单倍体相合骨髓移植新技术治疗难治复发白血病

国内单生子女政策及无一定规模的骨髓库,使多数需要造血干细胞移植的白血病病人找到HLA匹配相关与非相关供者非常困难,但几乎所有人均有单倍体相合相关供者,它为造血干细胞移植治疗奠定了基础.80年代国外开始单倍型相关造血干细胞移植,由于重症移植物抗宿主病(GVHD),结果失败.去除植入物中T细胞后,可控制GVHD发生,但是植入物的排斥、白血病的复发及移植后免疫功能重建迟缓等原因,移植同样是失败的.90年代,单倍体移植取得了很大进步,1997年报道体外和体内T细胞去除相结合以及移植后连续免疫调节的方法,用T10B9进行选择性T细胞清除,提高了移植后无病生存.

单倍体相合骨髓移植白血病患者造血重建的临床研究

为研究未去除T细胞的单倍体骨髓移植后造血重建的特点 ,对 15例HLA 2 - 3个位点不匹配骨髓移植亲属供者使用G CSF 3- 4 μg/ (kg·d) ,连续 7天后采髓。预处理方案采用大剂量阿糖胞苷联合环磷酰胺和全身照射。应用环孢菌素A和氨甲喋呤、抗胸腺细胞球蛋白及霉酚酸酯 (MMF)预防移植物抗宿主病。移植后观察血像、骨髓像、行染色体分析及HLA位点鉴定。移植后分别于 3,6和 12个月及 2年追踪鉴定植入状态。结果发现 ,15例患者全部移植物植入 ,移植后中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L和血小板 >2 0× 10 9/L的时间分别为 18(13- 2 3)天及 2 2 (16- 32 )天。骨髓像显示各系造血均恢复。 7例应用染色体检查 ,8例应用HLA位点 ,4例应用血型 ,1例应用DNA指纹检测 ,植入鉴定结果除 1例复发患者于移植后 2个月骨髓复发植入鉴定为供、受者嵌合外 ,其他患者均呈持续全部稳定植入。移植后发生I度急性GVHD 8例 ,II-IV度GVHD 5例 ,可评价的慢性GVHD共 8例。结论 :供者应用G CSF后采髓 ,加大预处理剂量 ,联合应用作用机理不同的多种免疫抑制剂进行HLA单倍体的骨髓移植 ,可跨越人类HLA多样性屏障。

G-CSF预处理供者单倍体相合骨髓移植加用CD25单克隆抗体预防急性GVHD的临床研究

探索单倍体相合未去T细胞骨髓移植应用CD2 5单克隆抗体预防急性移植物抗宿主病 (GVHD)的疗效。在 1 999年 2月至 2 0 0 1年 1 1月期间 ,对 2 8例白血病病人进行HLA 2 - 3个位点不合骨髓移植 ,其中 2 0 0 0年 1 1月前完成的不使用CD2 5单抗的 1 5例为对照组 ,此后完成的 1 3例为本方案组 ,两组供者均接受粒细胞集落刺激因子(G CSF ,Lenograstim) 2 50 μg/d ,皮下注射 ,连用 7天后采髓 ;环孢菌素A ,氨甲蝶呤 ,抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯(MMF)联合用于GVHD预防。研究组病例在移植前 2小时和移植后第 4天加用CD2 5单克隆抗体 (Basiliximab)进一步预防GVHD ;并对两组移植后植入 ,GVHD发生和无病存活情况进行比较。结果表明 ,2 8例患者移植后均植入成功 ,植入直接证据的检测证实完全供者造血 ,两组造血重建时间比较无显著性差异 (P >0 .0 5) ;未用抗体的对照组急性Ⅱ -Ⅳ度GVHD发生率 33 .3 % ,本方案组加用CD2 5单克隆抗体 ,无 1例发生急性Ⅱ -Ⅳ度GVHD ,两组之间差异有显著性 (P <0 .0 5) ;慢性GVHD发生均为局限性 ,两组的差异无显著性 (P >0 .0 5)。对照组中位随访2 6(1 5 - 36)月 ,活存 9/ 1 5例 ,本方案组中位随访 8(3 - 1 5)月 ,活存 1 2 / 1 3例 ,Kaplan Meier存活曲线分析与对数秩检验 ,本方案组 1?

