利用流式分选技术富集小鼠单倍体精子细胞

目的:建立并完善流式分选单倍体精子细胞的方法。方法:制备小鼠睾丸单细胞悬液;活细胞DNA染料Hoechst 33342孵育细胞;利用流式细胞术分选富集单倍体圆形精子细胞或长型精子细胞;在分选富集得到的精子细胞中,通过RT-PCR方法检测多种组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达情况;检测组蛋白乙酰基转移酶抑制剂姜黄素对上述基因表达的影响。结果:用Hoechst 33342染色结合流式分选方法可以高效地富集高纯度的精子细胞,还可以进一步纯化圆形精子细胞与长型精子细胞。RT-PCR结果表明,与睾丸整体组织相比,精子细胞中组蛋白乙酰化修饰酶基因的表达具有特异性,并受姜黄素处理的影响。结论:该流式分选方法提高了富集单倍体精子细胞的效率和纯度,为阐明精子形成的机制提供了简便易学、适于推广的技术平台。

复杂疾病小鼠模型构建新策略:类精子单倍体胚胎干细胞介导的半克隆技术

类精子单倍体胚胎干细胞是源自小鼠孤雄囊胚中的一种新型单倍体胚胎干细胞,仅含有父源遗传物质,性染色体为X染色体,能在体外长期自我更新、增殖或诱导分化,并可以利用CRISPR系统进行单基因或多基因的编辑,能替代精子使卵母细胞受精。区别于原核注射、卵胞质内注射获得嵌合体或利用四倍体补偿技术等传统构建基因修饰小鼠模型的方法,通过将基因编辑后的类精子单倍体胚胎干细胞注射到卵母细胞中,可以高效稳定地一步获得基因型确定的半克隆小鼠,不会存在嵌合现象,原代小鼠即可用于研究。基于类精子单倍体胚胎干细胞获得的多基因精准编辑的复杂疾病小鼠模型,可以在生物个体水平上阐述多个基因协同互作的效应,从而更充分地模拟复杂的、可能受多个基因影响的人类疾病的各种病理特征,以挖掘新的诊断和治疗方法。

吸烟对精液DNA指标影响的研究

目的探讨吸烟对精液DNA指标的影响,以促进男性生殖健康。方法选择322例合格的研究对象,其中195例为吸烟者,127例为不吸烟者,通过问卷调查方法收集对象的背景信息、吸烟暴露情况以及可能的混杂因素,同时收集所有研究对象的精液标本,分析吸烟对精液DNA指标的影响。结果吸烟使精液中单倍体精子的比例降低,同时使二倍体细胞以及多倍体细胞的比例升高。结论吸烟对精液质量可能有不良影响,且精液DNA指标可能对烟的作用更为敏感。对大量或长期吸烟者,其影响更为深远,应当广泛提倡戒烟。