人血清载脂蛋白CⅡ单向免疫扩散测定法

作者建立了人血清apoCⅡ单向免疫扩散测定法,系用纯化的人apoCⅡ制备抗血清,抗体浸胶板每孔点样5μl,25℃或37℃扩散48小时测量沉淀环直径。标准曲线工作范围为0.8～4.5mg/dl。最小检测量每孔为40ng。板内及板间变异系数分别为1.4～3.5％及1.3～3.6％。样品回收率为92.38～104.35％。使用本法测定了成都地区67例正常成人和43例高脂血症患者的血清apoCⅡ含量,分别为3.9±1.7和5.9±2.5mg/dl(M±SD)。本法简便、特异、可靠、重复性好,不需特殊仪器。

鸡血清载脂蛋白AI浓度单向免疫扩散测定法的研究

介绍一种特异、灵敏、简便的蛋鸡血清载脂蛋白AI(apoAI)浓度单向免疫扩散测定法。用磷钨酸镁反复沉淀制备得高密度脂蛋白,经纯化、B radford法蛋白定量后(3.208 mg/mL),作为新西兰白兔的免疫原及载脂蛋白AI测定的标准。本室免疫所得兔抗鸡apoAI抗血清制成免疫琼脂板,加样培养进行单向免疫扩散测定。本法的标准曲线相关性良好,可信性、重复性满意。

流感疫苗单向免疫扩散试验中抗血清制备新方法的研究

流感疫苗血凝素含量检测方法为单向免疫扩散试验,其抗血清通常由WHO参比实验室提供,通过纯化病毒、蛋白酶切获得血凝素主要抗原片段,然后再免疫动物获得抗血清。该方法制备时间较长,是制约流感疫苗研发及检测的主要因素。以RT-PCR方法获取甲型H1N1流感病毒血凝素中主要抗原片段基因,构建重组质粒并在大肠杆菌中表达,表达产物经纯化、复性后,以蛋白电泳及免疫印迹方法进行了鉴定。以纯化蛋白免疫家兔,制备了相应的抗体,初步证明可用于常规的单向免疫扩散试验。以该法可以快速获得抗血清,尤其是在大流行流感疫苗的研发中,加快疫苗研发进程。

单向免疫扩散样本的图像测量

单向免疫扩散作为早已成熟的免疫检测技术,对检测结果准确测量是实现流感疫苗生产质量把关的重要前提。为了能够准确测量单向免疫扩散样本圆形沉淀物直径,本文提出了一种基于相机图像矫正、对照分割的边缘检测以及圆检测的图像测量新方法。通过预处理将图像转换成灰度图像,降低图像噪声,并改进两步标定法对图像进行矫正,再采用基于对照分割的边缘检测提取沉淀物边缘信息,根据边缘信息进行圆拟合,得到沉淀物的直径参数。实验结果表明,本文算法对单向免疫扩散环直径的测量,运行更快速,测量结果更接近理论值。

单向免疫扩散法测定纤维连接蛋白

纤维结合蛋白(Fibronectin,Fn)是一种高分子糖蛋白,广泛存在于细胞表面、细胞间质、血浆及其它体液,具有多种生物学功能。Fn 含量变化与多种疾病相关,测定Fn 含量对很多疾病的诊断、病程与疗效监测等具有重要意义。现在国内测定 Fn 含量的方法主要有火箭电泳法、酶联免疫法、红细胞凝集法等。

血浆载脂蛋白A-1的灵敏检测法——脱脂单向免疫扩散法

我们用脱脂单向免疫扩散、不脱脂单向免疫扩散、火箭电泳法、透射比浊法对60例正常人、79例非胰岛素依赖型糖尿病患者和39例冠心病患者同时进行了血浆载脂蛋白A-1水平的测定。脱脂单向免疫扩散所测正常人群载脂蛋白A-1水平152.58±18.51mg/dl非常显著高于其它三种方法,并且脱脂后载脂蛋白A-1水平在三组人群中的差别最为显著,结果表明,脱脂单向免疫扩散检测血浆载脂蛋白A-1水平在糖尿病、冠心病方面较优越。

单向免疫扩散法测定人血清载脂蛋白B含量及临床应用

本文报道用自制低密度脂蛋白免疫家兔,制得载脂蛋白B(ApoB)抗血清,并采用单向免疫扩散法测定了83例正常人血清ApoB值为:59.2±17.9mg/dl;83例高脂血症病人ApoB值为:93.5±20.1mg/dl。两组比较有高度显著性差异(P<0.01)。本法具有标准曲线线性好,重复性强及操作简便的特点。

