单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的制备及亲合纯化伴刀豆球蛋白-A

采用一步种子溶胀聚合法制备了颗粒呈单分散的交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂 ,对其环氧基的组成比进行了表征 ,并以氨基葡萄糖为配基 ,首次制备了纯化粗品伴刀豆球蛋白 A (Con A ,Ⅲ )的聚合物基质的高效亲合色谱柱。配基在树脂上的键合量为 8.2mg g ,对纯化后的Con A 的吸附量为 13.4mg g。使用该亲合色谱介质成功地从粗品Con A中快速纯化了Con A ,电泳分析显示为一个主要的谱带 ,纯度从 15 %提高到 95 %。

以单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质的亲水性排阻色谱固定相的合成及其在生物大分子分离中的应用

以单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质 ,将该树脂经化学改性后得到亲水性良好的新型尺寸排阻色谱固定相 ,其表面羟基含量高达 6 .1mmol/ g。详细评价了该改性后树脂对蛋白的质量回收率、亲水性、耐压性能及化学稳定性。用三羟甲基胺基甲烷 (Tris)缓冲溶液 ( pH =7)为流动相 ,对蛋白质混合样的分离遵循体积排阻色谱分离机理。

多孔聚(甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯)微球的改性及作为蛋白质疏水层析介质的应用

用悬浮聚合方法合成了富含环氧基团的多孔聚（甲基丙烯酸环氧丙酯-二乙烯基苯）[Poly（Glycidyl ethacrylate-Divinylbenzene），P（GMA-DVB）]微球，为了消除其对蛋白质的不可逆吸附，探索用聚乙二醇（Polyethylene lycol，PEG）对微球进行改性，制备了带有PEG配基的P（OMA-DVB）微球．实验考察了反应条件对PEG固载量的影响规律，发现最适反应温度为80℃．以牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin,BSA）和胰蛋白酶作为模型蛋白，考察了PEG改性前后P（OMA-DVB）微球对蛋白质的吸附性能．改性前P（OMA-DVB）微球有30％～40％的不可逆吸附，蛋白质回收率仅为60%～70％．改性后介质消除了不可逆吸附，对蛋白质的吸附作用表现为可逆的疏水相互作用，吸附BSA和胰蛋白酶的质量回收率和活性回收率都在97％以上．结果表明，PEG-P（GMA—DVB）微球可以作为一种新型介质进一步应用于蛋白质的吸附与分离．

亚2微米聚合物微球的合成及影响因素

采用分散聚合法合成了粒径为0．8μm的聚苯乙烯种子，再通过一步溶胀法制备了亚2μm甲基丙烯酸环氧丙酯微球。研究了溶胀倍数、稀释剂比例、聚合温度、搅拌速度以及致孔剂等因素对溶胀、聚合过程和最终产物形态、结构的影响。结果表明，在控制溶胀倍数为8～16，SDS 0．1％，PVA 0．5％、溶胀和聚合物温度分别为30～35℃以及70～74℃。聚合时间为18～24h、搅拌速度为120～200r／min的条件下可合成出粒径为1．8μm的单分散甲基丙烯酸环氧丙酯微球、分散系数为0．2。而且，无孔亚2μm聚合物微球比多孔聚合物微球具有更好的耐压性，最高耐压力可以达到28MPa。

亚氨基二乙酸键合的亲水单分散聚合物基质离子色谱填料的制备及应用

以自合成的5.0μm单分散大孔亲水交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA-EDMA)微球为基质,与亚氨基二乙酸键合,合成了亲水性阳离子色谱固定相。用3.5 mmol/L甲烷磺酸作淋洗液,在流速为1.0 m L/min下,对二乙醇胺、Na+、NH4+、K+混合样及有机胺和铵离子混合样进行分离。将其用于黄纸板中阳离子的分离测定,与原子吸收法(AAS)对照,测定结果基本一致。

单分散树脂孔径分布影响因素及其凝胶渗透色谱性能的研究

探讨了以一步种子溶胀聚合法合成单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球(PGMA/EDMA)的成孔机理,首次详细研究了交联度、小分子致孔剂、高分子致孔剂等因素对PGMA/EDMA微球孔径分布的影响,利用凝胶渗透色谱表征了其孔结构及分布.将优化合成的孔径分布范围较宽的PGMA/EDMA微球用于分离5种标准聚苯乙烯样品,均取得了较好的效果.

