应用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD_(34)^+细胞

目的 分离、纯化再生障碍性贫血 (简称AA)患者骨髓CD3 4+ 细胞 ,探讨其发病机制。方法 对4 2例AA患者 ,以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离 ,用单克隆抗体 免疫磁珠分离系统 (MACS)分离、纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ,用碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)法作CD3 4+ 细胞的纯度检测。结果 骨髓CD3 4+ 细胞纯度达 95 %～ 99% ,AA患者骨髓CD3 4+ 细胞多呈单个、散在分布 ,着色较淡 ;而对照组骨髓CD3 4+ 细胞多呈均匀或丛簇状分布 ,着色较深。结论 应用MACS分离AA骨髓CD3 4+ 细胞 ,特异性强、纯度高 ,是研究AA骨髓CD3 4+ 细胞功能、形态的最直接、客观。

单增李斯特菌单克隆抗体制备及免疫磁珠分离方法的建立

免疫磁珠技术操作简单、快速高效,目前已广泛应用于细菌的快速分离纯化等领域,本研究旨在建立一种捕获率高、特异性好的单增李斯特菌免疫磁珠分离方法。首先通过杂交瘤技术制备出8株抗单增李斯特菌单克隆抗体,效价均达到1∶1024000,且特异性较好。利用效价最高的腹水6-E6制备单增李斯特菌免疫磁珠,并对单增李斯特菌免疫磁珠最适条件进行优化,结果选择MEST(7.0)为偶联缓冲液、磁珠直径为750 nm、免疫磁珠添加量为0.4 mg、捕获时间45 min、单增李斯特菌含量在1×10^(4)CFU/mL时,免疫磁珠捕获率最高可达76.29%。在模拟牛奶样品中免疫磁珠特异性捕获率可达到67.71%。该分离方法可快速且特异地分离单增李斯特菌,操作简便,为快速分离食品中的单增李斯特菌并实现快速检测提供了技术支持。

沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备

为制备针对沙门菌Pho N蛋白的单克隆抗体(MAb),并以其制备沙门菌的免疫磁珠,本研究构建了重组原核表达质粒p Cold I-pho N和p GEX-6P-1-pho N,利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-Pho N和GST-Pho N,分别作为免疫原和筛选抗原,利用B淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选获得5株能稳定分泌Pho N蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别为8H2、11E5、4B2、8F2、3B2。采用亚类鉴定试剂盒、间接ELISA和western blot方法分别鉴定各MAb的亚型、效价及特异性结合沙门菌Pho N蛋白的能力,结果显示,5株MAb的亚型均为Ig G2a,测定其效价达1∶4096000以上,均能特异性结合His-PhoN和GST-Pho N,而不与His-OmpC、His-OmpF蛋白反应,表明MAb特异性较好。选取4B2 MAb进一步分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的特异性,western blot结果显示4B2 MAb仅特异性识别不同血清型沙门菌,而不与大肠杆菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌反应;以全菌作为包被抗原的间接ELISA检测结果也显示4B2 MAb可特异性结合沙门菌。将4B2 MAb偶联Fe3O4羧基磁性纳米微球制备免疫磁珠,通过菌落计数分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的捕获效率,结果显示该免疫磁珠对鼠伤寒等5种不同血清型沙门菌的捕获率达70%以上,对非沙门菌捕获率低于7%。本研究制备了可特异性识别不同血清型沙门菌的Pho N蛋白MAb及其免疫富集磁珠,为样品的快速预处理和沙门菌检测提供了重要生物材料。

