力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物。方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab'片段的偶联物Fab'-LDM。以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab'-LDM偶联物的抗肿瘤作用。结果Fab'-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65000,Fab'与LDM的偶联分子比为1∶1;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab'-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当。动物试验结果表明,0.05mg/kg、0.1mg/kg和0.2mg/kg剂量Fab'-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长。偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P<0.01)。结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为“弹头”药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物。

新型抗肿瘤抗生素与单克隆抗体免疫偶联物的研究

(一)抗肿瘤抗生素的研究与开发 1.抗肿瘤抗生素是微生物产生的抗肿瘤活性物质,自然界微生物种类繁多,其代谢产物极为复杂多样,是寻找新药的宝库。中国医学科学院建院41年来,我们长期从事抗肿瘤抗生素的筛选研究,近10年来得到国家自然科学基金重大项目、国家新药项目和国家“九五”攻关项目基金资助,对全国各地以及南极土壤样本分离获得的微生物进行研究。累计筛选样品超过100,000个。 2.

柔红霉素与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体偶联物的制备及其免疫学特性

目的 评价柔红霉素(daunorubicin,DNR)与抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体免疫偶联物对兔晶状体上皮细胞的免疫特异性。方法 采用过碘酸盐氧化法将抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体LM_1与柔红霉素结合;Bradford蛋白检测法和紫外吸收光谱法检测偶联物中LM_1与DNR的克分子比;ELISA法检测LM_1与DNR偶联后抗体活性的变化;免疫组织化学法检测偶联物在兔眼组织的免疫特异性。结果 偶联物表现出单抗LM_1和DNR的生物学活性及紫外光谱特征,偶联产物中DNR与LM_1的克分子比约为12∶1,即每个抗体分子可以携带约12个药物分子。偶联后抗体的活性保持为原有活性的76.5％以上。免疫组化显示偶联物仅在兔晶状体上皮细胞呈阳性表达,在其他眼组织为阴性表现。结论 抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体与柔红霉素的免疫偶联物在体外可以选择性地结合到兔晶状体上皮细胞并保持特异的免疫活性。

治疗性单克隆抗体的研究进展及其免疫偶联物的抗肿瘤应用

目前正在研究的生物技术药物有1/4是单克隆抗体类药物,治疗性抗体已成为生物制药业发展最快的领域之一,它们用于治疗如肿瘤、移植排斥、自身免疫病、心血管疾病、病毒感染等。在发展初期,鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用,但其存在着严重的不足,单克隆抗体人源化已逐渐成为当前研究的热点。另外,将放射性物质、化疗药物以及生物毒素等与单克隆抗体偶联得到免疫偶联物,这些偶联物被单克隆抗体特异性地导向表达相应抗原细胞的表面,并发挥抗肿瘤效应,同时也降低了药物对正常组织的损伤。文中就有关单克隆抗体人源化的研究进展和抗肿瘤应用进行综述。

单克隆抗体与平阳霉素偶联物对肿瘤的区域性导向实验治疗

以小鼠Ｈ２２肝癌腹腔内移植和胸腔内移植肿瘤为模型，观察３Ａ５ＰＹＭ偶联物对腔内肿瘤的治疗作用，并以裸鼠移植结肠癌为模型，观察局部注射的治疗作用。结果表明，于小鼠肝癌Ｈ２２皮下肿瘤局部给药，３Ａ５ＰＹＭ在肿瘤的浓度较游离ＰＹＭ高，滞留时间也较长。对小鼠腹腔内或胸腔内移植的肿瘤，腔内注射３Ａ５ＰＹＭ比游离ＰＹＭ具有更显著的延长动物生存期的作用。裸鼠皮下移植ＨＴ２９人结肠癌，在肿瘤周围注射３Ａ５ＰＹＭ比ｉｖ或ｉｐ给予３Ａ５ＰＹＭ显示更高的抑瘤率。提示单抗与平阳霉素偶联物在肿瘤的区域性导向治疗中有较好的疗效。

