Rac1-siRNA表达质粒的构建及Rac1对SW480细胞单克隆形成的影响

目的构建针对Rac1的siRNA表达载体,并观察其对大肠癌SW480细胞中Rac1蛋白表达的抑制作用,同时研究Rac1蛋白表达抑制后细胞在体外软琼脂糖中单克隆形成情况。方法化学合成用于产生针对Rac1的发卡状RNA的寡核苷酸,各64个碱基,退火后插入线性化的pSUPER载体的H1启动子下游。重组载体经限制性酶切和测序。把构建的载体转染大肠癌细胞系SW480,观察其对Rac1蛋白表达的干扰作用,软琼脂糖体外克隆形成实验研究SW480抑制Rac1蛋白表达后的效果。结果限制性酶切和序列测定表明成功构建了可以表达针对Rac1的发卡状RNA表达载体,该载体表达的发卡状RNA在SW480细胞中能够有效的下调Rac1蛋白的表达。体外软琼脂单克隆形成实验显示,抑制Rac1蛋白表达后,形成的单克隆数目明显减少,直径也明显缩小。结论成功构建了针对Rac1的发卡状RNA表达载体;体外软琼脂单克隆实验表明Rac1蛋白对SW480细胞克隆形成数目及大小有明显影响,说明Rac1蛋白在大肠癌的体外生长过程中具有重要作用。

B细胞单克隆形成与幽门螺杆菌感染

为探讨淋巴细胞性胃炎是否有 B细胞单克隆形成 ,以及该克隆形成的意义及其与幽门螺杆菌(HP)感染的关系。采用 Giem sa染色 ,免疫组化染色以及半巢式 PCR技术对 2 6例淋巴细胞性胃炎及 11例对照标本进行 HP检查和 B细胞单克隆性检测。结果显示 :在 2 6例淋巴细胞性胃炎中有 l4例查见 HP,其检出率为5 3.8% ,但与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。免疫组化发现 2 6例淋巴细胞性胃炎均为多克隆性 ,但 PCR技术却发现有 7例存在 B细胞单克隆性重排 (2 6 .9% ) ,且 HP阳性组其单克隆性重排检出率明显高于 HP阴性组 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,组织学及免疫组化显示良性的淋巴细胞性胃炎中确有 B细胞单克隆形成 ,该单克隆的形成可能是肿瘤早期病变的潜在标志 ,且与 HP感染有关 ,但并非仅与 HP感染有关。

稀有细胞群单细胞分选方案的优化

目的:探讨稀有细胞群单细胞分选方案的优化。方法:分析仪器设备的设置、分选前细胞的准备和分选方案的选择。结果:通过提供的单细胞分选的方案,使单克隆形成率达86.5%。结论:建立了单细胞分选的优化方案,并重点分析了提高单克隆形成率的影响因素和解决方法。

年龄对人骨髓间充质干细胞体外增殖能力的影响

背景:人骨髓间充质干细胞的增殖和分化可以修复组织器官损伤,随着年龄增长人体组织修复能力减弱,是否人骨髓间充质干细胞增殖能力随年龄增长而减弱尚不清楚。目的:观察年龄对人骨髓间充质干细胞体外增殖能力的影响。方法:15份骨髓标本来源于青岛市中心医院骨折或行髋关节置换患者,其中儿童、成年人、老年人各5例,年龄分别为7～12岁,20～55岁,60～90岁。抽取人骨髓组织,采用密度梯度离心法分离出单核细胞并接种于培养瓶内,在第5天计数集落形成单位;当贴壁细胞融合后进行传代,第1代细胞分两种方式进行培养:192个细胞接种于2个96孔板观察单细胞克隆形成能力,12500个细胞以5×103/cm2接种于培养瓶内并以此密度连续传代观察细胞增殖率。结果与结论:不同年龄人群骨髓间充质干细胞体外培养集落形成单位和细胞增殖率无明显区别(P>0.05),但单细胞克隆形成能力随年龄增长而下降(P<0.01)。提示骨髓间充质干细胞的数量和增殖能力没有随年龄的增长而下降,但其中能形成单细胞克隆未定向干细胞的数量随年龄的增长而减少。

超高速流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ) 96孔板单细胞分选方案的优化

主要建立了超高速流式细胞仪MoFlo Astrios^(EQ)96孔板单细胞分选的优化方案,实现高活性高效率分选,并着重分析了对仪器设置和管理人员操作细节上七大优化要点,供广大技术人员参考借鉴。