单分子ELISA技术检测的临床应用

近年来,蛋白质和核酸的检测方法发生很大突破,超微量反应体系能很大程度地提高检测方法的敏感度。单分子ELISA技术是一种有潜力的蛋白质检测方法,其通过分离单分子进行测量,实现精准定量,而不是进行整体测量反映平均水平。与传统ELISA相比,单分子ELISA技术具有高分辨率、灵敏、低背景信号、低样本量、分析时间短等优点,能在复杂样本中进行低浓度蛋白质的检测,能广泛应用于监测HIV早期感染、癌症化疗切除后复发、神经系统疾病以及炎性疾病的发生、发展等方面。

基于单分子实时测序技术分析平坝窖酒小曲微生物菌群多样性

该研究利用单分子实时测序技术(SMRT)对平坝窖酒小曲中的微生物菌群多样性进行分析。结果表明,平坝窖酒小曲微生物的Chao1指数、Shannon指数、InvSimpson指数值分别为507、4.58、6.06,表明平坝窖酒小曲微生物的菌落组成及结构较为复杂。微生物菌群以霉菌为主,细菌次之,酵母菌相对丰度较低。在相对丰度排名前15的微生物中平坝窖酒小曲细菌类群相对丰度最高(属水平为38.73%,种水平为40.39%),远高于酵母菌和霉菌,其优势细菌为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)、融合魏斯氏菌(Weissella confusa)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),优势霉菌为米根霉(Rhizopus oryzae)、小孢根霉(Rhizopus microsporus)和横梗霉(Lichtheimia ramosa),优势酵母菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和扣囊腹膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)。

中国科研团队攻克分子筛酸中心表征的单分子成像技术

近日,清华大学鄂尔多斯实验室魏飞教授研究组和骞伟中教授研究组联合攻关,利用国际上最先进球差校正电镜技术,观察到分子筛孔道中酸性位(Al-T位点)与噻吩单分子的相互作用。相关成果已先后发表于国际学术期刊《科学》和《自然》。研究有机小分子在以分子筛为代表的多孔材料中的单分子成像与构象,是深入理解其相变、吸附、催化和相互作用过程的基础与关键。其中,有机小分子在室温或更高温度下的成像,一直是电子显微学领域难以攻克的关口。

医学检验中现代分子生物学技术的应用价值

分析与研究现代分子生物学技术在医学检验中的应用价值。方法 研究对象为2022.1月至2023.12月于我院就诊的110例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者,入院后均采用现代分子生物学技术进行检验,分别为荧光定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)。检验标准为试纸检测结果,将两种分子生物学技术的诊断效能进行比较,并比较不同感染情况患者乙型肝炎病毒基因(HBV-DNA)含量。结果 110例患者试纸法确诊乙型肝炎98例。一致性分析结果显示,PCR检验结果与试纸检查结果的一致性高(Kappa=0.853,P<0.05);ELISA与试纸检查结果的一致性一般(Kappa=0.675,P<0.05)。两种检验技术的诊断灵敏度、特异度、准确率差异明显,PCR更高(P<0.05)。大三阳患者HBV-DNA含量高于小三阳和急慢性感染期患者(P<0.05)。结论 现代分子生物学技术PCR在乙型肝炎医学检验中具有重要的应用价值,能够有效评估患者病情,为医学检验和临床诊治提供重要依据。

实现低浓度检测精准抓取 点亮单分子技术崭新视野——专访深圳市光与生物科技有限公司创始人何皓博士

单分子检测技术是近十年来迅速发展起来的一种超灵敏的检测技术,在化学分析、DNA测序、医学诊断等方面都具有独特的应用价值,对许多领域都产生了深远影响。本科就读于中科大少年班生物系的何皓博士,将留学期间完成的单分子荧光检测PCT专利回国进行转化,于2019年创立了深圳市光与生物科技有限公司(以下简称“光与生物”)。何皓团队以其核心技术(纳米级超亮稀土上转换发光探针技术及单颗粒成像系统),开发了具有高性价比的超灵敏单分子检测技术平台,为医疗科研和诊断领域带来飞克级别(fg/ml)的检测解决方案。作为深圳青年五四奖章的获得者,何皓博士运用单分子检测助力重疾早筛,为免疫标记物安装“灯泡”,显著提升了检测灵敏度。在2022年8月完成了Pre-A轮融资后,光与生物将推进更多新项目的挖掘、转化和市场拓展。未来,单分子免疫检测技术将应用到更多的临床诊断场景中。