妊娠特异性β1糖蛋白单向免疫扩散法测定的临床应用

妊娠特异性β1糖蛋白（SP1）是由胎盘合体细胞分泌的一种特异性蛋白质,测定 SP1,含量是检查胎盘功能及判定胎儿预后的一项指标。自1987年12月至1989年12月,我们应用单向免疫扩散法对198例孕妇进行了血清 Sp1测定,其结果报告如下。

单向免疫扩散法与透射比浊法测定人血清载脂蛋白AI、B_(100)的比较

根据免疫透射比浊法的原理,我们应用 VP Super System 双波长自动生化分析仪（简称VP）测定 Apo AI、B100,并与单向免疫扩散法作了比较。同时用这两种方法测定了正常人80例和高脂血症病人75例血清 Apo AI 和 Apo B100的水平。

单向免疫扩散法测Ig标准曲线制作方法新探

单向免疫扩散法测定 Ig 是临床常规项目之一,其标准曲线制作目前临床上多用 y=a+bx、y=a+bx2或 y=10a+bx运算作图,其中 y 为 Ig 含量,x 为沉淀环直径。然而经我们实践,上述三种函数关系并不最精确地反映 Ig 含量和沉淀环直径之间的关系。我们提出新的数学模型,为临床检验和科研提供更为精确的手段。1

单向免疫扩散检测血清结核抗体

以特殊处理的牛型结核杆菌作抗原,均匀分布于琼脂糖巴比妥缓冲介质中,制成抗凝胶板,打孔加待测标本,恒温37°C扩散;抗原与相应抗体相遇,比例适当,形成特异肉眼可见的白色沉淀环(丽春红S染色呈红色环),环直径的大小与血清温型结核抗体浓度呈良好线性,r=0.93。批内CV1.6％,批间CV2.0％,重复性好。随机抽样临床各科样品822例,以本法与酶标法平行测定,阳性(强、中、弱)102例,感染率12.4％,余为阴性,两法结果完全一致。对弱阳性结果,本法较酶法更易判断。对确诊的各型结核病患者72例,阳性者61例(沉淀环直径3.5—11.mm),符合率86.1％。本法新颖,有广泛实用价值。

单向免疫扩散法测定人血清Apo AⅡ水平

我们在国内初次建立了测定人血清载脂蛋白AⅡ的单向免疫扩散法,该法具有简便、精确、重复性好的优点。批内变异4.1%,批间变异6.7%。20~59岁正常血脂的男性Apo AⅡ水平为35.5±6.4mg/dl;20~49岁正常血脂的女性Apo AⅡ水平为34.2±4.6mg/dl。Apo AⅡ水平与HDL-ch,HDL-ch正相关,而与HDL-ch无相关。

琼脂单向免疫扩散法在洗涤剂污染血痕检材中的应用

在血痕种属检验中,通常采用较为灵敏和快速的环状沉锭法。当遇有被肥皂、洗衣粉等污染的血痕检材时则往往得不到正确结果。我们采用琼脂单向免疫扩散法对常见洗涤剂污染的血痕检材进行实验,取得了满意的结果。 1 器材与试剂 (1)人血样品(医院血库提供)。 (2)抗人血红蛋白血清(华西医科大学法医系提供,效价:1∶10000)。 (3)琼脂糖,1.5％和5％的肥皂液,1.5％和5％伪洗衣粉液,1.5％和5％的餐具洗洁精液(以上液体均用自来水配制而成)。 (4)加热磁性搅拌器、冰箱、培养皿。 2

去垢剂对单向免疫扩散法测定流感病毒疫苗血凝素含量的影响

目的研究单向免疫扩散法测定流感病毒亚单位疫苗不同生产阶段中间产品的血凝素含量实验中,去垢剂对检测结果的影响,寻找最佳裂解条件。方法以不同的去垢剂浓度和不同裂解时间分别对完整病毒和亚单位疫苗样本进行处理后,利用单向免疫扩散实验测定样本的血凝素含量,并对测定结果进行比较和分析。结果亚单位疫苗的单向免疫扩散沉淀圈在去垢剂Zwittergent浓度小于0.125%时随去垢剂浓度的增加而增大,当去垢剂浓度达到0.125%后不再继续增大;而完整病毒的沉淀圈在去垢剂浓度达到1%后才不再增大。以终浓度1%的去垢剂对完整病毒和亚单位疫苗分别处理30、60、120min后进行单向免疫扩散,测定结果比较差异无统计学意义。结论以终浓度1%的去垢剂Zwittergent对完整病毒或亚单位疫苗样本裂解30min后进行单向免疫扩散测定血凝素含量,均可得到稳定准确的结果,有利于提高工作效率、缩小实验间误差、节约实验成本。

