萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻肾纤维化大鼠mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达影响研究

目的 观察萆薢分清颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的影响,探讨萆薢分清颗粒的肾脏保护作用。方法 取60只SPF级雄性SD大鼠,从中随机取10只作为空白组,其余50只大鼠采用单侧输尿管梗阻术构建肾纤维化模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、氯沙坦组及萆薢分清高、中、低剂量组,每组10只,萆薢分清高、中、低剂量组分别给予13.12 mL/(kg·d)、6.56 mL/(kg·d)、3.28 mL/(kg·d)萆薢分清颗粒溶液灌胃,氯沙坦组给予氯沙坦2.62 mL/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续灌胃4周。末次灌胃结束后检测尿白蛋白与尿肌酐的比值(ACR)、24 h尿蛋白量及血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平,HE染色、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法及Western blot法分别检测大鼠肾脏组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显升高(P均<0.05);肾脏发生明显纤维化病变;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,氯沙坦组与萆薢分清高、中剂量组大鼠ACR、24 h尿蛋白量及SCr、BUN水平均明显降低(P均<0.05);肾纤维化病变较轻;肾组织中mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论 萆薢分清颗粒可减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化,保护残存肾功能,机制可能与下调mTOR、α-SMA、Col-Ⅰ表达有关。

单侧输尿管梗阻对梗阻对侧肾脏的影响

目的探讨单侧输尿管梗阻（UUO）对对侧肾脏的影响.方法：24 只SD 大鼠随机分为完全梗阻组（CUUO 组）、部分梗阻组（PUUO 组）及正常对照组（S 组）,每组8 只.梗阻术后6w 处死动物取出对侧肾脏,用电子天平测定其实质重量,通过HE 染色观察其病理学改变,采用AnnexinV-PE 细胞凋亡试剂盒检测其凋亡率.结果：6w 后CUUO、PUUO 及对照组对侧肾实质重量分别为（3.67±0.23）g/kgBW、（3.44±0.16）g/kgBW、（3.21±0.1）g/kgBW,CUUO 及PUUO 组均大于对照组（P〈0.01）,且CUUO 组重量大于PUUO 组（P〈0.05）;CUUO 及PUUO 组大鼠对侧肾脏肾小球水肿、毛细血管充血、小管扩张及上皮细胞坏死脱落,部分可以见凋亡小体,且CUUO 组比PUUO 组病变严重;CUUO 组、PUUO 组及对照组大鼠对侧肾皮质细胞凋亡率分别为（5.73±0.84）%、（3.72±0.79）%、（2.14±0.21）%,实验组凋亡率均大于对照组（P〈0.01）,而CUUO 组又显著高于PUUO 组（P〈0.01）.结论：UUO 不仅可以造成对侧肾实质增生,同时还可以造成对侧肾损害.

肾小管周围毛细血管损伤与肾小管上皮细胞凋亡的关系

目的观察单侧输尿管完全梗阻(CUUO)模型中肾小管周围毛细血管(PTC)损伤与肾小管上皮细胞凋亡的关系。方法建立SD大鼠CUUO模型,用免疫组化方法检测PTC的密度,TUNEL法对PTC和肾小管上皮细胞进行原位凋亡测定,透射电镜显示超微结构变化。结果梗阻第1周,Flk-1阳性PTC数量变化不显著,肾小管上皮细胞凋亡很少见。第2、4周,Flk-1阳性的PTC数量减少,肾小管扩张或萎缩明显。电镜显示肾小管上皮细胞、PTC内皮细胞的死亡形式主要为凋亡;TUNEL显示肾小管上皮细胞凋亡在第14 d达到高峰,然后迅速下降。在梗阻第2周时,PTC密度与肾小管上皮细胞凋亡负相关(r=-0.863,P<0.01)。结论PTC损伤是以内皮细胞凋亡为主要特征,PTC减少在肾小管上皮细胞凋亡的过程中发挥了重要作用。