单分子测序技术简介及在法医领域中的应用研究进展

随着测序技术的飞速发展,目前已经在多个领域得到应用。单分子测序技术是通过实时动态监测核苷酸序列变化在分子水平进行测序分析,其优点为相关试验的开展提供更多的选择和帮助。本文主要简述概括了单分子测序技术及其优缺点,并对单分子测序技术在法医领域中DNA、RNA检测的应用研究进展进行综述。

基于单分子实时测序技术的3个当阳广椒样品细菌多样性研究

本文采集了3个鲊广椒样品,使用单分子实时测序技术对其细菌微生物多样性进行了评价。在属水平上,乳酸杆菌属(Lactobacillus)的相对含量为94.25%;在种水平上,相对含量大于1.0%的种分别为隶属于乳酸杆菌属(Lactobacillus)的破布子乳杆菌(L.pobuzihii)、食品乳杆菌(L.alimentarius)、费斯莫尔德乳杆菌(L.versmoldensis)、类短乳杆菌(L.parabrevis)、短乳杆菌(L.brevis)、朝鲜乳杆菌(L.koreensis)和类食品乳杆菌(L.paralimentarius),其平均相对含量分别为32.31%、23.17%、22.01%、8.90%、3.31%、1.63%和1.05%,隶属于魏斯氏菌属(Weissella)的类肠膜魏斯氏菌(W.paramesenteroides)的平均相对含量为1.05%。在分类操作单元(Operational taxonomic units,OTU)水平上,发现6个核心OTU,包含的序列数占所有质控后合格序列数的29.58%。由此可见,当阳地区鲊广椒中的细菌微生物主要隶属于乳酸杆菌属(Lactobacillus),且样品间共有大量的核心菌群。

应用单引物PCR指纹技术分析Vc-獭兔的分子遗传结构

采用 1条小卫星引物 M13( 5′GAGGGTGGCGGTTCT3′)和 2条微卫星引物 ( GTG) 5、( GACA) 4,对 Vc- 系、Vc- 系獭兔、日本大耳白兔 ( JWR)和青紫蓝 ( QZL) 4个品系各 8只 ,总计 32个个体的遗传结构进行了 DNA指纹分析。结果 ,3条引物的扩增产物都呈现良好的多态性和稳定性 ;对每个品系混合 DNA池进行分析 ,计算出了 4个品系间及 32个个体间的共有带率及遗传距离指数 ,通过聚类分析 ,得出各品系间和个体间欧式遗传距离 ,并绘制出 4个品系间及各品系 32个个体间的亲缘关系树状聚类图 ,从而初步建立了 4个品系兔的

LB膜与AFM技术研究磷脂酰乙醇胺单分子膜结构

用LB膜技术对磷脂酰乙醇胺（PE）单分子膜的影响因素进行了研究。实验发现溶液浓度、亚相温度、pH值以及胆固醇含量等因素对磷脂酰乙醇胺单分子膜成膜条件有一定的影响。当溶液浓度为0．32mg／mL，加入量在100～500μL范围内，随着加入量的增多，磷脂分子越易形成致密的单分子层；温度升高对单分子膜有一定的破坏作用，在39．1℃时，亚相的pH值在中性或接近中性的弱酸条件下，PE分子排列更有序；胆固醇的加入降低了PE分子膜的流动性，对单分子膜有显著的稳固作用。用Y型LB提膜法将单分子膜转移到新解离的云母表面，用原子力显微镜技术对其进行了分子结构的观察研究，实验结果表明，膜压低于1mN／m时，液面上磷脂分子的烃链自由弯曲运动，取向性呈无序随机排列。但在大于1mN／m时，PE分子较易形成有序分子膜，膜压为33mN／m，形成高质量的LB膜。

