应用单克隆抗体—抗原斑点试验检测血清抗原诊断黑热病的进一步研究

用单克隆抗体—抗原斑点试验(McAb-AST)又一次对50例黑热病确诊患者作血清抗原检测,以诊断黑热病。阳性率达100％。与前文报道的51例共计101例的阳性率为97.03％。509份对照血清(合计)中,假阳性反应1例(0.2％),特异性达99.8％。本文新病例乃在改进及简化方法基础上获得了更满意的效果。分析甘肃陇南、四川北部63例患者的年龄分布可见:10岁以下占65.1％;11—20岁,12.7％;21—30岁, 17.4％;21—40岁,4.8％;40岁以上无病例。符合山丘型黑热病的特点。本文总结出McAb—AST为敏感性高(97.03％),特异性强(99.8％)的黑热病实验断方法。经简化后,适合于广大基层单位推广使用,由于所需血清样品量微,取材方便,在儿童多发的山丘型黑热病疫区的应用,较之骨髓涂片诊断法的优越性,更显而易见。

单克隆抗体胶乳凝集试验检测囊虫病循环抗原

采用抗猪囊虫单克隆抗体化学交联胶乳免疫微球,分别检测了囊虫病患者脑脊液和血清中的循环抗原,阳性率分别为90％(27/30)和74.63％(50/67)。同时对比检测了脑脊液和血清中的囊虫抗体,结果表明,脑脊液的抗体检出率明显低于血清,循环抗原的检出率则无显著性差异。本实验方法检测循环抗原简便易行,有较高的特异性和敏感性,既可用于早期诊断和现症病人的确定,也可用于疗效考核。

单克隆抗体反向间接血凝试验检测日本血吸虫循环抗原

反向间接血凝试验(RIHA)是一种简单、实用的实验诊断技术,其显著特点是操作简便、快速,无需特殊仪器和试剂,现场应用的适应性高,其检测效果与标记方法相比无显著差异.目前,以单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的反向间接血凝试验国内文献报道不多,为此,我们拟用该法对日本血吸虫循环抗原进行了检测.

用反向被动血凝抑制试验进行乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的位阻分析

本文报告获得28株分泌抗HBsAg单克隆抗体的杂交瘤细胞系,均为抗HBsAg“a”决定簇抗体。产生鼠IgM抗体的有一个细胞系;IgG1 18个系;IgG 2a 1个系;IgG 2b 6个系;IgG 3两个系。采用反向被动血凝抑制法测定了其中24种McAb的交互抑制现象。24种McAb可分为10个不同的抑制群。并对这种简单易行的位阻分析方法在实用中的价值做了讨论。

单克隆抗体斑点酶免疫试验检测粪便中血红蛋白的应用研究

大肠癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,早期在临床尚无症状出现前就可有大便潜血试验阳性,提高阳性检出率是目前研究的重要内容。本文报告了应用高度特异的抗人血红蛋白单克隆抗体研究成果,采用斑点酶免疫吸附试验(Dot—ELISA)。检测人粪便中潜血,研究了该法的敏感性、特异性和适用性。结果表明该法使用的纤维素膜有极强的吸附力,提高了检测灵敏度。该抗体只与人血红蛋白反应。对9421例正常人的粪便进行了检查,发现早期大肠癌患者5例。研究表明该法可作为早期大肠癌普查初筛手段,对提高大肠癌治愈率和生存率有积极作用,是一项值得推广的新技术。

抗恶性疟原虫复合重组抗原单克隆抗体的制备、鉴定及其体外抑制试验

目的制备抗恶性疟原虫单克隆抗体，为疟疾诊断及疟疾疫苗等方面的研究提供良好的材料。方法以恶性疟原虫复合重组融合蛋白为免疫原，经细胞融合及ＥＬＩＳＡ方法筛选获得阳性杂交瘤细胞。对其中３株２Ｈ１２、３Ｄ５、４Ｅ５进行了染色体核型分析，对其分泌的单克隆抗体作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ鉴定，并初步观察了３株单抗对恶性疟原虫（海南分离株）的体外抑制作用。结果两次细胞融合共获得８株阳性克隆，其中３株即２Ｈ１２、３Ｄ５、４Ｅ５的ＯＤ值超过阳性对照，传至２０代以上经ＥＬＩＳＡ检测仍呈强阳性反应，将其腹腔接种给ＢＡＬＢ／ｃ小鼠获得血性腹水，抗体滴度为１∶１２８００。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ分析显示３株单抗均与相应蛋白发生特异性反应。抑制试验结果表明：３株单抗对恶性疟原虫的体外生长和发育均有一定的抑制作用，抑制率分别为４９％±３％、７６％±６％、４１％±２％。结论已获得稳定分泌抗恶性疟原虫复合重组抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