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其在胶体金免疫层析试纸研发中的应用

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。

单克隆抗体酶联免疫方法检测人血清胰岛素原及其应用

目的:建立灵敏、特异的检测人血清中胰岛素原的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究. 方法:选择2种mAb并引入生物素与亲和素放大系统来建立酶联免疫分析方法,一种抗C肽mAb结合到酶反应板上作为固相抗体,另一种生物素标记的抗胰岛素抗体作为液相抗体,将该检测方法应用于流行病学研究(n=1196). 结果:本法灵敏度0.83 pmol/L,与1 200 pmol/L胰岛素、3 960 pmol/L C肽无交叉反应,线性标准范围0.83-142 pmol/L.批内变异系数小于11.4%,批间变异系数小于11.2%.流行病学研究结果显示胰岛素原的含量与体重指数、腰围、收缩压、舒张压、胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、危险因素数目呈正相关, 与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关. 结论:本法适用于在临床研究及流行病学研究中检测人血清中胰岛素原的含量.β细胞功能受损与纤溶功能的紊乱可能是高胰岛素原与心血管危险因素关联的原因.

猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为制备猪δ冠状病毒(PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于临床样品中PDCoV抗原的免疫组织化学(IHC)检测,本研究以原核表达的PDCo V N蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,基于纯化的N蛋白建立的间接ELISA方法筛选获得稳定分泌N蛋白特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体的免疫反应特异性、亚类进行系统鉴定。结果显示:通过3次亚克隆筛选获得8株可分泌PDCo V N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA和Western blot分析,证实制备的单克隆抗体均与猪δ冠状病毒反应,且不与猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)反应,特异性良好。单克隆抗体亚类鉴定结果表明,1A11、3C6、1E7、1E12株单克隆抗体属Ig G1型,4F3、2A3株单克隆抗体为Ig G2a型,3E4单克隆抗体为Ig M型,8株单克隆抗体的轻链均为κ链。利用1A11单克隆抗体对PDCo V、PDEV、TGEV感染猪的空肠、回肠组织进行IHC检测,结果表明1A11能与感染PDCo V的组织发生特异性免疫反应,而不与感染PDEV和TGEV的组织发生反应,特异性良好。本研究制备的PDCo V N蛋白单克隆抗体可为PDCo V诊断方法的建立以及N蛋白的功能研究奠定基础。

大鼠脊髓及背根神经节内谷氨酸和γ-氨基丁酸的免疫组化观察——单克隆抗体及一种敏感染色法

谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)广泛地分布于脊椎和无脊椎动物的中枢神经系统.(GABA作为一种抑制性神经递质,在脊髓功能调节方面占有重要地位。早期电生理资料证实它在脊髓内具有突触前和突触后的抑制作用.近年来的研究也表明Glu是中枢神经系统的主要兴奋性递质,而且它还可能作为一级传入的神经递质或神经调制物.本研究采用Glu和GABA单克隆抗体,电镜平板包埋,连续半薄切片(1μm)结合一种敏感的显色技术(即PAP法结合银加强技术)对大鼠脊髓(颈段)和背根神经节内Glu和G-ABA的定位进行观察。结果发现:GABA样免疫阳性末梢可见于整个脊髓灰质,但以Rexed′s Ⅰ-Ⅲ层,

人类ABO血型系统-B抗原单克隆抗体的研制

血库、临床医院、法医以及在血液免疫学，人类遗传学的基础理论研究方面，都迫切需要高特异性、高亲和性(avidity)．高亲和力(affinity)的血型McAb，从80年代初始，国内外研制ABO血型McAb的工作。目前，有些国家已经商品生产，取代了ABO系统标准血清。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术获得了3株较理想的细胞株：3Ca、5Ca、13B1，有希望取代抗B标准血清.