供者使用G-CSF与受者加用ATG和霉酚酸酯的单倍体相合骨髓移植

为了探讨供者应用G CSF与受者加用抗胸腺细胞球蛋白 (ATG)与霉酚酸酯 (MMF)HLA单倍体相合未去T细胞骨髓移植的可行性 ,对 1 7例白血病病人进行HLA 2 - 3个位点不匹配的相关供者的骨髓移植。 1 7例病人中 1 1例急性淋巴细胞白血病 (CR2 6例 ,>CR2 4例 ,复发状态 1例 ) ,2例急性非淋巴细胞白血病 (CR1 1例 ,CR21例 ) ,4例慢性粒细胞白血病 (慢性期 2例 ,加速期 2例 )。预处理方案是阿糖胞苷 3 0 g/m2 ,2次 /日 ,连用 3天 (于移植前 7至 5天 )、环磷酰胺 45mg/ (kg·d) ,连用 2天 (于移植前 5天和移植前 4天 )和全身照射 1 0Gy ,分 2次 (于移植前 2天和移植前 1天进行 )。供者应用G CSF 2 50 μg/d ,连用 7日后采髓 ;预防GVHD除应用CSA和MTX外 ,在移植前 4至 1天应用ATG 5mg/ (kg·d) ,移植后 7天开始每天加用霉酚酸酯 1 0 g ,连用 1 0 0天。结果表明 :1 7例移植后均取得植入 ,中性粒细胞 >0 5× 1 0 9/L的中位天数是 1 8(1 3 - 2 3)天 ,血小板 >1 0× 1 0 9/L的中位天数是 2 0 (1 6 - 32 )天。Ⅱ -Ⅳ度急性GVHD病人 5例 (2 9 4% ) ,其中 2例肠道Ⅱ度急性GVHD ,2例肠道Ⅲ度急性GVHD ,1例肝和肠道Ⅳ度GVHD。可评价的慢性GVHD病例 9例 ,均发生慢性局限性GVHD。未发生移植方案相关Ⅲ级以上的毒性。中位随访?

单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症

为了探讨单倍体相合骨髓移植术后不同时期肺部并发症发生情况 ,对 18例单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析。结果表明 :70例接受单倍体相合骨髓移植病人中 18例发生肺部并发症 ,其中细菌性肺炎 7例 ,发生在移植后 3- 12月 ,治疗过程中继发真菌感染 4例 ;肺真菌病 5例 ,CMV肺炎 4例 ,均发生在移植后 2 - 3月 ;阻塞性细支气管炎伴机化性肺炎 1例 ,发生在移植后 12月 ;原发肺炎综合征 1例 ,发生在移植后 5 0天 ;因肺部并发症直接导致死亡 8例。结论 :单倍体相合骨髓移植术后肺部并发症是移植术后常见并发症 ,主要是真菌肺炎 。

自体骨髓移植联合MHC单倍体相合淋巴细胞治疗急性髓性白血病的临床疗效

目的:自体骨髓移植联合MHC单倍体相合淋巴细胞治疗急性髓性白血病的治疗效果和安全性。方法:以40例急性髓性白血病患者作为研究对象,随机分为两组各20例,研究组患者使用自体骨髓移植联合MHC单倍体相合淋巴细胞进行治疗,对照组单用自体骨髓移植进行治疗。结果:两组患者的造血系统都得到重建,重建时间以及并发症的发生均没有显著差异。而研究组患者复发率显著降低,且复发时间明显地长于对照组患者。研究组患者3年累积无病生存率明显地高于对照组患者,且差异具有统计学意义。结论:自体骨髓移植联合MHC单倍体相合淋巴细胞治疗能够有效控制急性髓性白血病病情,降低其复发,延长患者生存期。

异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相合骨髓移植中的作用(英文)

