人乳腺癌细胞cDNA文库的构建及鉴定

目的 :应用前期制备的一株乳腺癌单克隆抗体 (M4G3) ,筛选出高表达其相关抗原的乳腺癌细胞系T47D ,并利用此细胞系构建了以λgt11为载体的cDNA文库 ,为完成此乳腺癌特异抗原基因的克隆与表达奠定基础。方法 :在4株乳腺癌细胞中应用M4G3单抗进行免疫组化和WesternBlot检测 ,以其中一株T47D细胞为材料构建以λgt11为载体的cDNA文库 ,并进行文库质量鉴定。结果 :文库含有9 97×105个重组子 ,重组效率达到96 7 % ,插入的cDNA片段平均长度为1 0kb。结论 :与M4G3单抗结合的乳腺癌抗原分子量约为48000dalton。构建的T47D细胞cDNA文库完整 ,具有较好的质量 ,为进一步筛选奠定了基础。