日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性。

重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原及疗效考核价值的初步研究

目的 探讨抗重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 制备纯化的抗日本血吸虫 14 3 3的单克隆抗体 ,以纯化的兔抗rSj14 3 3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验 (P M ELISA)法 ,分别对同批治疗前及治疗后 2、4、6、12个月的血吸虫病患者和感染兔血清进行检测 ,并与常规检测抗体的可溶性虫卵抗原 -酶联免疫吸附试验 (SEA ELISA)法比较。结果 P M ELISA法对治疗前血吸虫病患者检测阳性率为 98 2 % ,而检测抗体的SEA ELISA为 95 5 %。P M ELISA法对治愈后 2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为 17 7%、4 1 9%、5 5 %、85 % ,而检测抗体的SEA ELISA法分别为 3 2 %、6 5 %、12 5 %、15 %。结论 该法既有较好的诊断价值 ,又有较好的疗效考核价值。

抗人CA15-3单克隆抗体的制备、鉴定及化学发光检测体系的建立

目的获得抗人CA15-3单克隆抗体（mAb），建立CAl5-3双抗体夹心化学发光检测体系。方法人CAl5-3糖抗原免疫小鼠后，通过细胞融合，筛选到阳性杂交瘤细胞。杂交瘤细胞扩大培养后，纯化获得抗CAl5-3的mAb。对抗体进行纯度、效价、表位和亚型的鉴定并建立双抗体夹心检测CAl5—3化学发光体系，对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性与特异性评估。结果获得5株阳性信号较强的杂交瘤细胞（分别为#3-1-3、#5-2-2、#11-2-2、#12—1—3和#16-1-3）。其分泌的抗体效价均大于10qg／mL，轻链均为K链，重链#3—1-3为IgG2a、#5-2-2与#12-1-3为IgG2b、#11-2-2与#16—1-3为IgG3。双抗体夹心体系在（0。300）U／mL范围内线性关系良好，其准确度的回收率为97．45％；最低检测限为0．59U／mL；线性相关系数为0．9978；低高值的变异系数（cy）均小于10％；与肿瘤标志物AFP、CEA、CAS0、CAl9-9和CA72-4均不交叉。结论成功制备了抗人CAl5-3mAb，建立了双抗体夹心检测CAl5-3化学发光体系。

14-3-3ζ蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

为了探讨14-3-3ζ蛋白在中枢神经系统内的分布,本文采用纯化的基因重组型14-3-3ζ蛋白免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗14-3-3ζ蛋白单克隆抗体;Western blot及免疫组织化学法鉴定抗体。结果显示:制备的单克隆抗体能特异性识别基因重组14-3-3ζ蛋白和大鼠脑匀浆32kD蛋白。免疫组化染色结果显示,14-3-3ζ蛋白在大鼠中枢神经系统广泛分布,在皮层、海马、杏仁核和基底前脑的免疫阳性染色较强,免疫阳性产物位于神经元胞浆内。本研究结果提示,14-3-3ζ蛋白可能具有多样化的生理功能。

重组小鼠脑14-3-3γ蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备重组小鼠脑14-3-3γ蛋白单克隆抗体(McAb),为神经系统退行性疾病的诊断提供标志物。方法采用重组小鼠脑14-3-3γ蛋白免疫小鼠,制备抗小鼠脑14-3-3γ蛋白的多克隆抗体,并应用多克隆血清检测14-3-3蛋白在大鼠脑中的分布。进一步应用杂交瘤技术制备其单克隆抗体,并鉴定其特异性以及与天然抗原的亲合力。结果制备的多克隆血清能有效识别大鼠脑组织的14-3-3蛋白,免疫组化显示在黑质,蓝斑,室周核,背外侧核染色阳性。制备的单克隆抗体可特异性识别重组14-3-3γ蛋白、大鼠脑及人脑中14-3-3蛋白。结论重组小鼠脑14-3-3γ蛋白多克隆血清和单克隆抗体成功制备;此可用于神经系统退行性疾病的诊断。

