马兜铃酸(aristolochic acid,AA)导致人肾小管上皮细胞系(HK-C)损害中的保护作用及机制。方法以含体积分数0.10胎牛血清的DMEM培养液培养HK-C细胞72 h。实验分为3大组(8小组),AA组在培养液中加入浓度为20 mg/L的AA;观察组在培养液中加入浓度为20 mg/L的AA和不同浓度丹参单体IH764-3;对照组培养液中不加AA。培养24、48、72 h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各细胞培养液中转化生长因子β1(TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、金属蛋白酶2(MMP-2);采用MTT法观察HK-C细胞活性,实时荧光定量PCR技术检测凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表达情况。结果 AA刺激后,诱导TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表达增加,MMP-2表达减少(P<0.05)。经丹参单体IH764-3干预后,TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表达减少,MMP-2表达增加,其中以IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。AA组及观察组较对照组HK-C细胞的活性均受到抑制,细胞的凋亡率增加,Caspase-3mRNA表达增高(P<0.05)。观察组较AA组细胞活性明显增高,细胞的凋亡率明显下降,Caspase-3mRNA表达降低,观察组中以丹参单体IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。结论丹参单体IH764-3可明显提高HK-C细胞抵抗AA导致细胞损伤的能力,保护HK-C细胞,其具体途径可能与抑制TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、Caspase-3mRNA,升高MMP-2的表达而发挥作用。

丹参单体IH764-3对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

我们应用体外肝星状细胞(HSC)培养技术,研究了丹参有效成分提取物——丹参单体IH764-3对HSC增殖与凋亡的影响,旨在探讨其抗肝纤维化机制.

丹参在兔眼小梁切除术后抗增生作用的研究

目的探讨丹参单体（IH764—3）在兔眼小梁切除术后的抗增生作用。方法将32只新西兰大耳白兔随机分为4组，每组8只：空白对照组、阳性对照组、实验I组、实验Ⅱ组，双眼均行标准小梁切除术，实验I组、Ⅱ组分别于术后结膜下注射2g·L。或5g·L。丹参单体0．2ml，术后第1周1次／d，第2周1次／2d，共10次。空白对照组和阳性对照组同样注射等量生理盐水和25g·L-1的5．氟脲嘧啶（5-FU）。术前及术后3d、7d、15d、30d各组观察眼压、滤过泡、滤过道开放情况及瘢痕形成的组织结构、增生细胞核抗原阳性细胞计数等。结果观察术后7d、15d、30d功能性滤过泡数、眼压控制情况、增生细胞核抗原（PCNA）阳性细胞等，实验Ⅱ组疗效均优于其他3组。且未发现结膜伤口漏或角膜上皮细胞损伤等副作用。结论丹参单体在小梁切除术中有抑制成纤维细胞增生的作用。丹参单体应用于小梁切除术中及术后，其抗增生能力较5-Fu强，而副作用小，并发症少。