鸡球虫单卵囊分离技术与雏鸡感染试验

把收集到的新鲜带血鸡粪用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,在装有25 g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,置于29℃的恒温箱中2 d^3 d,得到混合种孢子化卵囊。生理盐水稀释卵囊液至每滴1个~2个卵囊,在载玻片上用自制的毛细吸管在显微镜下吸取1个卵囊于备好的40 g/L琼脂糖薄片上,确保只有1个卵囊,用手术刀切割琼脂糖薄片并包埋卵囊,即完成单卵囊分离。将包埋好的单卵囊感染雏鸡,感染率为60%~90%。

鸡艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立

以玻璃纸做材料,用毛细吸管分离单卵囊,通过显微镜"重复"鉴定法,对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)进行分离。单卵囊感染20只鸡,在感染后5 d～15 d,用饱和盐水漂浮集卵法进行检测。结果显示,有15只鸡粪便中检出卵囊,经鉴定均为所要分离的虫种(E.tenella),感染成功率为75%,准确率达100%。另外,应用改进后的玻璃纸单卵囊分离技术还成功分离到毒害、巨型、堆型、布氏、和缓和早熟艾美耳球虫的单一虫种。结果表明,改进后的单卵囊分离技术简单易行,感染方便,成功率和准确率都较高,而且所用材料易于获得,消毒方便。

肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫,提取卵囊基因组DNA。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18SrDNA和5.8SrDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序。[结果]成功分离出肠艾美尔球虫,PCR扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27个孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。

感染鸡日龄对球虫单卵囊分离的影响

选用5、8、11日龄的雏鸡进行鸡球虫单卵囊分离试验,研究不同感染日龄对鸡球虫单卵囊分离的影响。结果表明:在其他条件一致的情况下,从感染成功率、潜伏期、高峰期的出现时间及持续时间和从每只感染雏鸡收集到的球虫卵囊数量等指标进行综合判定,发现感染11日龄的雏鸡单卵囊分离成功率最高。

影响鸡球虫单卵囊分离纯化的因素分析

单卵囊分离技术是获得品种单一、基因型纯净的卵囊,以便更有效的鉴别球虫种类和建立球虫纯种体系的重要手段。论文主要从雏鸡日龄、卵囊侵袭力、分离方法和材料的选择三个方面来分析其对鸡球虫单卵囊分离纯化的影响,从而为单卵囊分离技术的改进提供指导,进一步为球虫的各项研究提供基础。

肠艾美尔球虫单卵囊分离及ITS-1序列测定(英文)

[目的]建立一种有效的鉴定球虫种类分子生物学方法。[方法]采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的艾美尔属球虫18s和5.8srDNA序列,设计特异性引物,扩增内转录间隔区1(ITS-1),PCR产物直接测序。[结果]成功地分离出肠艾美尔球虫,其卵囊扩增出434bp清晰条带,且最低能检测出27孢子化卵囊。[结论]该研究结果为球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。

日本鹌鹑艾美耳球虫单卵囊分离及雏鹑扩增研究

为获取大量纯种日本鹌鹑艾美耳球虫（E．uzura），采用饱和食盐水漂浮法收集某场鹌鹑的球虫卵囊，26℃恒温培养至孢子化后，对据形态学鉴定为E．uzura的分离株进行单卵囊分离和雏鹑扩增试验。结果显示，26℃条件下卵囊孢子化时间为14h；单卵囊感染7日龄雏鹑，其潜隐期6d，显露期8～10d；以200个卵囊感染7日龄雏鹑，其潜隐期为5d，显露期为11d。

黄艾美耳球虫单卵囊分离及PCR鉴定

为了获得纯种黄艾美耳球虫,从张家口某兔场的兔粪中分离黄艾美耳球虫孢子化卵囊,单卵囊接种无球虫兔,以饱和盐水漂浮法收集子代卵囊,利用CTAB法提取黄艾美耳球虫卵囊基因组DNA,并根据Gen Bank中发表的艾美耳属球虫保守序列设计引物,PCR扩增ITS并测序,设计特异性引物鉴定黄艾美耳球虫。结果表明:黄艾美耳球虫ITS1序列长330 bp,5.8S r DNA序列长157 bp,ITS2序列长522 bp。在黄艾美耳球虫ITS1/2序列高变区设计种特异性引物,与大型艾美耳球虫和肠艾美耳球虫无交叉反应。说明建立的鉴定黄艾美耳球虫的PCR方法灵敏、特异。

东北虎源等孢球虫在猫体内的卵囊排出规律观察

为研究猫体内的卵囊排出规律,本研究分离的东北虎源等孢球虫纯种卵囊,在猫体内多次传代后获得充足的卵囊。对猫进行人工感染30、103和104个孢子化卵囊,观察猫的卵囊排出规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数(OPG值)。通过对比,验证了潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小,反之亦然。

肠艾美尔球虫纯种分离及18SrDNA部分序列测定

采用单卵囊分离技术,分离肠艾美尔球虫。根据GenBank中发表的肠艾美尔球虫18SrDNA序列,设计一对引物,建立PCR方法对其基因片段扩增并测序、比对。结果成功分离肠艾美尔球虫,PCR扩增出清晰条带,大小为528bp,最低能检出27个孢子化卵囊。该序列测定结果与Genebank发表的肠艾美尔球虫18SrDNA比对,相似性达98.5%。