抗ProGRP_((31-98))单克隆抗体D-D_3的^(131)I标记及其体内生物学分布研究

目的探讨抗胃泌素释放肽前体(ProGRP)(31-98)单克隆抗体D-D3的131I标记方法及其在健康昆明小鼠体内的生物学分布规律与特点。方法采用氯胺-T法用131I标记单克隆抗体D-D3,利用纸层析法测定其标记率、放化纯度和稳定性。取健康昆明小鼠50只,随机分为10组,每组5只,自昆明小鼠尾静脉注射131I-D-D31.48 kBq/100μL(4μCi/100μL),各组小鼠分别于注射后5、153、0 min及1、2、4、8、12、244、8 h处死,取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、骨骼(右下肢)、肌肉(右下肢)和脑组织,称质量(g)后测放射性计数(cpm),计算各脏器组织的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及药物动力学参数。结果 131I-D-D3标记率为(86.56±3.8)%,比活度为(2.25±0.05)MBq/μg,放化纯度为(99.27±0.6)%,标记物置于37℃水浴箱放置48 h后的放化纯度为(88.38±0.4)%,与鼠血清充分混合后24 h的放化纯度为(64.43±0.7)%1。31I-D-D3在健康昆明小鼠体内代谢过程符合一级血药动力学二室模型,代谢公式为c=50.234e-2.793t+26.128e-0.018t,T1/2α=0.25 h,T1/2β=37.89 h,在体内主要通过肾脏和肝脏代谢,血液清除较快,胃、肠等组织摄取稍多,脑、肌肉、心脏等组织摄取较少。结论 131I-D-D3标记率及放化纯度高,在体内、外有很好的稳定性。

β淀粉样肽22-35单克隆抗体的制备和应用

目的制备稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,以Aβ2 2 -35单克隆抗体建立Aβ检测方法。 方法以人工合成的Aβ2 2 -35连接匙孔槭血蓝蛋白 ,免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞与SP2 / 0 细胞融合 ,制得能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,采用Westernblotting增强化学发光技术观察大鼠脑内Aβ含量。 结果得到 2株能稳定分泌Aβ2 2 -35单克隆抗体的杂交瘤细胞 ,Aβ2 2 -35单克隆抗体的Ig亚类为IgG3 ,青年组和老年组大鼠脑Aβ含量分别为 9.8± 2 .8和 13 .3 6± 2 .65 pmol/ 12mg脑组织。 结论制备得到的Aβ2 2 -35单克隆抗体特异性强 ,效价高 ,测得的老年大鼠脑Aβ含量显著高于青年大鼠。

鼠抗人B7-1分子功能性单克隆抗体的制备及生物学特性

目的 :制备鼠抗人B7 1分子的功能性单克隆抗体 ,研究其对高表达相应配基分子细胞的生物学效应。方法 :用两株转人B7 1基因细胞株XG7 B7和L B7分别作为免疫原及检测细胞株 ,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。以快速定性试纸分析法鉴定单抗所属的小鼠IgG亚类 ,采用竞争抑制及间接免疫荧光法分析单抗的特异性和亲和力 ,以高表达B7 1分子的恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi为靶细胞 ,分析单抗对其生长的影响。以人多发性骨髓瘤细胞转入B7 1基因细胞株XG1 B7为刺激细胞 ,以人外周血单个核细胞 (PBLs)为反应细胞 ,用MTT法分析单抗的中和活性。结果 :成功地获得了 1株鼠抗人B7 1的功能性单克隆抗体 (克隆 4E5 ) ,属于小鼠IgG1亚类 ,经流式细胞仪分析 ,4E5与PBLs、体外人工诱导的树突状细胞(DCs)、Raji和Daudi的阳性结合率分别为 10 2 %、95 1%、92 7%及 89 2 % ;能完全阻断标准抗人B7 1单抗与相应抗原的结合。同时还发现 ,单抗 4E5能显著地抑制恶性淋巴瘤细胞Raji和Daudi的生长繁殖 ,并能阻断B7分子介导的协同刺激信号的传导。结论 :单克隆抗体 4E5是一株抗人B7 1分子的功能性单抗 ,具有重要的研究和应用价值。

程序性死亡受体(PD)-1单克隆抗体治疗肝癌肝移植术后复发诱发急性免疫性肝炎:附1例报告

目的探讨程序性死亡受体(PD)-1单克隆抗体治疗肝细胞癌(肝癌)肝移植术后复发的安全性。方法回顾性分析1例因使用PD-1单克隆抗体(pembrolizumab)治疗肝癌肝移植后复发而诱发急性免疫性肝炎患者的临床资料。结果患者因原发性肝癌行肝移植术,术后4个月发现肝癌肺转移,术后12个月予pembrolizumab治疗(150 mg静脉滴注1次),治疗后第5日发现肝功能异常,行肝穿刺活组织检查病理提示轻至中度急性排斥反应。结合患者临床表现、实验室检查以及pembrolizumab的药物说明书,诊断为急性免疫性肝炎。给予肾上腺皮质激素及加强免疫抑制治疗,随访8个月患者带瘤生存,但肝功能仍持续异常。结论肝移植术后免疫抑制状态下不宜应用PD-1单克隆抗体等免疫检查点抑制剂,有诱发免疫性肝炎的风险。