用 EL ISA叠加试验 ,对 5株具有 EL ISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒 (FMDV)单克隆抗体 (Mc Ab- A6、F9、G17、G5 2、S2 5 )的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明 ,5株单抗分别针对 4个不同抗原位点 ,Mc Ab- G17、G5 2、S2 5识别的位点各不相同 ,其中 Mc Ab- G7、G5 2识别的位点有部分重叠 ,Mc Ab- A6、F9识别同一位点 ,位于 G17、G5 2位点的重叠区内。

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。

应用单克隆抗体研究康氏立克次体的抗原特性

斑点热群立克次体的抗原成份极为复杂,它们拥有许多相同的抗原决定簇,也具有各自种特异性的抗原决定簇。本试验使用康氏立克次体(Rickettsia conorii)免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O-Ag14融合,经克隆筛选,获得2株持续、稳定分泌抗康氏立克次体的单克隆抗体,经微量免疫荧光试验证实为种特异性。应用这2株单克隆抗体结合免疫印迹试验,对康氏立克次体的抗原成份进行初步分析,结果表明康氏立克次体脂多糖样(LPS-like)抗原具有种特异性的决定簇。

单纯疱疹病毒单克隆抗体靶抗原的鉴定及其编码基因的定位

用放射免疫沉淀的方法，鉴定单纯疱疹病毒(HSV)型共同性单克隆抗体(McAb)1D10的靶抗原是一分子量约为60，000道尔顿的糖蛋白，另6株McAbs 1A12．Mad-2、2D11．CM—D3．2A8及1C4的靶抗原的分子量在105，000-130，000之间。用Mcabs与HSV-1／HSV-2型间重组株作物理图谱的方法．定位出这些McAbs靶抗原的基因。McAb1 D10的靶抗原的编码基因定位于短单一序列(Us)上，在0．912-0.976遗传单位之间，这一区域与gD鳊码基因重叠，故认为是gD。另6株McAbs的靶抗原的蝙码基固定位于长单一序列(UL)上，在0．573-0．690遗传单位之间，这一区域与gC鳊码基因重叠，故认为是gC，其中，Mad-2和OM—D3分别为HSV-1和HSV-2型特异性，所以其靶抗原分别为gC-1和gC-2。ELISA阻断试验结果表明4株型共同性MeAbs 1A12．2D11．2A8和1C4，抗gC上4个独立的抗原位点。

筛选和制备单或多克隆抗体进行间日疟疾免疫诊断研究——Ⅱ、单抗筛选检测方法—斑点免疫结合试验的建立

比较间日疟、恶性疟和食蟹猴疟原虫可溶性抗原不同蛋白包被浓度、酶结合物稀释度以及几种混合纤维素膜的测定结果,建立和稳定DIA(斑点免疫结合试验)方法,用以检测和筛选单克隆抗体获得较好效果。与常规IFAT(免疫荧光抗体试验)比较,DIA敏感性高,抗原用量小,可用肉眼判定结果。

单克隆抗体反向IHAT检测囊虫病循环抗原

应用抗猪囊虫抗原的单克隆抗体反向间接血凝试验（ＩＨＡＴ），对临床确诊的囊虫病患者进行了血清循环抗原（ＣＡｇ）的检测，阳性率为５１．１４％（６７／１３１）。对１９例脑型囊虫病患者同时测定了血清和脑脊液中的ＣＡｇ，阳性率分别为４７．３６％和７８．９４％，总阳性率为８４．２１％。对治疗０．５３后的１９例患者检测时，血清和脑脊液中ＣＡｇ均呈阴性反应，而检测抗体仍呈阳性反应。５０例正常人、４９例其它寄生虫病及５例其它脑部疾病患者脑脊液的ＣＡｇ均呈阴性反应。结果提示：测定ＣＡｇ对囊虫病活动性感染的诊断及疗效判定均具有一定的实用价值。

