雷帕霉素对异种单向混合淋巴细胞培养的免疫抑制作用(英文)

目的 :观察新型免疫抑制剂雷帕霉素 (Rapa mycin ,RPM)对异种单向混合淋巴细胞培养 (one wayXMLC)的免疫抑制作用。方法 :①无菌采集小鼠脾淋巴细胞 ,经丝裂毒素处理 ,作刺激细胞 ;②取健康成人外周血淋巴细胞(hPBL) ,作反应细胞 ;③异种单向混合淋巴细胞培养 ;④实验分对照组 (不用药 )、RPM组 ,实验组 (用药组 )又分不同药物浓度组。结果 :①小鼠脾淋巴细胞明显刺激人外周血淋巴细胞 (hPBL)增殖 ,3H TdR掺入值 (cpm)显著增高 (P <0 .0 5 ) ;CD4 、CD8、IgG、IgM细胞含量明显升高 ,有显著差异 (P <0 .0 5 )。②各实验组的cpm值下降 ,RPM的IC50 (5 0 %有效抑制浓度 )≈ 1.5nmol L。测定各实验组的CD4 ,CD8,IgG ,IgM细胞含量下降 ,药物的IC50 与上相似。结论 :①人→小鼠单向混合淋巴细胞培养 ,具有明显细胞增殖反应。②RPM对异种单向混合淋巴细胞培养具有明显的免疫抑制效果 ,其作用呈剂量依赖性。

改良单向混合淋巴细胞培养在反复自然流产诊疗中应用

为了避免现行封闭抗体检测方法的不合理性,对其进行改进,将男方刺激细胞与妇女待测血清孵育,然后分离结合了封闭抗体的刺激细胞,将经或未经封闭抗体作用的男方刺激细胞分别与女方反应细胞在25%正常AB型血清同等培养条件下培养6d.改进后方法测得正常生育组与原发性反复自然流产组封闭效率阳性率为57.1%及12.3%,均数为7.53±10.30及—55.51±13.41.改进后方法的准确度(81.7%)、灵敏度(87.8%)及特异性(57.1%)均高于改进前.在分析白细胞免疫疗法免疫效果时发现,改进后的方法更能准确反应患者体内封闭效率逐渐上升趋势.改进后的封闭效率在评价反复自然流产治疗的临床疗效时优于改进前.

露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响

目的初步探索露蜂房对淋巴细胞与胰岛混合培养系统中淋巴细胞转化的影响。方法露蜂房水提取液系利用其生药通过水提醇沉法制备获得。无菌制备大鼠淋巴细胞及猪胰岛组织悬液,并对二者进行混合培养,在37℃、5%CO2的培养箱中进行,培养过程中分别加入3种浓度(4.0、0.4及0.2g/ml)的露蜂房水提取液,即露蜂房Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ组,应用3H-TdR掺入法测定放射性核素每分钟脉冲数(cpm),观察大鼠淋巴细胞的转化情况,并设立空白组和环孢素A(CsA)组作为对照。结果3种浓度的露蜂房水提取液对大鼠淋巴细胞的转化均有明显抑制作用(P<0.001),3组抑制率分别为45.3%、29.6%和9.2%;但与CsA相比,免疫抑制作用较弱(CsA抑制率为80.7%)。结论露蜂房对淋巴细胞胰岛混合培养系统中的淋巴细胞转化有抑制作用,且随浓度增加抑制作用增强,提示露蜂房可以抑制T细胞介导的免疫功能。

FTY720对体外混合培养淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的观察FTY720对体外混合培养小鼠脾脏淋巴细胞的增殖、分化和凋亡的影响。方法将C57BL/6J小鼠与BALB/c小鼠的脾脏淋巴细胞体外混合培养5 d,培养液中加入不同浓度的FTY720。分别运用MTT法和流式细胞仪检测在不同浓度FTY720作用下,混合培养淋巴细胞的增殖状况、细胞表型和凋亡率。结果当FTY720为400 ng/mL时,体外混合培养淋巴细胞的增殖即受到明显抑制,抑制率为47.6%(P<0.05);当FTY720为3 200 ng/mL时,其抑制率达到为51.6%,呈剂量依赖性。FTY720为1 600 ng/mL时,混合培养淋巴细胞中的CD4+CD25+T细胞比例显著增加(P<0.05)。FTY720在200 ng/mL时,混合培养淋巴细胞的细胞凋亡率即显著增加(P<0.05)。结论在小鼠混合淋巴细胞培养体系中加入高浓度的FTY720,能显著抑制淋巴细胞增殖能力,增加调节性细胞的比例并促进细胞凋亡。