抗人内皮细胞特异性分子-1单克隆抗体的研制和初步鉴定

运用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,以人内皮细胞特异性分子 1(ESM 1)蛋白为抗原 ,经PEG融合 ,有限稀释法筛选 ,获得了 7株稳定分泌抗人ESM 1的杂交瘤细胞株 ,其中 3A7细胞株特异性尤为显著 ,效价高达 1∶6 0 0 0。所分泌抗体亚型为IgG2b ,Westernblot结果表明对内皮细胞中的ESM 1蛋白及细胞培养上清中的ESM 1均可特异性识别。并观察到ESM 1主要分布在内皮细胞的细胞胞质伴胞核中。在肾组织中 ,ESM 1定位于血管内皮细胞 ,且肾癌标本中ESM 1阳性表达显著高于正常肾组织。免疫组化结果表明所获单抗具有一定的特异性和实用性。

抗ICAM-1单克隆抗体的制备及其活性

目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1（ICAM-1）单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化，筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株，并对McAb进行纯化。用ELISA间接法测定效价并鉴定其亚类，Westerm blot鉴定其抗原特异性，细胞黏附试验检测其中和活性。结果筛选出1株可稳定分泌抗人ICAM-1抗体的杂交瘤细胞株3F2，杂交瘤染色体众数为98～104。纯化后的单抗蛋白浓度为1．253mg／ml，纯度达83．6％，效价可达2．56×10^5。其分泌的抗体亚型为IgG1，腹水效价达5．12×10^5，可与ICAM-1特异性结合，可抑制ICAM-1与淋巴瘤细胞间的黏附，具有明显的中和ICAM-1的活性。结论已成功制备出抗ICAM-1的McAb，为其进一步的研究和应用奠定了基础。

1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定

目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10^5,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10^9 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。

西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗治疗老年晚期直肠癌的近远期效果及其对ICAM-1、Cox-2和CK-20水平的影响

目的探讨西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗治疗老年晚期直肠癌的近远期效果及其对血清细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、环氧酶-2（Cox-2）和细胞角蛋白-20（CK-20）表达的影响。方法选取2009年6月～2013年11月右江民族医学院附属医院肛肠外科收治的88例老年晚期直肠癌患者．根据治疗方案的不同分为XELOX化疗组（单独组）和XELOX化疗＋西妥昔单克隆抗体组（联合组），每组各44例；分别比较两组患者的近远期临床疗效、ICAM-1、Cox-2和CK-20的变化。结果联合组的治疗有效率为70．45％，显著高于单独组的40．91％（P〈0．05），但两组患者疾病控制率和不良反应发生率比较差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组1年生存率与单独组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；联合组2年生存率明显高于单独组（P〈0．05）；而且，联合组患者的局部复发与转移率也明显低于单独组（P〈0．05）；单独组患者的平均生存时间为16．263个月，显著短于联合组的20．658个月（P〈0．05）；治疗后两组患者ICAM-1、Cox-2和CK-20表达水平均显著降低（P〈0．05）；而且，联合组患者的改善程度明显优于单独组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论西妥昔单克隆抗体联合XELOX化疗可显著提高老年晚期直肠癌的近远期临床疗效，抑制肿瘤相关基因ICAM-1、Cox-2和CK-20的水平。

巨噬细胞抑制因子-1单克隆抗体的研制及血清检测系统的建立

目的研制巨噬细胞抑制因子-1(MIC-1)单克隆抗体并建立MIC-1血清检测方法。方法应用自主研制的MIC-1抗原免疫BALB/C雌鼠,通过杂交瘤技术获得分泌抗MIC-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA方法构建MIC-1血清检测体系并对性能进行鉴定。结果成功获得了32株抗MIC-1单克隆抗体,选用其中2株高亲和力单克隆抗体建立了双夹心ELISA MIC-1血清快速检测方法。性能鉴定结果表明所建立的方法线性关系良好(R2值大于0.999);试验内变异系数为5.15%,试验间变异系数为9.51%;平均回收率为98.9%;37℃保存3天和4℃保存6个月稳定性良好。结论所制备的MIC-1检测方法各项指标均达到SFDA相关要求,能够满足科学研究和临床检测的技术需要,并进入产业化程序。