抗癌抗生素C1027与单克隆抗体偶联物的抗肿瘤作用

抗癌抗生素C1027对癌细胞有强烈杀伤作用,比阿霉素强10000倍以上,C1027与癌细胞接触10min即显示对DNA合成的强烈抑制作用,C1027分子由发色团与蛋白质两部分构成;发色团是烯二炔新化合物,是C1027分子的主要活性部分.C1027分子可拆分与重建,重建的C1027同样有高度抗肿瘤活性.通过新的交联方法可制备C1027与单抗的强化偶联物.体外、体内试验表明.C1027单抗偶联物对肿瘤靶细胞有很强的特异性杀伤作用;对移植于探鼠的人体肝癌、胃癌有显著疗效,在可耐受剂量,肿瘤抑制率达85%(P<0.01).研究结果显示,C1027作为高效“弹头”药物,可用于研制新的小型化高效抗肿瘤导向药物.

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68×1010 L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1%)抗AOZ单克隆抗体。同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响。另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5-OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(dcELISA)检测方法。结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503μg/L,定量检测线性范围(IC20～IC80)为0.06～14.0μg/L,检出限(IC10)达0.017μg/L;dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6μg/L,检出限为0.056μg/L。两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测。

平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物的抗肿瘤作用

目的 研制一种以单抗Fab′片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法 制备单抗 3A5Fab′片段及其与平阳霉素 (PYM )偶联物Fab′ PYM后 ,测定Fab′ PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用。结果 Fab′及Fab′ PYM保持了与靶细胞C2 6的免疫反应性 ;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的 15 % ;Fab′ PYM对C2 6细胞的杀伤作用强于PYM ;对非靶细胞KB的杀伤作用与PYM相似 ;ip和iv给药 ,Fab′ PYM对小鼠皮下接种的肠癌 2 6生长抑制作用均强于 3A5 PYM和PYM。结论 Fab′ PYM具有比PYM及 3A5

去甲斑蝥素与单克隆抗体偶联物治疗肝癌实验研究

用大鼠单克隆抗体３Ａ５与去甲斑蝥素（ＮＣＴＤ）制备偶联物。ＥＬＩＳＡ检测结果表明：３Ａ５ＮＣＴＤ偶联物保持对人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞和小鼠肝癌Ｈ２２细胞的免疫反应性。克隆生成法测定结果显示：３Ａ５ＮＣＴＤ具有比ＮＣＴＤ更强的细胞毒性。小鼠腹腔内移植肿瘤，ｉｐ给药，３Ａ５ＮＣＴＤ（３ｍｇ／ｋｇ）和ＮＣＴＤ的ＩＬＳ值分别为１１１％和３７％。结果说明在对腹腔肿瘤的治疗方面３Ａ５ＮＣＴＤ具有比游离ＮＣＴＤ更强的治疗作用。裸鼠移植ＢＥＬ７４０２人肝癌，ｉｖ给药，ＮＣＴＤ肿瘤抑制率为１５％（Ｐ＞００５），３Ａ５ＮＣＴＤ为６２％（Ｐ＜００１）；ｐｔ给药，ＮＣＴＤ肿瘤抑制率为４７％（Ｐ＜００５），３Ａ５ＮＣＴＤ为７８％（Ｐ＜００１）。与ＮＣＴＤ相比３Ａ５ＮＣＴＤ对裸鼠移植人肝癌具有更强的治疗作用。在给药途径方面，治疗效果ｐｔ强于ｉｖ。以上结果提示单克隆抗体与ＮＣＴＤ偶联物在肿瘤的导向治疗中有较好的疗效。

