单克隆抗体人源化研究进展

目前单克隆抗体大多数是鼠源的 ,在临床重复给药的治疗过程中有许多副作用。由于技术限制 ,最好的解决方法就是研制人源化抗体 ,以代替鼠源单抗用于临床。

重组抗IgE人源化单克隆抗体治疗支气管哮喘急性发作期的疗效

目的通过检测肺功能来评价重组抗Ig E人源化单克隆抗体治疗支气管哮喘急性发作期的疗效。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中Ig E水平,每2 w或4 w给予Ig E抗体皮下注射,检测患者肺功能(FVC、FEV1、FEV1/FVC%、MMEF75/25),评价重组抗Ig E人源化单克隆抗体治疗支气管哮喘急性发作期的疗效。结果治疗后FVC、FEV1、FEV1/FVC%,MMEF75/25较治疗前比较差异显著(P<0.05),三组间无差异(P>0.05)。结论重组抗Ig E人源化单克隆抗体治疗轻中重支气管哮喘急性发作期均有效,但轻、中、重度急性治疗效果三组间无明显差异。

抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性评价方法的建立

目的建立抗HER2人源化单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的评价方法。方法利用HER2表达阳性的人乳腺癌细胞系BT474建立抗HER2单抗体内外活性评价方法,对上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗的体外生物学活性、抗体依赖的细胞介导的细胞毒性、对BT474荷瘤裸鼠的治疗作用及荷瘤裸鼠瘤体组织H E染色及免疫组化检测rh HER2mAb的分布与Herceptin进行了比较研究。结果建立了完整的该人源化单抗的体内外活性评价方法,测评结果显示,上海市细胞工程重点实验室制备的抗HER2人源化单抗在体外有效抑制BT474细胞增殖,与Herceptin体外生物学活性相似,EC50分别为148.3和145.9ng/ml;可通过ADCC效应杀伤BT474细胞,与Herceptin的EC50值一致,分别为185.0和183.9ng/ml;抑制BT474裸鼠异种移植模型肿瘤的生长,与无关抗体治疗组或PBS治疗组相比具有统计学差别(P<0.05),与Herceptin抑制能力接近,4mg/kg剂量组相比没有统计学差别;免疫组织化学检测显示抗体集中分布于肿瘤组织。结论建立的评价方法可对抗HER2单抗的抗肿瘤活性进行客观准确的评价,国内研制的抗HER2人源化单克隆抗体与进口同种抗体相比具有相同的体内外活性。

抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达及其产物分析

目的:研究抗人表皮生长因子受体2(HER2)人源化单克隆抗体能否在毕赤酵母中表达,并对表达产物进行结构分析和活性测定。方法:合成抗HER2人源化单克隆抗体的全基因,构建轻重链双表达盒表达载体,转入毕赤酵母中;通过表型筛选和诱导表达实验得到抗体表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和活性测定。结果:表达产物存在于表达上清中,摇瓶表达水平达到53.7±2.9mg/L;毕赤酵母表达的抗体的轻重链能够自发通过二硫键装配成正确的抗体结构,其中重链发生了N-糖基化;酵母表达的抗HER2人源化单克隆抗体可以抑制高表达p185erbB2肿瘤细胞SKBR-3的生长,半数有效浓度为0.17mg/L。结论:实现了抗HER2人源化单克隆抗体在毕赤酵母中的表达,为毕赤酵母表达系统成为抗体等人用剂量较大的复杂型糖蛋白的大规模、低成本制备平台提供了基础。

重组抗CD25人源化单克隆抗体治疗激素耐药急性移植物抗宿主病的临床研究

本研究探讨重组抗CD25人源化单克隆抗体在异基因造血干细胞移植后激素耐药的急性移植物抗宿主病(aGVHD)防治中的作用。对21例异基因造血干细胞移植后出现耐激素的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的患者于第1、4、8 d给予重组抗CD25人源化单克隆抗体1 mg/(kg·d)静脉输注,未达到疗效的病人间隔1周后重复本治疗。结果表明,所有患者中完全有效13例(61.9%),其中4例无病生存,8例生存伴轻度慢性移植物抗宿主病(cGVHD),1例死于白血病髓外复发;6例部分有效(28.57%),其中3例生存伴轻度cGVHD,3例死于肺部感染;2例无效(9.52%)死亡;总有效率90.5%,总生存率71.48%,尤其在单倍体造血衰竭性疾病的6例患者中,有效率高达100%。该药应用安全,未发现输注相关的毒副作用。结论:重组抗CD25人源化单克隆抗体对异基因造血干细胞移植后激素耐药的Ⅱ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)有较好的疗效,且应用安全。

