益气活血通络方对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏线粒体动力学的影响

目的 探讨益气活血通络方通过调节线粒体动力学改善肾脏损伤的作用机制。方法 将健康雄性Wistar大鼠48只随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、益气活血通络方组,每组12只。采用单侧输尿管结扎手术复制肾纤维化模型,灌胃给药,连续干预14 d。采用HE和Masson染色法观察肾组织的病理形态变化;免疫组化法检测单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾组织中线粒体融合蛋白(mitofusin,Mfn)2及动力相关蛋白(dynamin-relatedprotein,Drp)1的表达;Western blot检测Mfn2、Drp1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3及B细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma,Bcl)-2的表达;免疫荧光检测Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)的表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠肾小管管腔扩张明显,小管萎缩,上皮细胞坏死、脱落,Collagen Ⅰ、Caspase-3及Drp1表达均明显升高(P<0.05),Mfn2及Bcl-2表达均明显降低(P<0.05);与模型组比较,益气活血通络方和氯沙坦组大鼠肾小管上皮细胞萎缩变性及肾间质纤维化程度显著改善,Collagen Ⅰ、Caspase-3及Drp1表达均明显降低(P<0.05),Mfn2及Bcl-2表达均明显升高(P<0.05)。结论 益气活血通络方可调节UUO大鼠肾脏线粒体动力学,改善肾脏病理损伤。

益气活血通络方调控Drp1抑制血管新生减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化

目的探讨益气活血通络方(黄芪、丹参、川芎、地龙等)调控动力相关蛋白1(Drp1)抑制血管新生,减轻单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的作用机制。方法将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦钾组(20 mg·kg^(-1))、益气活血通络方组(1.92 g·kg^(-1)颗粒剂),每组12只。采用单侧输尿管结扎的方式复制肾纤维化大鼠模型。术后第1天开始灌胃给药,每日1次,连续14 d。采用HE、Masson染色法观察肾组织病理变化;采用免疫组化法检测肾组织中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)、CD34的表达;Western Blot法检测肾组织中α-SMA、Vimentin、VEGF-A、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Drp1及Ser616位点磷酸化Drp1(p-Drp1S616)蛋白表达;Real-time PCR法检测肾组织中VEGF-A、VEGFR2、CD34 mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织出现明显的肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落,大量炎性细胞浸润,肾小管萎缩,肾间质胶原纤维沉积明显增多(P<0.05);肾间质中的ColⅠ、α-SMA、Vimentin、CD34蛋白表达量及胞质中VEGF-A蛋白表达量明显升高(P<0.05);肾组织中α-SMA、Vimentin、VEGF-A、VEGFR2及p-Drp1/Drp1蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),VEGF-A、VEGFR2、CD34 mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,益气活血通络方组大鼠的肾脏炎性细胞浸润有一定程度减轻,胶原纤维沉积明显减少(P<0.05);肾间质中的ColⅠ、α-SMA、Vimentin、CD34蛋白表达量及胞质中VEGF-A蛋白表达量明显降低(P<0.05);肾组织中α-SMA、Vimentin、VEGF-A、VEGFR2及p-Drp1/Drp1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),VEGF-A、VEGFR2、CD34 mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论益气活血通络方能够减轻UUO大鼠肾纤维化水平,其机制可能与下调Drp1磷酸化水平、抑制血管新生有关。

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻及再通后大鼠尿微量蛋白的影响

目的研究单侧输尿管梗阻(UUO)及再通后大鼠尿微量蛋白的变化和抗纤灵对尿微量蛋白变化的影响。方法建立大鼠UUO模型120只和UUO再通模型90只,随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组和科素亚组。于造模后各时间点检测大鼠尿转铁蛋白(TRF)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿β2-微球蛋白(β2-M)。结果在UUO模型中,模型组各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐升高。在UUO再通模型中,各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐降低。与模型组比较,抗纤灵能明显降低两模型中TRF、RBP、β2-M。结论抗纤灵冲剂能减少UUO模型和UUO再通模型中的尿微量蛋白尿,改善两种模型中的肾损伤。

肾通胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠ET-1及AngⅡ含量的影响

目的研究单侧输尿管梗阻(UUO)后肾间质纤维化的发生机制及肾通胶囊对其的保护作用。方法24只大鼠随机分为假手术组及对照组、手术模型组和肾通治疗组,术后第8天观察各组肾组织病理改变,检测血浆和肾组织内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量。结果模型组血浆和肾组织中ET-1、AngⅡ增高,与对照组比较有显著差异(P<0.01),肾通治疗组与模型组比较肾组织ET-1、AngⅡ明显降低(P<0.05)。结论肾通胶囊可通过影响血浆和肾组织中ET-1和AngⅡ含量而延缓肾间质纤维化的进程。