单分子免疫阵列技术在传染病诊断中的应用

单分子免疫阵列(single molecule array,Simoa)技术,又称"数字ELISA",是近年来新开发的一种数字免疫分析方法,将单分子计数用于蛋白质生物标记物的检测。该方法可测量各种不同基质(血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞提取物等)中的蛋白质,检测限可达飞摩尔(fg/mL)数量级,灵敏度较传统ELISA提高约1000倍。目前,该技术在一些重大传染病,如新冠肺炎、结核病、艾滋病、朊病毒病诊断中的优势逐渐凸显。Simoa技术可帮助监测新冠病毒感染进程,有望实现早期高灵敏度诊断,以区分新冠肺炎轻症和重症患者;有望帮助诊断活动性结核病,并可以监测结核病治疗效果;可更准确检测人免疫缺陷病毒(HIV)免疫相关蛋白含量变化,提高早期诊断的灵敏性;可在羊瘙痒病临床症状出现前检测活体动物血清,提高痒病早期检测能力,从而有望用于人类克雅氏症诊断。未来,通过开发相关病种的检测试剂盒,有望利用Simoa技术提高疫病的综合诊断能力,还可进行疫苗免疫效果评价,为疫病防控提供依据。

模板技术制备单块介孔分子筛

Surfactant template synthesis of mesoporous silica monolith was carried out via modified fast sol gel process. It was easy to obtain crack free silica monolith due to low volume shrinkage during the gelation. The morphology of the titled silica was characterized by transmission electron microscopy and X ray diffraction. The results showed that the pores were worm like and the pore size was about 4 nm. Further nitrogen isothermal absorption experiment indicated that the specific area of the titled material was 391 m 2/g, which was comparable with the reported value 306 m 2/g in literature.

自组装单分子膜表征技术的研究

对自组装单分子膜技术的研究是具有广泛的实用价值与应用价值的,随着自组装技术的深入发展其应用领域也更加广泛,同时其大量的表征方法也日益更新。本文主要从以下几方面对自组装膜的表征手段作出了对比分析,例如:光、电化学分析方法、光谱学测试方法、微观显微学测试法等及自组装分子膜的相关辅助手段,例如:粗糙度检测法、金像显微观测法、椭圆光度法等,并对其发展前景作了展望。

数字化单分子免疫分析技术研究进展及毒品领域应用展望

数字化单分子免疫分析(Simoa)技术是一种新型的超高灵敏度、特异性、全自动化的多重检测技术。该技术结合了单分子、图像识别、数字化分析和荧光检测技术,能实现单分子检测,目前已经在神经性疾病的微创检查、肿瘤早期诊断、炎症、感染性疾病甚至miRNA检测等领域进行大量研究,均取得了不错的成果。毒品成瘾、戒断和耐受实质上是机体的一系列生理、生化过程,Simoa技术用于吸毒人员的生理生化研究将有助于阐明毒品成瘾和耐受机制,并为毒品戒断药物的研制提供理论依据。

利用三代测序技术鉴定c.586T>C突变导致的Bel亚型

目的利用PacBio三代测序技术鉴定c.586T>C突变导致的Bel亚型,并分析Bel亚型家系的血型血清学特点。方法ABO血型表型检测使用血清学方法,对ABO正反定型不符的家系标本进行ABO基因第6、7号外显子Sanger测序。利用PacBio三代技术对先证者及其子女的3例样本进行ABO基因全长单体型分析。结果先证者血清学表型为Bel亚型,测序技术鉴定ABO基因序列第7外显子存在c.586T>C位点突变,三代测序单体型鉴定先证者ABO基因型为ABO^(*)BEL(c.586T>C)/O01.02,其长子和长女基因型为:ABO^(*)A1.02/BEL(c.586T>C)、ABO^(*)B.01/BEL(c.586T>C)。结论c.586T>C位点突变是导致本例Bel的分子基础,PacBio三代测序技术能够精准鉴定ABO亚型单体型。