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。

血清γ球蛋白种间交叉反应抗原的单克隆抗体的制备

作者用人γ球蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0细胞系融合,并以猪γ球蛋白作ELISA进行筛选,获得两株抗γ球蛋白种间交叉反应抗原的McAb杂交瘤细胞系(1B_(11)和2A_4)。用有限稀释法对1B_(11)和2A_4进行了克隆化。阳性率达到100％。特异性试验结果表明:1B_(11)能识别人IgG、猪γ球蛋白和兔γ球蛋白;2A_4所识别的抗原存在于人Ig和猪γ球蛋白上,但未测出对兔γ球蛋白结合活性。

非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位定位

【目的】制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibodies,MAbs)并初步分析其所识别的线性抗原表位,为ASFV及其抗体检测方法的建立及p30蛋白结构和功能的研究奠定基础。【方法】将原核表达并纯化的p30重组蛋白作为免疫原,免疫6—8周龄BALB/c雌鼠,每两周免疫1次,共免疫3次,首次免疫是抗原与等体积的弗氏完全佐剂乳化后免疫,第二次和第三次免疫与等体积的弗氏不完全佐剂乳化,3次免疫后1 w断尾采血,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体效价,选择血清效价最高的小鼠进行加强免疫,3 d后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按照4:1的比例使用PEG进行常规细胞融合。利用重组p30蛋白作为包被抗原,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆纯化,直至筛出能够稳定分泌抗体的MAbs。将ASFV接种于猪肺泡巨噬细胞,以筛选的MAbs为一抗、兔抗鼠HRP-IgG为二抗,进行间接免疫荧光试验(IFA)。将感染和未感染ASFV的细胞沉淀处理后进行SDS-PAGE并转印至硝酸纤维素膜,分别以IFA鉴定为阳性的MAbs上清为一抗、兔抗鼠HRP-IgG为二抗,进行Western blotting分析,筛选获得p30 MAbs。根据已知序列设计引物扩增p30ab与p30bc两段截短基因,其中p30ab代表由第86—153位氨基酸残基的截短体,p30bc代表由第120—187位氨基酸残基的截短体,原核表达部分重叠的截短p30蛋白,最终获得重组蛋白GST-p30ab与重组蛋白GST-p30bc。分别以GST-p30ab和GST-p30bc融合蛋白为包被抗原,以5株MAbs为一抗,以兔抗鼠HRP-IgG为二抗,通过间接ELISA方法初步定位p30蛋白的抗原表位。【结果】以纯化的重组蛋白为包被抗原,经间接ELISA试验筛选出25株可分泌抗重组p30蛋白的杂交瘤细胞株。IFA结果显示,5株MAbs(8F4、1D3、1H2、6C3和8E11)与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞IFA试验呈阳性;Western blotting结果显示,5株MAbs均能够与ASFV感染的细胞呈阳性反应,与未感染病毒的细胞呈阴性反应。试验构建的p30截短体重组蛋白GST-p30ab以可溶和包涵体两种形式表达,而GST-p30bc仅以包涵体形式表达,以两组截短体融合蛋白为包被抗原,通过间接ELISA检测出MAbs 8F4、1H2和6C3与两个重组蛋白均能有效结合,证明MAbs 8F4、1H2和6C3抗原识别区域为两组截短蛋白重叠区域,即第120—153位氨基酸;MAbs 8E11与1D3则只能与GST-p30ab蛋白结合,证明MAbs 8E11与1D3抗原识别区域为两个重组蛋白的非重叠区域,即第86—119位氨基酸。【结论】本研究可溶性地表达了p30蛋白的第86—153位氨基酸截短体重组蛋白,制备了5株p30 MAbs,定位到2个p30蛋白抗原表位。结合ELISA和IFA,可建立十分可靠的ASFV及其抗体的检测手段。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原现场应用结果

嘉兴市郊区原为血吸虫病严重流行区,经30余年努力防治,已经达到消灭血吸虫病标准.粪检很难查到阳性病人.单克隆抗体Dot-ELISA检测循环抗原(以下简称Dot-ELISA)的方法具有较高的敏感性和特异性,其循环抗原的检出能反映宿主活动性感染.为此,以本法试用于现场,并同时采用IHA(红细胞间接凝集试验)及COPT(环卵沉淀试验)法比较,以评价其实用价值.