单侧输尿管梗阻再通模型的研究进展

间质纤维化是肾脏疾病进展的主要因素之一。一些动物模型可作为研究肾纤维化的对象。单侧输尿管梗阻(UUO)的出现成为一个研究肾纤维化机制的重要模型,对肾纤维化进展的分子和细胞水平机制提供有价值的观点。然而,无论是对肾脏功能的测定,还是对干细胞在肾脏的影响和药物的治疗评价均存在不足。UUO再通(RUUO)模型是建立在UUO模型的基础之上,弥补了上述的不足。

动态增强MR肾图观察兔单侧输尿管梗阻可再通模型中对侧肾脏功能改变

目的利用动态增强MR肾图量化观察兔单侧输尿管梗阻(UUO)及UUO再通(RUUO)术后对侧肾功能改变情况。方法将50只新西兰大白兔随机分5组,每组10只。其中对照组进行UUO假手术,其余4组手术建立右侧输尿管梗阻再通模型,分别于梗阻后第3、7、14、28 d行RUUO术,均于再通术前以及术后1个月行动态增强MR并绘制MR肾图,根据Baumann-Rudin模型计算肾小球滤过系数(kcl)。对5组kcl数据进行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,RUUO术前、术后比较采用配对样本t检验。结果UUO术后3、7、14、28 d组的kcl均高于对照组(P<0.05),但4组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。RUUO术后1个月28 d组kcl低于其他3个模型组(P<0.05),但与对照组间差异无统计学意义(P>0.05);7 d组的kcl最高,但仅与对照组和28 d组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他各组间差异无统计学意义(P>0.05)。对照组梗阻及再通后kcl差异无统计学意义(P>0.05);3、7、14、28 d组梗阻后kcl均高于RUUO术后1个月(P<0.05)。结论动态增强MR肾图能够量化肾功能改变,梗阻时间过长会造成对侧肾功能的不可逆损伤。

输尿管梗阻再通模型进展

梗阻性肾病是临床上常见疾病,病因主要是输尿管梗阻,肾脏终末期病理主要表现为肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)病变,其发病机制仍未完全阐明。单侧输尿管梗阻再通(reversible unilateral ureteral obstruction,RUUO)模型是研究梗阻性肾病致纤维化的常用模型,制作RUUO模型的方式各异,尚无统一标准模式。本文将对当今常用的RUUO模型造模方法和其优缺点进行综合阐述,从而能更深入地了解梗阻性肾病动物模型的研究方法,为梗阻性肾病动物模型研究提供重要的实验参考。

益气活血通络方调控NR4A1/TGF-β1负反馈环路抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮间充质转化的机制

目的:观察益气活血通络方调控孤核受体4A(NR4A1)/转化生长因子-β1(TGF-β1)负反馈环路对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:将48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组、益气活血通络方组,每组12只。除假手术组外,其余各组大鼠予以UUO造模。14 d后取材行HE和Masson染色观察肾脏组织病理形态;免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏附蛋白(E-cadherin)共定位,Western blot检测α-SMA、E-cadherin、NR4A1、TGF-β1的表达。体外采用TGF-β1刺激人肾小管上皮细胞(HK-2),予以过表达NR4A1及益气活血通络方含药血清干预,Western blot检测NR4A1、α-SMA、E-cadherin、TGF-β1及vimentin表达变化。结果:与假手术组比较,UUO组肾小管扩张、萎缩、炎症细胞浸润及胶原沉积增多;TGF-β1、α-SMA、vimentin表达显著升高(P<0.05),NR4A1、E-cadherin表达显著降低(P<0.05);与UUO组比较,各治疗组肾小管损伤程度明显改善,胶原沉积减少;NR4A1、E-cadherin表达显著上调(P<0.05),TGF-β1、α-SMA、vimentin表达显著降低(P<0.05)。TGF-β1刺激HK-2后,NR4A1、E-cadherin表达显著降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、TGF-β1表达显著升高(P<0.05),过表达NR4A1后,E-cadherin表达显著升高(P<0.05),α-SMA、vimentin、TGF-β1表达显著降低(P<0.05),中药可增加NR4A1表达来降低α-SMA、vimentin、TGF-β1表达,增加E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:益气活血通络方可通过调控NR4A1/TGF-β1负反馈环路抑制UUO大鼠EMT改善肾纤维化。