自组装单分子膜技术 在金属防护中的应用

本文综述了近年来自组装单分子膜研究进展及其在金属防护中的研究及应用 ,详细介绍了基于烷基硫醇、脂肪酸、硅氧烷、膦酸盐等的自组装单分子层的研究进展。可以预期自组装单分子涂层将在腐蚀与防护领域作为一种新的方法占据重要地位 。

清华大学单原子分子测控科学与技术研究中心简介

清华大学单原子分子测控科学与技术研究中心简介马万云（清华大学物理系，北京１０００８４）１基本情况单原子、分子测控科学与技术是指在单个原子、分子层次上对物质（存在的种类、数量与结构……）进行精确的探测、识别与控制，即对以原子和分子为单位的“极细微领域的...

基于单分子成像技术研究λ-DNA分子穿越微米通道端口的电动力学特性

操控单个DNA分子,将其有效引入、导出微纳通道是实现DNA生物芯片功能的前提条件.本文利用单分子荧光显微成像技术系统地实时观察分析λ-DNA单分子在电场力驱动下进入/穿出50μm通道端口处的电动力学特性及规律.研究发现:λ-DNA分子能够顺利进入trans端口并穿出cis端口,外加电场强度存在最大(Emax)和最小(Emin)阈值,只有场强E满足:Emin≤E≤Emax时, λ-DNA分子才能进入trans端口并顺利穿出cis端口;当电场强度小于最小阈值场强时, DNA分子不能进入trans端口;当电场强度大于最大阈值场强时, λ-DNA分子虽可能从trans端口进入通道内部,但不容易从cis端口穿出,而是在迁移至通道内cis端口附近时,运动方向反转、往复、甚至旋转等新现象,并且易于粘附到管壁上;随着场强增大,反转位置距cis端口越大.基于微流体电动力学理论,对λ-DNA分子在微通道端口的不同运动状态的物理机制进行了初步分析.本研究结果对研制基于微纳通道系统的基因芯片实验室及DNA分子传感器具有一定的实际指导意义.

mRNA单分子动态成像技术研究进展

转录后成熟的mRNA与RNA结合蛋白结合,形成信使核糖核蛋白复合物,之后在胞质内沿细胞骨架转运并定位到亚细胞特定区域。在此过程中,mRNA的转运及调控对于mRNA的功能、蛋白质的定位和细胞极性生长的维持发挥着重要的作用。近年来,活细胞单分子成像技术的发展,为人们深入了解mRNA的动态调控提供了新的契机。通过对活细胞中mRNA和RNA结合蛋白的标记,我们不仅可以检测mRNA的动力学特征,还可以原位检测新合成的蛋白质。本文主要介绍mRNA的定位和翻译过程,重点叙述单分子动态成像技术在分析mRNA动态调控中的应用。活细胞单分子成像技术可以揭示mRNA翻译的动力学特性,并促进我们对mRNA命运的理解,为后续研究mRNA的动态调控提供参考。

单分子磁镊旋转操控和基因转录调控动力学

基因转录调控是生命体调节基因表达的重要过程,是保证遗传信息可控传递和维持基因组稳定性的关键步骤.单分子技术的发展为分子水平上探索基因转录调控动力学机制提供了新的研究范式,有力地推动了基因转录调控规律方面的研究进展.本文着重介绍了依据单分子磁镊旋转操控技术发展起来的操控超螺旋DNA的技术,借助超螺旋DNA的“放大”特点,实现了对DNA双螺旋动态打开过程的高通量、单碱基精度的测量;随后,介绍了单分子磁镊旋转操控技术在基因转录调控动力学研究中的应用情况,通过实时监测转录泡结构,实现对转录起始、延伸和终止等阶段的动力学表征,建立了一系列新的转录调控模型;最后,介绍了单分子磁镊旋转操控和单分子荧光成像技术联用方案,为研究复杂体系中的基因转录调控动力学机制提供了新的范式和范例.

利用单分子裂结技术进行化学反应的动力学研究

自本世纪初开始，单分子电学测量技术发展十分迅速。利用单分子电学测量技术，研究者可以对单个、少数个分子中的电输运过程进行表征，从而为分子电子器件的构筑提供实验依据，使后者小再停留于理论设计范畴。