本研究观察异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相合骨髓移植中的作用。建立荷EL9611(H-2d)红白血病细胞的CB6F1H-2b/d小鼠动物模型,5天后将其随机分为7组,每组10只。CB6F1H-2b/d受鼠为移植组,9Gy(60Co)照射后以C57BL/6H-2b为供鼠,进行骨髓移植。对照组分为5组:对照1组为未治疗组;对照2组为单纯照射组;对照3组为阿糖胞苷治疗组:小鼠腹腔注射阿糖胞苷50mg/kg×6d;对照4组为单纯骨髓细胞移植组:小鼠照射后4小时移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞;对照5组为GVHD对照组:小鼠照射后4小时移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组分为2组:实验A组,照射后输注C57BL/6H-2b小鼠NK细胞1×106/只,4小时后移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞;实验B组:照射后同实验1组,4小时后移植C57BL/6H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞。以血象、体重、生存期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较。结果表明,对照1、2、3、5组小鼠生存期分别为(10.10±0.88)天、(9.80±0.92)天、(22.70±3.23)天、(20.10±1.73)天,对照4组生存期为(30.10±15.95)天,其中2只小鼠超过30天;实验A、B组小鼠生存期分别为(39.10±18.11)天、(49.30±17.24)天,实验1组4只小鼠生存期超过30天,实验2组7只生存期超过30天,其中实验1组与对照1、2、3、5组比较均有显著性差异(p<0.01),实验2组同其他组比较均有显著性差异(p<0.05)。因白血病死亡的小鼠,可见肝脾明显肿大,结构破坏,有大量白血病细胞浸润。实验组长期存活的小鼠出现Y染色体(嵌合率80%-90%)。结论:在荷EL9611(H-2d)红白血病细胞CB6F1H-2b/d小鼠模型的单倍体相合骨髓移植中供者NK细胞具有杀灭白血病细胞并降低GVHD的双重作用。

单倍体相合骨髓移植治疗骨髓增生异常综合征2例并文献复习

目的:探讨HLA配型单倍体相合未去T细胞异基因骨髓移植(allo-BMT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的可行方案及疗效。方法:采用单倍体相合异基因骨髓移植治疗2例MDS患者。预处理方案采用Cy/TBI加Ara-C,移植物抗宿主病(GVHD)预防应用环孢素A、短程氨甲碟呤、抗胸腺细胞球蛋白、CD25单克隆抗体及霉酚酸酯。结果:2例均造血重建,中性粒细胞>0.5×109/L时间分别为+15 d和+20 d,血小板>20×109/L时间为28 d和25 d。植入证据检测证实为完全供者造血,未发生严重急性移植物抗宿主病(aGVHD),1例于移植后18个月死于肺部并发症,另1例无病生存63个月,生活质量明显提高。结论:HLA单倍体相合未去T细胞allo-BMT治疗MDS有效可行,为年轻MDS患者提供了治愈疾病及长期生存的机会。

单倍体相合骨髓移植小鼠GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体克隆谱型的分子特征

本课题通过单倍体相合骨髓移植小鼠模型,研究GVHD靶器官的器官特异性T细胞受体谱型特点,以及GVHD靶器官克隆性T细胞的TCRBVCDR3分子特征。建立单倍体相合异基因移植小鼠GVHD模型,应用RT-PCR扩增小鼠肝脏、皮肤、回肠等组织移植前后TCRBV20个家族的基因序列,通过基因扫描判断TCRBV家族的克隆表达、CDR3克隆性质。对于寡克隆表达的TCRBV家族在长泳道测序胶上电泳,对部分单克隆条带测序,得到一组肝脏、皮肤、回肠在移植后不同时间与GVHD相关的TCRBV CDR3的分子。结果表明:单倍体相合骨髓移植小鼠在移植后14天临床开始出现典型的GVHD表现。移植后受鼠肝脏、皮肤、远端回肠等均出现典型的GVHD病理表现,在其T细胞受体谱型图上出现了分属TCRBV家族的单克隆或寡克隆增生的T细胞。肝脏、皮肤、回肠等GVHD的靶器官中部分克隆性增生的T细胞TCRBVCDR3分子存在一些C′末端保守的CDR3氨基酸基序(motif)。结论:单倍体相合异基因移植后发生GVHD的组织可出现T细胞单克隆及寡克隆增生,GVHD相关T细胞克隆共用一些保守的TCRBVCDR3基序,识别类似的抗原。