人源化单克隆抗体用于肿瘤分子靶向治疗的研究进展

分子靶向治疗是专门针对在肿瘤发生中起关键作用的靶分子及其调控的信号转导通路,增强了抗癌治疗的特异性和选择性,避免了一般化疗药物的无选择性毒副作用和耐药性,是靶向治疗中特异性最高的层次。目前已有多种人源化单克隆抗体作为肿瘤分子靶向药物进入临床应用,临床试验证实许多靶向药物联合治疗及联合放化疗可以取得较单药治疗更为明显的疗效,而靶向药物的不良反应较轻,可以耐受。现就目前单克隆抗体在肿瘤分子靶向治疗的临床应用及其进展作一评述,并提出对这一问题的几点思考。

间接ELISA法测定猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的含量

目的建立猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的测定方法,为药代动力学研究提供简单快速的方法。方法采用EGFR包外区包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测抗EGFR单克隆抗体的间接ELISA法,并对其特异性、精密度、准确度、稳定性和稀释效应进行确证。结果在0.46～14.56ng·mL-1浓度范围内,测定方法具有较好的logistic曲线拟合关系,最低检测限为0.46ng·mL-1,组内及组间精密度的RSD分别为6.10%～9.81%,10.17%～11.93%。结论该方法简便、准确、特异性强,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中抗EGFR单克隆抗体的检测。

人源化CD25单克隆抗体对外周血T淋巴细胞活化和增殖的影响

本研究探讨人源化重组CD25单克隆抗体(rhCD25MAb)对外周血T淋巴细胞活化、增殖的影响。应用植物血凝素(PHA)刺激外周血单个核细胞,不加或同时加rhCD25MAb或环孢菌素A(CsA)进行体外培养,或先用PHA刺激T细胞活化后再加入rhCD25MAb继续进行培养。用MTT法检测淋巴细胞增殖率;流式细胞术检测T淋巴细胞表面抗原CD3、CD25的表达;ELISA方法检测细胞培养上清液中可溶性IL-2R(sIL-2R)水平。结果显示:rh-CD25MAb和CsA均能有效抑制PHA活化的T细胞的增殖,且随浓度的升高而增强,总体比较,CsA对T细胞的增殖抑制作用更强。虽然CsA和rhCD25MAb均能降低细胞培养上清中的sIL-2R的水平及CD25+/CD3+的比例,但rhCD25MAb的作用明显强于CsA。rhCD25MAb无论是在T细胞活化前还是活化后均能抑制T细胞表达CD25抗原和分泌sIL-2R。结论:rhCD25MAb具有很强的免疫抑制作用,它能抑制T细胞活化及抑制活化的T细胞增殖,临床上它不仅可用于治疗急性移植物抗宿主病(aGVHD),还可用于预防aGVHD。

人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴动物模型的建立

目的:建立人源化CD52单克隆抗体诱导食蟹猴的动物模型。方法:使用流式细胞仪筛选出红细胞表面不表达CD52抗原的食蟹猴,并观察给药后不同时间血中淋巴细胞数量变化情况。结果:食蟹猴血中淋巴细胞呈现出快速被清除及恢复的过程。CD20+B淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞分别在给药后213、5和56 d恢复至给药前水平。结论:食蟹猴外周血中淋巴细胞清除效果略低于临床病人,恢复速度较快。本实验模型可用于临床人源化CD52单克隆抗体器官移植前的实验研究。

中国首个基因重组人源化单克隆抗体药物上市

在“十五”、“十一五”国家高技术研究发展计划（863计划）连续支持下，经过8年努力，2008年7月，中国第1个基因重组人源化单克隆抗体药物——泰欣生（尼妥珠单抗），获得国家药监局的新药证书、生产批文和GMP认证，近日成功上市。

定量检测重组抗白介素6受体人源化单克隆抗体HS628的ELISA方法的建立及确证

目的：建立一种灵敏、特异、快速、经济的ELISA方法,用于检测食蟹猴血清中重组抗白介素6受体人源化单克隆抗体HS628的含量。方法：对ELISA与生物素-亲和素ELISA（BA-ELISA）方法进行比较,最终采用BA-ELISA法对HS628进行定量。包被抗体为羊抗人Ig G单抗,以生物素标记的重组白介素6受体作为检测抗原,以HRP标记的链霉亲和素作为放大剂,最终用单组分显色液（TMB）显色。结果：建立了特异性检测HS628的ELISA方法并完成方法学确证,该方法的线性范围为1.64~400 ng/m L,灵敏度为1.64 ng/m L,精密度、准确度、回收率及稳定性符合要求,与对照品校正标准曲线吻合。结论：用建立的ELISA方法测定猴血清中HS628的含量能满足新生物制药临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于HS628的检测。