单克隆抗体3A5-复方中药安迪偶联物的肝癌导向治疗

目的:探讨单克隆抗体3A5-复方中药安迪粉针剂偶联物(3A5-Andi)的肝癌导向治疗作用。方法:用单克隆抗体3A5与安迪粉针剂(Andi)制备偶联物,ELISA检测3A5-Andi偶联物保持对人肝癌BEL-7 402细胞的免疫反应性;采用小鼠/裸鼠移植性肿瘤模型,5-FU为阳性对照组,观察12、24和50mg/kg的导向治疗作用。结果:克隆生成法显示,3A5-Andi具有比Andi更强的细胞毒性,二者的IC_(50)分别为2.8 mg/L和5.1 mg/L(P<0.01)。24 mg/kg和50 mg/kg 3A5-Andi ip对小鼠移植性腹水型H_(22)肝癌的生命延长率(LPR)分别为133％和167％(P<0.05);而12mg/kg和24mg/kg Andi的LPR分别为112％和138％(P<0.05)。24 mg/kg 3A5-Andi和12 mg/kg Andi iv对裸鼠移植性人肝癌BEL-7402细胞瘤的瘤重抑制率分别为63.5％和52.2％(P>0.05)。24 mg/kg 3A5-Andi和12 mg/kg Andipt对BEL-7402人肝癌的抑制率分别为75.4％和61.0％(P>0.05)。结论:3A5-Andi偶联物具有一定的肿瘤导向治疗作用;3A5-Andi与Andi比较,3A5-Andi对裸鼠移植人肝癌BEL-7402具有较强的治疗作用;pt方式3A5-Andi比iv疗效更好。

平阳霉素与单克隆抗体3D6及其Fab′片段偶联物对肝癌的实验治疗

单抗 3D6是抗IV型胶原酶单克隆抗体。以葡聚糖T 40 (DextranT 40 )为中介体制备 3D6和平阳霉素 (PYM )的偶联物 3D6 PYM。采用间接ELISA法、TTC抑菌效价检测法、克隆形成法、MTT法及动物移植性肿瘤模型测定偶联物的生物学活性与体内外抗肿瘤作用。实验表明 ,3D6 PYM偶联物与PG、KB、C2 6及H2 2细胞等呈免疫学阳性反应 ;3D6 PYM偶联物对BEL 740 2、KB和H2 2细胞的细胞毒作用强于游离PYM。应用小鼠移植性肝癌模型观察偶联物对肝癌生长的抑制作用及长期疗效。结果显示 ,3D6 PYM偶联物对肿瘤生长有较强的抑制作用且在体内作用时间延长 ,发挥较好的疗效。第 2 1天时 ,按 10mg/kg剂量比较 ,3D6 PYM偶联物、3D6与PYM混合物及PYM的抑瘤率分别达到 99.7%、95 .6%、81.5 %。停止治疗后 ,继续观察各组动物的生存时间 ,对照组的中位生存期为 3 8d ,按 10mg/kg剂量比较 ,3D6 PYM偶联物组、3D6与PYM混合物组以及PYM组的中位生存期分别为 >12 0、88和 5 4d。 12 0d时 ,3D6 PYM偶联物 10mg/kg组未见动物死亡。以 β 环糊精为中介体制备单抗 3D6Fab′片段与PYM偶联物Fab′ PYM ,小鼠移植性肝癌模型皮下接种后第 7天给药 ,Fab′ PYM偶联物组与PYM抑瘤率分别为 81.0 %和 2 9.1%。以上研究结果表明 ,3D6 PYM及Fab′ PYM偶联?