单向免疫扩散试验的安全模拟方法

单向免疫扩散试验是医学检验专业学生必须做的一个验证性实验，单向免疫扩散试验是用已知抗体测定未知量的相应抗原，使待测的抗原从局部向琼脂内自由扩散，在一定区域内形成肉眼可见的沉淀环，从而根据沉淀环的直径与面积对抗原量作出计算。本实验以单向免疫扩散的方法对待检人血清免疫球蛋白（Ig）G进行定量测定。学生在实验室做单向免疫扩散试验时要用人血清，人血清即使是健康人血清也不是十分安全，也可能有其他病毒，为了能够让学生安全地上好这个实验课，笔者采用了模拟方法，效果满意，现报告如下。

用扫描仪检测的单向免疫扩散法

成都生物制品研究所苗松等,对用扫描仪检测的单向免疫扩散法进行了试验。首先将琼脂凝胶置水浴中加热融化,在56℃～60℃条件下,加入适量羊抗人IgG血清轻轻摇均,倒板,凝固后打孔。

单向免疫扩散检测血清结核抗体试验法及临床应用

应用旧结核菌素（ＯＴ）或结素蛋白衍生物（ＰＰＯ）皮内试验，测试人体有无结核分枝菌感染，虽已得到公认，但缺乏灵敏度与特异性。此外，结核菌素皮内试验可能产生有害的全身反应与病灶反应，不可预料或难以避免［１］。单向免疫扩散检测血清结核抗体试验［２］，是根据...

单向免疫扩散测定四价流感病毒裂解疫苗中两种B型血凝素含量

目的四价流感病毒裂解疫苗在三价疫苗中新增一个谱系的B型血凝素抗原,单向免疫扩散法(singleradial immunodiffusion,SRID)是否能准确测定四价疫苗中两种谱系的B型血凝素抗原含量。方法采用江苏金迪克生物技术有限公司研制的四价流感病毒裂解疫苗,运用SRID进行测定。结果在正常检测范围内(10~40μg/ml)比较标准品抗原对照、单价样品、B1+B2单价样品的血凝素测定值差异无统计学意义(P>0.05)。在10~160μg/ml检测范围内分别以三价苗和固定浓度30μg/ml的B型血凝素为基质稀释待测的另一B型血凝素,与该B型不同稀释度的单一血凝素测定结果进行比较,以测定两种B型流感血凝素有无互相干扰。在流感疫苗血凝素检测范围10~40μg/ml之内时,检测的血凝素含量与沉淀环直径呈正比关系(决定系数R^2=0.998),而在10~160μg/ml检测范围内,三元线性回归方程拟合度最高(决定系数R^2=0.999)。结论单向免疫扩散法检测B1和B2毒株的血凝素抗原在10~40μg/ml和10~160μg/ml范围内和存在其他三种血凝素或另一B型血凝素时,均未见互相干扰。

牛初乳中免疫球蛋白的测定

以单向免疫扩散法测定了牛初乳中的Ig G。结果表明，产犊后第1次挤乳，初乳中Ig G平均为67.23 mg ／mL，之后随泌乳进行迅速下降，24 h后降到小于5 mg／mL，到第5天已降到常乳水平。

日本对虾血清三类免疫球蛋白样物质的研究

采用单向免疫扩散法 (SRID)和免疫酶斑点法 (Dot ELISA)对日本对虾 (Penaeusjaponicus)血清中类IgM ,IgG ,IgA样物质进行了较系统的研究分析。结果发现 ,虾血清中存在能与羊抗人IgM ,IgG ,IgA发生结合且能被特异性阻断试验确证的物质。文中还对12例对虾血清类IgM ,IgG ,IgA样物质的含量进行了检测。结果提示 ,虾血清中确实存在与人免疫球蛋白 (Ig)特异性抗原决定簇极为相似的物质 ,它的存在对研究虾的抗病机制具有重要意义。