鸡柔嫩艾美耳球虫广西株的分离与鉴定

目的建立一种简单、实用的单卵囊分离方法,并对一株广西柔嫩艾美耳球虫进行分离。方法采用电泳制胶槽来制作琼脂块进行球虫单卵囊的分离,单卵囊实验感染9只1日龄雏鸡,感染后收集粪便,用饱和盐水漂浮法进行卵囊检测。纯种卵囊经口感染10只1日龄雏鸡,观测卵囊寄生部位、最短孢子化时间,以及其潜在期和排卵高峰期。结果2只雏鸡粪便中检出卵囊,单卵囊感染成功率为22%。通过对其中一株球虫的研究,根据其卵囊的形状、大小、寄生部位、潜在期、卵囊最短孢子化时间、排卵高峰期等生物特征,鉴定该株球虫为柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)。结论本研究成功建立一种单卵囊分离技术,可作为球虫单卵囊分离的常规方法。

黄艾美耳球虫纯种分离及ITS-1序列测定

为建立一种有效鉴定兔球虫的分子生物学方法,采用单卵囊分离技术,分离纯化黄艾美耳球虫。根据GenBank中发表的艾美耳属球虫18S rDNA和5.8S rDNA序列,设计特异性引物,建立PCR方法并针对黄艾美耳球虫第一内转录间隔区进行扩增,PCR产物直接测序。结果分离出黄艾美耳球虫,并扩增出包含黄艾美耳球虫第一内转录间隔区的基因条带,随后测定了该条带序列,大小为455 bp。研究结果填补了兔球虫第一内转录间隔区序列遗传资料的空白,为兔球虫虫种及虫株的准确鉴定奠定了基础。

青岛地区球虫虫株的分离及其鉴定

为获得纯种的球虫虫株,取病料镜检,经过离心,用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,培养48h后得到混合的孢子化卵囊。用玻璃纸法进行单卵囊分离,并接种雏鸡,获得两株纯种球虫虫株,试验感染率为20%,经鉴定均为柔嫩艾美耳球虫属虫株。

柔嫩艾美耳球虫的分离鉴定与致病性测定

本实验采用单卵囊分离技术分离纯化球虫,并根据其临床病理变化、潜隐期、最短孢子化时间等指标综合判定其为柔嫩艾美耳球虫。用纯化所得球虫卵囊进行致病性试验,结果表明:该柔嫩艾美耳球虫致病力较强,半数致死量为7.52×104个/只。

湘黄鸡球虫病病原学调查与鉴定

鸡球虫病是危害养鸡业的主要疾病之一,为了解湘黄鸡球虫病病原学流行情况,选择湘黄鸡饲养较集中的衡东、衡山、衡南、衡阳县以及衡阳市郊区五个县区,以地面散养的湘黄鸡为病原学调查对象。通过粪样分肠段采集,采用琼脂薄板单卵囊的分离培养和球虫单卵囊感染试验。经鉴定,结果发现湘黄鸡球虫病的病原体有堆型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫等五种球虫。鉴定中,采用4%琼脂糖块将单卵囊分离最合适,此法与其他分离方法比较,简单易行,不需要专门的分离仪器。

环颈雉艾美尔球虫(Eimerima colchici)对美国七彩山鸡致病性的研究

采用单卵囊分离技术,用30只7～10日龄无球虫美国七彩山鸡分离纯化环颈雉艾美尔球虫卵囊.75只3周龄无球虫山鸡随机分为四组,第1,2,3组每只山鸡分别经口接种9070,5.0×10~4,9.98×10~4个孢子化环颈雉艾美尔球虫卵囊,第4组为对照组.结果表明,感染组在感染后第4d 出现临床症状,第6d 出现血便,第7d 第2,3组开始出现死亡,死亡率分别为19%和40%.大体剖检病变以盲肠病变最为显著,表现为盲肠粘膜中前期出血,中后期盲肠短缩,粘膜部分脱落,肠壁变薄或增厚,肠内形成干酪样肠核。

临床医学

禽流感病毒 H_5和 H_9,亚型 RT-PCR 检测方法的建立/刘燕(吉林农业大学动物科技学院 130118),钱爱东//吉林农业大学学报.-2004,26(1).-93～96根据 H_5和 H_9亚型的 HA 基因,设计合成2对特异性引物,分别建立了 RT-PCR 检测方法,优化了反应体系及反应条件。该方法敏感性可达10^(-3),特异性好,与 NFV、IBV 和 H_5与 H_9相互间无交叉反应。利用所建立的 RT-PCR 检测了10份活禽及禽产品中存在的 H_5和 H_9亚型禽流感病毒,其检测结果与病毒的分离培养一致,比电镜和琼扩的检出率高30%,与其他 NDV、IBV 的病料无交叉反应。证明该方法具有很好的应用价值。

柔嫩艾美耳球虫安徽肥西(AHFX)株的分离与鉴定

目的分离并鉴定安徽肥西病鸡盲肠内的柔嫩艾美耳球虫。方法通过雏鸡进行单卵囊接种与增殖试验,对所获卵囊用形态学方法进行初步鉴定;运用PCR方法扩增该分离株的ITS-1基因序列,并与相关序列进行比对、构建系统进化树。结果该球虫分离株孢子化卵囊的平均大小为21.1μm×18.0μm,卵形指数为1.17,潜隐期为140 h;其ITS-1基因序列与柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)GQ856310相似性达98.2%,二者的亲缘关系非常接近。结论该球虫分离株为柔嫩艾美耳球虫(E.tenella),暂命名为柔嫩艾美耳球虫安徽肥西(AHFX)株。