抗人肝癌单克隆抗体和Fab片段在裸鼠体内分布及药物偶联物的疗效比较

大鼠抗人肝癌单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ５（ＩｇＧ１）腹水经亲和层析柱纯化后，用木瓜蛋白酶消化得到Ｆａｂ片段，经ＥＬＩＳＡ检测均具有良好的免疫活性。将￣（１２５）Ｉ－Ｆａｂ和￣（１２５）Ｉ－３Ａ５注入移植人肝癌裸鼠体内，Ｆａｂ片段分布在主要脏器的每克组织注射剂量百分比（ＩＤ％／ｇ）的持续时间和数值均低于完整ＭｃＡｂ，但肿瘤与非肿瘤组织（Ｔ／ＮＴ）的比值则高于完整ＭｃＡｂ，说明Ｆａｂ片段的分布对肿瘤组织具有较高的特异性。注射￣（１３１）Ｉ－Ｆａｂ后１２ｈ能使肿瘤显像，而注射￣（１３１）Ｉ－３Ａ５后２４ｈ肿瘤仍未显像，说明Ｆａｂ片段在肿瘤出现显像的时间较早。ＭｃＡｂ和Ｆａｂ片段与抗癌抗生素Ｃ１０２７的偶联物３Ａ５－Ｃ１０２７和Ｆａｂ－Ｃ１０２７对人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞的ＩＣ５０分别为４．２×１０￣（－１４）和８．６×１０￣（－１６）ｍｏｌ／Ｌ，两者相差４９倍。３Ａ５－Ｃ１０２７和Ｆａｂ－Ｃ１０２７偶联物对移植人肝癌裸鼠的治疗结果，接种肿瘤后３ｄ静脉注射药物，给药３次，每次０．１５ｍｇ／ｋｇ，３Ａ５－Ｃ１０２７和Ｆａｂ－Ｃ１０２７的抑瘤率分别为６８％和６６％，两者无显著性差异。接种肿瘤１０ｄ后静脉给药，注射６次?

单克隆抗体—表阿霉素免疫偶合物的制备和体外活性

用双功能试剂己二酰肼制备腙键连接的聚谷氨酸—表阿霉素，通过控制交联条件，所得产物克服了大分子自身交联的缺点，交联率较高。聚谷氨酸的载药量与分子量呈正比，平均每８～１１个谷氨酸单体连接１分子表阿霉素。分子量为１４３００的聚谷氨酸做载体其载药量为１：１１，与单抗交联所得的偶合物ＭｃＡｂ：ＰＧＡ：ＰＡＲ为１：２：２２。偶合物较好地保留了抗体活性，体外细胞毒性较游离药物略有下降，但表现出单抗介导的靶细胞选择性杀伤作用。本研究用腙键交联法成功地制备了药／抗比高且体外有效的免疫偶合物，为进一步制备细胞靶向的肿瘤化疗制剂奠定了基础。

单克隆抗体(HI_(30))-丝裂霉素免疫偶合物的研究

用Dextran T-40的氧化产物葡聚糖多聚醛(polyaldehyde,PAD)作为中间载体,将鼠抗人T淋巴细胞表面分化抗原的单克隆抗体HI_(30)与抗癌药丝裂霉素(mitomgcin C,MMC)形成共价连接,制备HI_(30)-PAD-MMC免疫偶合物。偶合物的特异性毒性依赖于单克隆抗体(单抗)和靶细胞表面抗原位点的结合。偶合物基本上保持原有的抗体结合活性及药物细胞毒,并具有良好的稳定性。

人单克隆抗体与平阳霉素偶联物治疗乳腺癌实验研究

目前研制的大多数道抗肿瘤导向药物均使用鼠源性单抗制备，临床使用可导致人抗鼠抗体(HAMA)产生。据报告在黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌和卵巢癌患者，HAMA发生率高达100%，HAMA对注入的单抗导向药物起中和作用，从而抵消其疗效。因此，研究者普遍关注的是使鼠单抗人源化。CMl是抗乳腺癌人单克隆抗体，

免疫治疗及抗体偶联药物治疗三阴性乳腺癌的临床研究进展

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌的一种预后较差的分子亚型,传统治疗手段有限;但因其具有免疫微环境活性较强的特征,为免疫治疗以及抗体偶联药物(ADCs)治疗提供了一定的生物学基础。现今,免疫检查点抑制剂联合化疗,以及ADCs类药物戈沙妥珠单抗、德曲妥珠单抗的相继问世,改变了TNBC的治疗格局,也为针对TNBC的新药研发提供了新的思路。本文对免疫治疗及ADCs治疗TNBC的临床研究进展进行综述,以期对临床药物策略选择即未来研发趋势提供参考。

卵巢癌单克隆抗体-人血清白蛋白-阿霉素偶联物的制备及鉴定

卵巢癌单克隆抗体┐人血清白蛋白┐阿霉素偶联物的制备及鉴定张兰梅连利娟①许秀英①刘文淑①（海军总医院妇产科，北京１０００３７）①北京协和医院妇产科，北京１０００３７作者简介：张兰梅，女，３４岁，硕士学位，主要从事卵巢肿瘤的诊断及治疗；指导教授，连利娟中...