HLA单倍体相合骨髓移植成功治疗2例幼儿急性白血病的护理

目的探讨和总结HLA单倍体骨髓移植治疗幼儿白血病的护理。方法根据患儿年龄较小的特点,让其母亲进入层流间,以改善儿童的心理状态,通过针对性的进行预处理、锁骨下静脉插管、预防感染及各种并发症观察和护理。结果2例患儿移植期间心情愉快,未出现哭闹要出层流间的现象,未发生感染,在＋10d和＋14d造血干细胞功能恢复,＋37d和＋64d顺利渡过急性GVHD排异期,经检测HLA为供者型,分别于＋108d和98d出院。结论针对性护理措施是2例幼儿单倍体移植成功关键之一。

单倍体相合未去T细胞骨髓移植治疗高危白血病

异基因造血干细胞移植受限制的因素之一是缺乏HLA匹配供者,欧美约30％要移植的病人可找到HLA相合和5％病人有一个位点不合的同胞供者。国内单生子女政策及建立骨髓库需要时间,找到相关相合与无关相合供者十分困难,此外寻找无关供者费时3～6个月,许多病人将失去移植机会,但所有人几乎均有相关的HLA半相合供者。20世纪80年代国外开始单倍体相合移植,由于重症移植物抗宿主病(GVHD),使本工作停顿,80年代末90年代初,对单倍体移植更深入的研究及临床实践,观察到去除植入物中的T细胞可控制GVHD的发生,

非清髓单倍体相合骨髓移植后自然杀伤细胞参与急性移植物抗宿主病的免疫病理学研究

目的研究自然杀伤(natural killer,NK)细胞在非清髓单倍体相合骨髓移植中参与急性移植物抗宿主病(acute graft vs host disease,aGVHD)过程的免疫病理。方法本实验建立了以C57BL/6小鼠为供鼠、CB6F1小鼠为受鼠的急性移植物抗宿主病模型。观察小鼠发生aGVHD的症状体征,流式细胞术检测小鼠移植后嵌合率及NK细胞活化受体NKp46表达强度,免疫荧光染色观察aGVHD靶器官部位NK细胞分布。结果移植鼠aGVHD发生率80%,移植+15 d达到完全嵌合,移植+25 d左右小鼠出现体质量减轻、耸毛、弓背等典型aGVHD症状。发生aGVHD小鼠外周血NK细胞NKp46表达强度低于未发生aGVHD小鼠,受鼠肝汇管区有供鼠源NK细胞浸润。结论在非清髓单倍体相合骨髓移植中NK细胞参与了肝处移植物抗宿主病的病理反应,NK细胞活化受体NKp46表达强弱与aGVHD的发生相关,NKp46表达强度可能为aGVHD诊断提供依据。

单倍体相合骨髓移植白血病患者造血重建的临床分析和实践

目的：观察单倍体相合骨髓移植治疗白血病的造血重建效果。方法选择36例白血病患者作为研究对象，均采取单倍体相合骨髓移植方案进行治疗，对造血重建指标进行观察评估。结果所有患者均在接受骨髓移植后的3~7 d 内白细胞下降至0，中性粒细胞〉0.5×109/ L 和血小板〉20.0×109/ L 的时间分别为（17.5±0.9） d 和（21.5±0.7）d。所有患者3系造血均得到重建。结论骨髓供者通过人粒细胞集落刺激因子预处理后进行骨髓采集，联合多种免疫制剂，能够有效抑制 HLA 多样性屏障，提高白血病患者的造血重建效果，值得重视。