抗细胞间黏附分子-1单克隆抗体对大鼠血管重塑的影响

目的:探讨抗细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体对血管球囊拉伤术后血管重塑的影响作用。方法:制备抗ICAM-1单克隆抗体,将30只SD大鼠随机分为抗体组、手术对照组及正常对照组(各10只),每组又分为24h观察组(5只)和14d观察组(5只),抗体组通过尾静脉输入抗ICAM-1单克隆抗体观察球囊拉伤后的大鼠股动脉内壁的变化,应用免疫组织化学、光镜等方法检测拉伤局部内膜变化情况。结果:抗体组球囊拉伤血管24h后内膜处有极少量中性粒细胞浸润,而手术对照组损伤内膜有大量的中性粒细胞浸润,14d后抗体组球囊拉伤血管内膜厚度小于手术对照组,管腔内径大于手术对照组,且内膜有较多VEGF蛋白颗粒表达。结论:病理性重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因,由于损伤致周围组织炎性改变,致使大量白细胞向损伤局部内膜浸润,加重内膜损伤,而抗ICAM-1单克隆抗体可对抗白细胞与受损内膜的内皮细胞结合,减轻损伤血管内膜的炎性反应,对防治再狭窄有一定作用。

抗ICAM-1单克隆抗体在治疗方面的研究进展

细胞间黏附分子-1（ICAM-1；CD54）属于免疫球蛋白超家族成员，是一种跨膜的单链糖蛋白，相对分子质量（Mr）为80000～110000，在细胞膜上分为细胞外段，疏水的跨膜段和短的细胞内区段。

^(99m)Tc标记单克隆抗体Au_(14-1)对荷宫颈癌小鼠的放射免疫显像研究

目的和方法：应用99mTc直接法标记抗小鼠宫颈癌（U14）单克隆抗体Au14-1，对荷瘤Km小鼠进行放射性分布和放射免疫显像的实验观察，探讨用99mTc－An14-1作宫颈癌导向诊断和导向治疗的可能性。结果：（1）99mTc－Au14-1注射后12h肿瘤灶已有放射性聚集，24h肿瘤组织的％ID／g值达8．79，呈明显特异性浓聚；（2）除肾脏外，各脏器的T／NT值在2．02~6．71之间，SPECT图像12h已见肿瘤显影，24h肿瘤影像更为清晰。结论：99TcTc－An14-1的体内分布与显像结果相一致，表明An14-1在体内具有良好的宫颈癌导向定位作用。

抗人粘膜地址素-1单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗人ＭＡｄＣＡＭ－１单克隆抗体（ｍＡｂ）。 方法以重组人ＭＡｄＣＡＭ－１胞外区蛋白免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备ｍＡｂ。结果获得１０株可分泌特异性ｍＡｂ的杂交瘤细胞，其腹水ｍＡｂ的效价为３．２×１０５～１．９×１０６，ｍＡｂ的Ｉｇ亚类均为ＩｇＧ１，其中，８株ｍＡｂ的轻链属κ型，２株为λ型。应用于免疫组化染色法，检测表明，正常成人小肠、附睾及前列腺组织中存在ＭＡｄＣＡＭ－１阳性表达的血管内皮细胞。结论 成功地研制出抗人ＭＡｄＣＡＭ－１的ｍＡｂ，为进一步研究ＭＡｄＣＡＭ－１在肠道黏膜免疫中的作用提供了有用的试剂。

抗人Flt-1单克隆抗体的制备和活性鉴定

目的:制备小鼠抗人血管内皮生长因子受体-1(Flt-1)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白为抗原,通过经典的杂交瘤制备和活性筛选方法建立能稳定分泌抗Flt-1蛋白的mAb杂交瘤细胞株。结果:经传统的小鼠腹水型抗体的制备和纯化方法获得了高纯度的抗人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的mAb。ELISA方法测定出该抗体的免疫球蛋白亚型为IgG1,轻链为κ链。West-ern blot结果显示该抗体能特异性地识别重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白,FACS结果表明该抗体能结合到Flt-1阳性的脐静脉内皮细胞和K562/A02细胞表面,并呈现出抗体浓度依赖性。结论:成功建立了1株能够稳定分泌抗重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的mAb细胞株XA12,为今后进一步开展Flt-1及其胞外Ⅲ区蛋白的生物学功能研究以及基因工程抗体研究奠定了基础。