单分散大孔亲水弱阳离子交换填料的制备及其对鱼精蛋白的分离纯化

以自制的5.0μm单分散大孔亲水交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA/EDMA)微球为基质,对其表面进行化学改性,合成弱阳离子交换色谱填料(WCX)。详细考察了该填料对标准蛋白质的分离性能、表面亲水性能、稳定性和重现性以及流速对蛋白保留的影响。实验结果表明,该色谱填料对蛋白的分离性能、重现性及稳定性良好;在流速为3mL/min时,采用线性梯度洗脱,6min内可分离4种标准碱性蛋白质,以溶菌酶测定的该填料的动力学吸附容量为29.86mg/g。将其用于鱼精蛋白的分离纯化,经反相高效液相色谱测定纯化后鱼精蛋白的纯度为99.2%;与商品Shodex IEC SP-825强阳离子交换色谱柱比较,纯化结果几乎一样。

单分散亲水两性离子交换树脂的制备及其在生物大分子分离中的应用

采用分散聚合与溶胀聚合相结合的方法及高分子溶液致孔技术,成功地制备了粒径为5.0μm大孔和超大孔结构的单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂,并进行了结构表征.将该树脂经胺化后再与1,3-丙磺酸内酯反应,得到一种新型的两性离子交换(强阳-强阴型)高效液相色谱填料.研究了该填料对标准蛋白分离性能及流动相中有机溶剂、流速和pH值对蛋白保留的影响.实验结果表明,在流速为3mL/min时,采用线性梯度洗脱,在4.0min内可同时快速基线分离3种酸性和2种碱性蛋白.

无孔单分散亲水性中强阳离子交换树脂的制备及其在蛋白质快速分离中的应用研究

以3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂为基质,将其表面经新的化学方法改性后制备了一种新型的无孔中强阳离子交换色谱填料。详细考察了该无孔填料对标准蛋白分离性能,有机溶剂、pH、流动相盐种类和流速等对蛋白质保留的影响。实验结果表明,在流速为4 mL/min时,线性梯度时间在2.0 min内可快速分离4种标准蛋白,蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律。将其应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶,取得较好效果。

基于PGMA磁微球的纳米机械免疫传感器的片上磁分离

应用具有磁性和抗体双重靶向功能的聚甲基丙烯酸环氧丙酯磁微球,设计出新型微悬臂梁式免疫传感器,借助微平面电感线圈,实现在液相环境中,加电流时磁微球吸附,去电流时磁性微球解析并重新分布,解决传统微悬臂梁式免疫传感器的不足.着重研究片上磁分离机理,梁上微电感线圈结构,微磁场对磁微球的吸引,设计并优化出满足新型微悬臂梁式免疫传感器所需线长200μm、宽10μm、线间距厚10μm、1μm的钛金材料蛇形微平面电感线圈.通过生物磁分离实验,验证了设计及优化的结果,实现了用于生物分子分离的片上磁分离技术.

无孔单分散亲水性树脂的合成及其在生物大分子分离中的应用

建立了一条从分散聚合法制备种子到一步种子溶胀聚合法制备粒径5.0μm的无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂的新方法,对其表面用新的化学方法改性后得到一种新型的弱阳离子交换色谱填料.实验考察了流动相的流速及有机溶剂等对蛋白质保留的影响.结果表明,该填料具有良好的色谱性能,在流速为5 mL/min时4种蛋白可在3 min内达到基线分离,将其应用于鸡蛋清中溶菌酶的快速分离纯化,取得了较好的效果.