单克隆抗体导向的间接和小型化偶联物的体内抗肿瘤作用及机制初探

目的:观察抗人成骨肉瘤单克隆抗体导向的间接OSMcAb-HSA-MTX和小型化偶联物F(ab′)2-MTX的体内抗肿瘤作用及对其作用机制作初步探讨。方法:应用流式细胞仪观察小型化偶联物F(ab′)2-MTX、间接偶联物OSMcAb-HSA-MTX、直接偶联物OSMcAb-MTX对细胞周期时相的影响;在裸鼠移植性人成骨肉瘤的模型上观察上述偶联物的体内抗肿瘤作用。结果:各处理组细胞周期中G0/G1期细胞数明显增加,S期细胞数明显减少,均可见明显的凋亡峰,F(ab′)2-MTX、OSMcAb-HSA-MTX、McAb-MTX、MTX处理组的S期细胞百分数(SPP)分别为(22.9±2.4)%、(26.4±2.2)%、(27.3±2.3)%、(30.6±4.5)%,F(ab′)2-MTX作用最强(P<0.05),McAb-HSA-MTX、McAb-MTX次之。F(ab′)2-MTX偶联物静脉注射和腹腔注射给药抑瘤率分别为91.17%和88.33%,均有较游离药物更高的疗效,同时也优于Mcab-MTX、Mcab-HSA-MTX偶联物(P<0.05)。结论:单克隆抗体导向的间接和小型化偶联物通过抑制细胞的S期,诱导细胞的凋亡而发挥抗肿瘤作用;F(ab′)2-MTX、OSMcAb-HSA-MTX具有良好的体内抗肿瘤作用,F(ab′)2-MTX作用更强。

甲氨蝶呤与抗人成骨肉瘤单克隆抗体F(ab′)_2片段偶联物的体外抗肿瘤作用

目的:研制一种以单抗F(ab′)2片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法:制备出抗人成骨肉瘤单克隆抗体F(ab′)2片段与甲氨蝶呤(MTX)偶联物F(ab′)2-MTX、间接偶联物McAb-HSA-MTX、直接偶联物McAb-MTX,并进行体外靶细胞结合实验、细胞增殖抑制实验。结果:F(ab′)2、McAb、F(ab′)2-MTX、McAb-HSA-MTX、McAb-MTX均保持了与靶细胞MG-63的免疫反应性;细胞增殖抑制实验中,F(ab′)2-MTX、McAb-HSA-MTX、McAb-MTX、MTX的半抑制浓度(IC50)分别为(0.67±0.110)μg/L、(2.55±0.114)μg/L、(2.71±0.1452)μg/L、(5.51±1.529)μg/L,上述所有偶联物的杀伤活性明显大于游离MTX(P<0.05),F(ab′)2-MTX的杀伤活性明显大于McAb-HSA-MTX和McAb-MTX(P<0.01),F(ab′)2同抗体一样没有治疗作用。结论:F(ab′)2-MTX具有比MTX及McAb-MTX、McAb-HSA-MTX更强的体外抗肿瘤作用。

抗体偶联药物联合免疫抑制剂治疗局部晚期或转移性尿路上皮癌的研究进展

尿路上皮癌(UC)作为一种泌尿系统常见的恶性肿瘤,其患病人数不断增加,部分患者初治时已发展为无法外科手术的局部晚期或远处转移UC(la/mUC),目前的标准治疗方案是以铂类为基础的化疗,但不良反应和治疗效果并不理想。近年来,抗体偶联药物联合免疫检查点抑制剂治疗策略正逐渐成为癌症精准医疗研究的新焦点,为该类患者带来了新的治疗选择。当前这一领域的相关临床试验取得诸多成果,该文旨在对最近的研究进展进行全面回顾。