猪单侧输尿管梗阻3d及再通后肾脏损伤及修复的动态观察

目的利用单侧输尿管梗阻-再通的实验猪模型，探讨肾小管问质早期损伤能否修复以及修复的时间节点。方法构建猪的单侧输尿管梗阻再通模型：选取8头实验用小型猪，分为5个时间点，分别为梗阻前（0d）、梗阻3d、再通7d、14d及21d。于每个时间点留取梗阻侧和对侧分肾静脉及前腔静脉血，检测其血清肌酐水平；留取肾组织，评估病理损伤一修复情况；Western印迹法测定肾小管间质损伤标志物α-SMA、vimentin和上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平。结果梗阻3d时，与梗阻前相比，血肌酐显著升高，肾组织呈现不同程度的损伤，α-SMA、vimentin表达增高而E-cadherin显著下降（P〈0．05）；随着再通时间的延长，血清肌酐水平下降，肾组织损伤逐渐恢复，α-SMA、vimentin表达下调而E-cadherin表达上调（P〈0．05）。结论猪的单侧输尿管梗阻-再通模型为体内研究肾脏损伤修复提供了较好的模型。早期的肾小管间质损伤在病因去除后能够逆转修复。

动态观察抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻及再通后大鼠血脂变化的影响

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)及再通后大鼠血脂的变化和抗纤灵对血脂变化的影响。方法:建立大鼠UUO模型120只和UUO再通模型90只,随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组和科素亚组。于造模后各时间点检测TC、TG、HDL-C和LDL-C。结果:在UUO模型中,模型组TC、TG、LDL-C随梗阻时间的延长逐渐升高,在28d时与正常组和假手术组比较有显著差异;HDL-C随梗阻时间的延长逐渐降低,在21d、28d时与正常组和假手术组比较有显著差异。在UUO再通模型中,模型组TC、LDL-C逐步升高,再通21d时与正常组和假手术比较差异有显著性;HDL-C逐渐降低,与正常组和假手术组相比,再通14d、21d时差异显著。与模型组比较,抗纤灵能降低TC、TG、LDL-C,升高HDL-C。结论:抗纤灵冲剂能改善UUO模型和UUO再通模型中的脂代谢紊乱。

安体舒通和缬沙坦对UUO大鼠肾脏的抗氧化保护作用

目的探讨醛固酮受体拮抗剂安体舒通和血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的抗氧化保护作用。方法Wistar大鼠行左侧输尿管结扎术,分为UUO模型组(n=11),安体舒通治疗组(US,n=12),缬沙坦治疗组(UV,n=11)和安体舒通+缬沙坦治疗组(USV,n=10),同时设假手术对照组(n=7)。术后第14天处死各组大鼠,进行HE和Masson染色,观察肾脏病理变化;比色法测定肾组织羟脯氨酸(HYP),丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果UUO组与其它组大鼠比较,肾组织HYP和MDA含量明显升高,SOD含量显著下降,肾脏病理改变加重,肾组织α-SMA的表达显著增加(P<0.05);各用药组与UUO组大鼠比较,肾组织HYP和MDA含量明显降低,SOD含量升高,肾间质纤维化显著减轻,肾组织α-SMA的表达显著减少(P<0.05)。结论安体舒通联合缬沙坦能减少单侧输尿管梗阻肾组织脂质过氧化物的产生,增加抗氧化酶的含量,从而显著改善UUO大鼠氧化应激所致的肾间质纤维化。

单侧输尿管梗阻大鼠Smad3,7的表达及肾通胶囊的影响

目的 研究大鼠单侧输尿管梗阻 (UUO)后TGF -β1,Smad3 ,7在肾组织的表达及肾通胶囊的影响。 方法 将 2 4只中16只行左侧输尿管结扎 ,另 8只行假手术 ,结扎后大鼠随机分为手术组、肾通治疗组 ,术后第 8d观察梗阻肾组织病理改变 ,纤维化程度通过测定肾间质纤维化的面积变化 ,应用免疫组织化学检测肾组织TGF -β1,Smad3 ,7的表达。 结果 手术组TGF -β1、Smad3的表达增加 ,Smad7的表达减少 ,与假手术组相比有显著差异 (P <0 0 1) ,肾通治疗组与手术组相比 ,TGF -β1、Smad3的表达下调 ,Smad7的表达上调 ,差异显著 (P <0 0 5 )。结论 肾通胶囊通过促进Smad7、抑制Smad3的表达 ,从而抑制TGF

