单克隆抗体纯化过程中内毒素去除方法分析

目的：分析单克隆抗体纯化过程中，去除内毒素的不同方法的应用效果，并探讨它们应用于中试规模的可行性。方法与结果：比较了多聚赖氨酸型的内毒素去除填料、20nm膜过滤、将单抗附着在蛋白A柱上后使用精氨酸和组氨酸溶液冲洗等3种方法的内毒素去除效果，发现3种方法都可以将内毒素水平大幅降低，可分别将内毒素去除70％、88％和97％。因为单抗分子等电点较高，所获得的最低内毒素含量为0．2～0-3EU／mg。结论：3种方法均具有一定的工艺放大潜力，进一步提高内毒素去除效果将需要综合使用不同机理的去除技术。

应用Protein A亲和层析法制备及纯化R1 JHL单克隆抗体

[目的]制备、纯化N-甲基D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基RIJHL单克隆抗体。[方法]NR1杂交瘤细胞腹腔注射BalB/C小鼠制备抗体,Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析纯化单抗,Western-blot鉴定该单抗特异性。[结果]纯化后单抗识别大鼠脑组织膜蛋白中约115 kD大小的单一条带。[结论]制备、纯化了具有高度特异性的抗NR1单克隆抗体,为进一步研究NMDA受体提供了工具。

抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究

目的了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据。方法在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对。结果不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均最优。结论经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11(V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件。

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确。

PURIFICATION AND IDENTIFICATION OF THE ANTIGEN ASSOCIATED WITH MONOCLONAL ANTIBODY 3H_(11) AGAINST GASTRIC CANCER CELL

The object of this study is to investigate the properties of gastric cancer assoiciated antigen by McAb3H11 against gastric cancer cell line. Antigen purified by affinity chromatography and further charac- terized by biochemical and immunological techiques. Results showed that assoiciated antigen of McAb 3H11 was mainly located on the membrane of target cells. It was sensitive to heat and digestion of proteases,but resistant to treatment with sodium periodate. Schiff’s reagent staining was negative. SDS-PAGE and IEF- analysis showed that the antigen was a 210 kD molecular weight with pl of 8. 5 protein. The molecular weight of antigen extracted from target cell with tunicamycin was not changed. We concluded that the cor- responding antigen of McAb 3H11 might be an alkaline protein.