重组抗VEGF人源化单克隆抗体F0001的临床前主要药效学研究

目的:评估重组抗VEGF人源化单克隆抗体F0001的临床前主要药效学及与原研药安维汀的生物类似性。方法:从体外作用机制及活性、体内抑瘤作用、及对荷瘤小鼠PK/PD等方面进行研究。结果:F0001明显抑制VEGF刺激的KDR磷酸化及下游因子ERK1/2磷酸化;抑制HUVEC细胞增殖,IC50为123ng/ml。F00015mg/kg显著抑制人结肠癌Ls-174t、肺癌NCI-H460和恶性胶质瘤U-87MG裸小鼠皮下移植瘤生长,抑瘤率分别为68%、68%和86%;与化疗药CPT-11合用对人结肠癌Ls-174t有抑瘤增效作用,抑瘤率提高到89%。F0001与安维汀体外作用机制及活性相当、体内抑瘤效果相当,二者在人结肠癌Ls-174t荷瘤小鼠体内PK/PD参数相似。结论:F0001与原研药安维汀在主要药效学方面高度类似。

重组人源化双功能单克隆抗体致细胞因子释放综合征1例

双特异性抗体现已成为肿瘤免疫治疗药物的热点,而其诱发的与免疫相关的细胞因子释放综合征(CRS)可能危及生命,已成为当前关注的焦点。我院Ⅰ期临床试验1例乳腺癌患者,首次输注重组人源化双功能单克隆抗体MBS301在11 min后出现胸闷、气急渐加重、周身湿冷、血氧下降等症状,考虑为CRS。予以甲泼尼龙琥珀酸钠抗炎,哌拉西林钠舒巴坦钠及利奈唑胺抗感染、化痰等对症治疗,患者症状好转。及时应用糖皮质激素可以治疗双特异性单克隆抗体引起的CRS。

重组人源化抗PD-1单克隆抗体注射液Ⅰ期临床试验的综合护理对策

分析12例PD-1受试者的临床资料,结合国内外文献,分享和讨论临床试验工作中使用PD-1患者的护理经验与体会。

重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法的建立及方法验证

目的:建立重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性测定法并对其进行方法验证。方法:采用间接ELISA法建立抗原-抗体-二抗结合反应体系,用四参数计算法拟合其结合曲线,计算供试品的结合活性。结果:方法具有良好的专属性、精密度、相对准确度、线性和耐用性。在64%~156%水平范围内,精密度验证各水平的GCV值均在15%以内;相对准确度验证各水平的相对偏倚置信区间均在±12%范围内,平均回收率均在80%~120%范围内;以五个水平实测值对数值对每个理论值对数值进行线性回归,线性关系良好。结论:该方法专属性好,精密度好,准确度高,可用于重组抗CD25人源化单克隆抗体结合活性的测定。

我国自主研发人源化单克隆抗体健尼哌国内上市

近日，由上海中信国健药业股份有限公司自主研发的创新产品重组抗CD25人源化单克隆抗体注射液——健尼哌在国内正式上市。

CDR3导向抗体库法人源化抗膀胱癌Fab的鉴定

目的:对通过CDR3导向抗体库法筛选到的3株人源化膀胱癌噬菌体抗体进行进一步分析鉴定。方法:用ELISA方法对筛选特异性克隆进行特异性鉴定、抗原表位的核实;采用硫氰酸盐洗脱ELISA法评估其亲和力;选用活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验。结果:3株阳性克隆可溶性表达后能够与膀胱癌EJ细胞特异性结合;与鼠源噬菌体抗体(BDI)相比,2株克隆的亲和指数比较低,均为0.25mol/L,1株克隆的亲和指数为0.7mol/L,略低于鼠源的亲和指数(0.9mol/L)的水平。选择活性较高的克隆进行膀胱癌组织的免疫组化实验,显示该克隆能够与癌组织特异性结合。结论:用CDR3导向库法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠源单克隆抗体(mAb)BDI的特性。

一株人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的表位及中和活性的研究

目的通过ELISA相加试验和狂犬病毒(Rabies virus,RV)逃逸突变试验对一株人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(human anti-rabies virus monoclonal antibody,Ab1)进行抗原表位分析。方法将已知表位的对照抗体(CR57和CR4098)和Ab1进行ELISA相加试验;以及对RV逃逸株氨基酸突变位点分析进一步验证Ab1针对的抗原表位,用小鼠中和试验(mouse neutralization test,MNT)分析Ab1的体内抗狂犬病病毒中和活性。结果Ab1和CR57可同时与RV结合;与CR4098存在竞争,Ab1的逃逸株在氨基酸位点333、336发生突变,MNT检测体内中和活性为550.32 IU/mg,MNT和快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)结果基本一致。结论该抗体针对III号抗原表位且具有较高的抗狂犬病病毒中和活性。