溶菌酶分子印迹聚合物的制备及其色谱评价

以单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA/EDMA)微球作为基质载体,溶菌酶为模板分子,β-环糊精和丙烯酰胺为复合单体,N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,采用表面印迹法制备了溶菌酶分子印迹聚合物;以此聚合物为固定相进行前沿色谱分析和识别性能研究.结果表明,该分子印迹聚合物对模板分子溶菌酶具有特异识别能力,基于此可以分别实现溶菌酶与牛血清白蛋白、卵白蛋白及肌红蛋白的色谱分离.

快速弱阴离子交换无孔聚合物固定相的制备及用于蛋白质的高效液相色谱分离

将粒径为3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂(PGMA/EDMA)的表面经不同的化学方法改性,制备了两种不同配基的弱阴离子交换(WAX-Ⅰ和WAX-Ⅱ)色谱填料。在同等色谱条件下,比较了两种填料对蛋白质的分离性能,发现WAX-Ⅰ型填料分离性能优于WAX-Ⅱ。详细考察了WAX-Ⅰ型弱阴离子交换色谱填料流动相pH值、流速及有机溶剂等对蛋白质保留的影响。实验结果表明,当流动相流速为3mL/min时,4种标准蛋白可在2min内基线快速分离,蛋白质的保留符合阴离子交换色谱规律。该填料可以用于生物工程产品的快速分离和纯化。

一种分离抗凝血酶Ⅲ的高效亲和色谱填料的制备及表征

以聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球 ( PGMA)为基质 ,利用还原氨化方法将肝素键合在其表面上 ,得到一种以肝素为配基的高效亲和色谱填料 ,该填料对抗凝血酶 的亲和容量为 1 .2 mg/g,对抗凝血酶 和人血清白蛋白的回收率分别为 96.9%和 94 .4 % .利用前沿色谱法测定了肝素与抗凝血酶 之间的表观解离常数为 1 .96× 1 0 - 5mol/L.

强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用

为了进一步考察流动相中盐种类、体积流量及有机溶剂等对蛋白质保留的影响,采用新的化学方法将3.0μm无孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯树脂改性为一种新型的强阳离子交换色谱填料;实验分析了该填料对标准蛋白的分离性能,有机溶剂、流动相盐种类和体积流量等对蛋白质保留的影响.实验结果表明:当体积流量为3mL/min时,在1.5min线性梯度时间内可快速分离四种标准蛋白质,且蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律.该填料的动力学吸附容量为7.13mg/mL,将其应用于快速纯化鸡蛋清中的溶菌酶和猪心中细胞色素-C,可取得较好的效果.

去甲万古霉素键合手性固定相的制备及应用

以去甲万古霉素为手性选择剂,采用4,4-二苯基甲烷异氰酸酯作为间隔臂,将其键合到氨化的单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球上,合成了去甲万古霉素手性固定相。该键合固定相在极性有机相模式下,成功地实现了五种手性药物对映体的分离,详细考察了流动相组成、酸碱添加剂用量、温度和流速等对药物对映异构的拆分影响,并初步探讨了其手性识别机理。

高亲水性强阳离子交换色谱填料的制备及其在蛋白质分析中的应用

以具有双孔结构的聚甲基丙烯酸环氧丙酯(PGMA)微球为基质,以葡萄糖进行表面亲水改性,制备了强阳离子交换色谱填料,并将其用于复杂生命体系中生物大分子的快速而高效的分离、分析与纯化。葡萄糖亲水改性增进了填料的生物相容性,提高了蛋白质样品的回收率;双孔结构及较高的比表面积赋予填料良好的柱渗透性和样品负载量。以标准蛋白质为样品,考察了该填料对生物样品的分离性能。以100 mm×4.6 mm的色谱柱分离4种蛋白质,在6 min内实现了基线分离;以溶菌酶为样品,填料的吸附容量为39.5 g/L,在蛋白质快速分离纯化分析中显示了良好的应用前景。