抗L-HCA单克隆抗体的制备、定性和免疫组化

L-HCA属含硫氨基酸，近几年电生理、药理和化学分析等实验表明，L-HCA可能是中抠神经系统中的兴奋性神经递质或调制物。免疫组织化学等形态学的研究系重要手段之一，但L-HCA系小分子物质，且无种族特异性，不能作为免疫抗原刺激机体产生抗体，本实验将讨论抗L-HCA单克隆抗体的制备、定性和它的免疫组织化学。

单克隆抗体——作战血液系统恶性肿瘤

近年来,多个用于治疗血液系统恶性肿瘤的单克隆抗体相继获得FDA批准上市,本文系统而全面地介绍了单克隆抗体的命名和分类、非结合单抗的研究进展以及偶联单抗(包括单抗偶联物、放射标记单抗和靶向抗体-酶复合物)的作用机制和临床研究。为您展示了国外在单克隆抗体治疗血液系统肿瘤方面的最新动态和发展方向。

以单克隆抗体和磁性免疫珠选择性清除骨髓中的骨髓瘤细胞(文摘)

为使自家骨髓移植成功，消灭体内残存的肿瘤细胞的同时，把混于自家骨髓移植片中的肿瘤细胞，在对造血千细胞造成损害之前就选择性地清除是重要的，最近开发的磁性免疫珠是含铁的有细胞分离作用的均一的聚苯乙烯珠。作者等报告，将它与单克隆抗体比较，用骨髓瘤细胞实验，能清除3～4log的肿瘤细胞。

免疫磁珠法分离恶性黑素瘤肿瘤细胞

免疫磁珠法分离恶性黑素瘤肿瘤细胞牟贤龙方跃明郑茂荣范青源（第二军医大学长海医院皮肤科，上海２００４３３）关键词磁珠单克隆抗体黑色素瘤细胞分离如何从含多种不同细胞的组织块或体液中，简便、快速地筛选出所需要的高纯化的且具有高活性的单细胞，一直是人们探索的...

单克隆抗体免疫组化法检测猪流感病毒

美国vincent等应用单克隆抗体建立了免疫组化法(IHC)——来检测石蜡包埋组织中猪流感病毒(SIV),并与病毒分离(VI)、免疫荧光(FA)和组织病理学相比较。试验共检测85例有呼吸道疾病的猪。结果42例(49.5％)具有SI特征性病理变化,IHC阳性34例(40％)、VI阳性31例(36.5％)、

抗-CD4单克隆抗体治疗重症系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮(SLE)的常规免疫抑制治疗是非特异性的,它影响整个免疫系统。不是所有病人使用这一疗法都有效。使用抗辅助性T细胞的单克隆抗体可以克服这一困难。有记录表明,在患SLE样疾病的小鼠及类风湿性关节炎的病人。

抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立稳定分泌抗H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为进一步研究禽流感诊断技术奠定基础。方法以纯化的H5亚型禽流感病毒按常规方法免疫BALBc小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP20细胞在聚乙二醇作用下融合,用选择性培养、有限稀释法克隆和血凝抑制试验进行筛选,对获得阳性克隆株用ELISA方法进行亚型鉴定,并用37株H5、H7、H9亚型AIV测定其特异性、覆盖性。结果最后获得了3株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,命名为1E5、4A4、4B1,经长期体外培养和冻存后复苏能稳定地分泌抗体。经鉴定,其亚型均为IgG1、kappa链。腹水HI效价1∶210～1∶216,细胞培养上清HI效价1∶26～1∶28。3株杂交瘤所分泌的单克隆抗体均能与本中心保存的全部20株H5亚型禽流感病毒分离株发生反应,而与15株H9亚型禽流感病毒分离株、2株H7亚型禽流感病毒分离株以及H1H4、H6H15亚型禽流感病毒标准毒株均不反应,与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综合征病毒等均无交叉反应。结论所获3株单克隆抗体可用于禽流感病毒特异性诊断试剂的研制。

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的 :制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法 :用人骨肉瘤细胞系 OS- 732免疫 BAL B/ c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系 NS- 1融合 ,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选 ,获 3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后 ,应用间接免疫荧光抗体实验检测。结果 :3株 Mc Ab均与骨肉瘤组织呈阳性反应 ,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应 ,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。 3株 Mc Ab分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。结论 :抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。