骨髓联合外周血单倍体相合造血干细胞移植治疗白血病

本研究探讨(G-CSF)动员骨髓加外周血联合进行单倍体相合造血干细胞移植(hiBM+PBSCT)治疗白血病的可行性及疗效。125例白血病患者接受了单倍体相合未去T细胞的造血干细胞移植。所有供者应用G-CSF5μg/(kg.d),皮下注射,连用7天。实验组(A组)29例患者在供者动员的第7、8天分别接受1次hiBMT+PBSCT移植;对照组(B组)96例仅接受1次单倍体相合骨髓造血干细胞移植(hiBMT)。对两组患者应用相同的免疫抑制剂预防急性GVHD,观察临床的移植效果。结果表明:除hiBMT组有1例慢性髓系白血病合并骨髓纤维化患者移植失败外,其余全部患者移植后经检测证实为完全供者造血,hiBM+PBSCT组和hiBMT组中性粒细胞数>0.5×109/L的中位时间分别为15(10-23)天和19(11-26)天;血小板数>20×109/L时间分别为18(9-33)天和23(13-35)天。hiBM+PBSCT组和hiBMT组急性Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的累计发生率分别是31.03%和12.5%,二者差异有显著性意义(p<0.05),但急性Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的发生率分别是13.79%和10.41%(p>0.05)、aGVHD相关死亡率分别为3.45%和5.21%(p>0.05),差异均无显著性意义。骨髓联合外周血移植组和单纯骨髓移植组慢性GVHD的累计发生率分别是48.2%和35.4%(p>0.05),二者差异无显著性意义。广泛型慢性GVHD发生率两组分别为23.3%和15.6%(p>0.05),差异无显著性意义。骨髓联合外周血移植组和单纯骨髓移植组疾病复发率分别是6.8%(2/29)和18.7%(18/96)(p<0.05),二者差异有显著性意义。结论:G-CSF动员骨髓联合外周血单倍体相合造血干细胞移植后造血重建更快,急性Ⅲ-Ⅳ度GVHD发生率和死亡率无明显增加,高危白血病的复发率下降,可以有效安全应用于临床。

单倍相合骨髓移植术后中枢神经系统并发症

为了探讨单倍体骨髓移植术后神经系统并发症的发生情况,对10例单倍相合骨髓移植术后神经系统并发症的发生时间、病因、治疗措施及预后等临床资料进行了总结分析。结果表明:74例接受单倍体相合骨髓移植病人中10例发生并发症,其中3例病人出现脑出血,感染3例(真菌感染,CMV脑炎,单纯疱疹病毒性脑炎各1例),癫痫、格林-巴利综合征、脑病和精神分裂症各1例,因神经系统并发症直接导致死亡的患者4例。结论:神经系统并发症是单倍相合骨髓移植术后常见的严重并发症之一,并导致较高的死亡率,尤其是脑出血对病人的威胁较大;单倍相合骨髓移植术后免疫重建缓慢,对相关感染并发症和周围神经的病变应引起重视。

单倍体相合的生物学概念和命名

长期来国内发表的一些有关造血干细胞移植文章常常把单倍体相合（haploidentical）误称为“HLA单倍型相合”或“HLA半相合”。有的文章则把haploidentical transplant错译为“单倍体移植”、“单倍型移植”等。有的作者用亲代小鼠的骨髓细胞输注给子代1小鼠，或以后者作为供鼠，前者作为受鼠，这种移植模式的规范生物学术语本应该是“单倍体相合骨髓移植（haploidentical BMT）”，

单倍体相合的生物学概念和命名

长期来国内发表的一些有关造血干细胞移植文章常常把单倍体相合（haploidentical）误称为“HLA单倍型相合”或“HLA半相合”。有的文章则把haploidentical transplant错译为“单倍体移植”、“单倍型移植”等。有的作者用亲代小鼠的骨髓细胞输注给子代1小鼠，或以后者作为供鼠，前者作为受鼠，这种移植模式的规范生物学术语本应该是“单倍体相合骨髓移植（haploidentical BMT）”，

2010年美国骨髓移植会议临床热点荟萃

2010年2月24～28日美国骨髓移植会议在佛罗里达州奥兰多举行,来自世界各地的近2000名造血干细胞移植专家就造血干细胞移植所涉及的细胞生物学、病理生理学、免疫学、临床医学等各自关注的不同专题进行了交流和学习,

造血干细胞移植的挑战及对策

过去的10多年，造血干细胞移植（HSCT）取得了长足的进步，主要体现在三个方面：一是随着单倍体相合HSCT的进展、非血缘骨髓库的完善及脐血移植技术的改善，曾经困扰我们的供者来源问题已经基本解决并呈现多样化；二是移植模式的多样性使得不同年龄层的患者能够接受不同方式的移植。三是HSCT技术的进步，如移植后白血病复发、移植物抗宿主病（GVHD）处理等相关技术的改进，进一步提高了移植的疗效。所有这些进展使得HSCT进入了一个新时代：我们告别了供者来源的缺乏，对移植患者进行危险分层及个性化治疗，日趋完善合并症的处理技术。与此同时，新的进展也带来了新的困惑与挑战。