利用MR肾图监测兔单侧输尿管梗阻再通前后肾功能变化

目的利用动态增强磁共振成像(DCE-MRI)MR肾图动态观察兔单侧输尿管梗阻(UUO)再通术(RUUO)后肾功能恢复情况。方法将50只兔随机分5组,其中对照组进行假手术,其余4组手术建立右侧输尿管可再通梗阻模型,分别于梗阻后第3、7、14、28天行输尿管再通术,均于再通当天术前以及术后1个月行DCEMRI绘制时间-强度曲线(即MR肾图),并根据Baumann-Rudin模型计算肾小球滤过系数(kcl)。结果与对照组比较,UUO术后3天患肾kcl明显下降(P<0.05);7天和14天组kcl较3天组缓慢下降(P>0.05);28天组较14天组kcl再次显著下降(P<0.05);除28天组外,3天、7天和14天组RUUO术后一个月与术前比较,kcl均明显恢复(P<0.05)。结论DCE-MRI能反映梗阻性肾病肾功能变化;梗阻解除时间是影响肾功能恢复的重要因素。

益气活血通络方抑制TNF-α/Caspase-3/GSDME介导的巨噬细胞焦亡改善肾纤维化

目的:观察益气活血通络方通过抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/膜穿孔蛋白E(Caspase-3/GSDME)介导的巨噬细胞焦亡对肾纤维化的影响。方法:将36只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、益赛普组、益气活血通络方组,每组9只。除假手术组外,其余各组小鼠予以UUO造模。加治疗过程14 d后取材行HE、Masson、天狼星红染色观察肾脏组织病理形态;免疫荧光双重染色检测F4/80与GSDME的共表达,Western Blot检测α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Caspase-3、GSDME、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,UUO组肾小管扩张、萎缩、炎症细胞浸润及胶原沉积增多;α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Cleaved Caspase-3、GSDME N-端(GSDME-N)、TNF-α表达显著升高,F4/80与GSDME双重染色共表达显著增多(P<0.05)。与UUO组比较,各治疗组肾小管损伤程度明显改善,胶原沉积减少,F4/80与GSDME的双重染色表达明显减少,α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Cleaved Caspase-3、GSDME-N、TNF-α表达显著降低(P<0.05)。结论:益气活血通络方可抑制TNF-α/Caspase-3/GSDME介导的巨噬细胞焦亡改善肾纤维化。

解毒泄浊、化瘀通络方调控Akt/mTOR信号通路抑制单侧输尿管结扎大鼠细胞自噬的机制

目的:研究解毒泄浊、化瘀通络方通过调控Akt/mTOR信号通路抑制单侧输尿管结扎(UUO)大鼠梗阻性肾病(ON)细胞自噬的机制。方法:将60只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组(21.16 g·kg^(-1)·d^(-1))、中药中剂量组(10.58 g·kg^(-1)·d^(-1))、中药低剂量组(5.29 g·kg^(-1)·d^(-1))和西药组(20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。除假手术组外均采用UUO术制作大鼠ON模型,各治疗组术后1 d开始给予相应药物。给药14 d后,检测24 h尿蛋白定量(24 h UP)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);HE、Masson观察大鼠肾脏病理结构改变,纤维化改变;免疫组织化学法(IHC)法检测自噬相关基因5(Atg5)、自噬相关基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达;Western blot检测大鼠肾脏蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、Atg5、Beclin1、LC3表达;PCR检测Atg5、Beclin1、LC3 mRNA的表达。结果:与模型组比较,各给药组24 h UP、Scr、BUN均显著下降(P<0.05);HE结果显示,模型组肾脏结构发生紊乱可见肾小管扩张,炎性细胞浸润,其余各给药组均有改善;Masson结果显示,各给药组较模型组肾间质有大量胶原沉积好转(P<0.05);IHC结果显示,与模型组比较,中药高剂量组、西药组Atg5、Beclin1、LC3表达显著下降(P<0.05),各给药组mTOR、p-mTOR蛋白表达增强(P<0.05),Beclin1、Atg-5、LC3蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论:解毒泄浊、化瘀通络方能够保护ON大鼠肾脏,其机制可能是通过调控Akt/mTOR信号通路,抑制自噬相关基因蛋白Atg5、Beclin1、LC3表达,抑制细胞自噬从而减轻肾脏损伤。