大黄素促进人混合培养淋巴细胞凋亡的实验研究

目的:探讨大黄素是否可通过影响淋巴细胞内活性氧的产生,促进淋巴细胞的凋亡来发挥其免疫抑制作用。方法:分别提取健康成年人外周静脉血中淋巴细胞,建立混合淋巴细胞培养(MLC)模型,给予不同浓度的大黄素,并进行不同时间点干预,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内活性氧的产生水平及淋巴细胞凋亡情况,并给予还原性谷胱甘肽清除细胞内活性氧,流式细胞技术再次观察细胞内活性氧水平及淋巴细胞凋亡情况。结果:在高、中、低浓度组,大黄素与混合培养淋巴细胞共培养24h、48h、72h后,淋巴细胞内活性氧产生水平增高,在1μmol/ml-100μmol/ml的浓度范围内,不同浓度大黄素组淋巴细胞凋亡率与对照组相比均有不同程度的升高(P<0.05),并呈现浓度和时间依赖性。结论:大黄素可能通过提高淋巴细胞内活性氧产生水平,进而促进淋巴细胞凋亡来发挥其免疫抑制作用。

体外混合淋巴细胞培养对心脏移植急性排斥反应的监测作用

目的:研究体外单向混合淋巴细胞培养作为无创的心脏移植排斥反应监测方法的可行性.方法:通过改良的单向混合淋巴细胞培养与心肌内膜活检(EMB)相对照,测定淋巴细胞活性与心肌活检病理等级的相关性.结果:改良的体外单向混合淋巴细胞培养方法与心肌内膜活检病理等级有很好的相似性.结论:改良的体外单向混合淋巴细胞培养方法可作为无创监测心脏移植排斥反应的有效手段之一.

曲古抑菌素A对小鼠混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖和IL-2表达的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)对小鼠体外混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖及IL-2表达的影响,探讨TSA对T细胞免疫功能的影响。方法采用0.16、0.8、4、20、100、500nmol/L倍比浓度TSA作用于BALB/c及C57BL小鼠混合淋巴细胞培养体系,根据不同的OD值测定12、24、48h各浓度TSA对T淋巴细胞增殖的抑制率;相同浓度梯度TSA再作用于经丝裂霉素处理过的BALB/c淋巴细胞与C57BL淋巴细胞单向混合淋巴细胞培养体系,以环磷酰胺作对照,应用流式细胞技术观察其对IL-2表达的影响。结果TSA可以抑制小鼠混合淋巴细胞培养中T淋巴细胞的增殖,这种抑制能力表现出明显的量效及时效依赖性;TSA也显著抑制经刺激激活的小鼠T淋巴细胞的IL-2的表达,并且随着TSA浓度的升高,IL-2表达逐步下降,但与CTX比较有显著性差异(P<0.01)。结论TSA能抑制混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖,减少激活T淋巴细胞IL-2的表达,降低T细胞的免疫活性,能够减弱对外来抗原刺激的免疫应答。

猪与人致敏的淋巴细胞混合培养及其细胞因子检测

目的 :探讨临床应用异种无细胞真皮基质 (Xeno ADM)的免疫反应机理。方法 :分离正常猪、正常人和接受Xeno -ADM复合移植的临床大面积烧伤患者的外周血单个核细胞 (PBMC) ,以前两种细胞为刺激细胞、后者为反应细胞 ,通过异种混合淋巴细胞培养 (Xeno -MLC)和同种异体混合淋巴细胞培养 (Allo -MLC)、3 H TdR掺入和酶联免疫吸附分析 (ELISA)方法 ,检测不同抗原对反应细胞增殖的刺激作用及其IL - 2 (IU·ml-1)、IL - 4 (IU·ml-1)和IFN - (ng·L-1)的动态变化。结果 :Xeno MLC组淋巴细胞增殖反应和培养 4d后的IL - 2、IL - 4、IFN - 的分泌水平均明显高于Allo -MLC组和空白对照组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论 :有辅助性T淋巴细胞 - 1(Th1)和Th2参与的细胞免疫和IL - 4诱导的体液免疫可能是异种移植物 (Xeno -ADM)免疫排异反应的特征 ;用预先致敏的淋巴细胞进行MLC 。

siRNA干扰ADAR1表达对小鼠混合淋巴细胞培养的影响

目的:研究靶向ADAR1基因的siRNA在小鼠双向混合淋巴细胞培养中所扮演的角色.方法:将化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA在Lipofectamine 2000介导下转染处于双向混合淋巴细胞培养试验中的小鼠淋巴细胞,观察转染组与未转染组细胞表型的变化;通过RT-PCR检测两组细胞中ADAR1 mRNA的变化;细胞计数和台盼蓝拒染法检测靶向ADAR1基因的siRNA对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价转染化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA后对小鼠淋巴细胞增殖的抑制作用.结果:在经典淋巴细胞混合培养试验中,转染靶向ADAR1基因的siRNA可以明显降低小鼠淋巴细胞内ADAR1的表达,同时ADAR1-siRNA对小鼠淋巴细胞的增殖有抑制作用.结论:在经典淋巴细胞混合培养试验中,化学合成的靶向ADAR1基因的siRNA能有效抑制ADAR1基因在小鼠淋巴细胞中的表达,并对小鼠淋巴细胞增殖有抑制作用.

胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物体外联合应用对单向淋巴细胞混合反应的作用

目的提取并鉴定胎盘间充质干细胞,检测胎盘间充质干细胞对单向淋巴细胞混合反应的免疫调节作用,并将胎盘间充质干细胞与免疫抑制药物(环孢素A或霉酚酸)联合应用,检测二者联合后对单向淋巴细胞混合反应的作用。方法组织块培养法提取胎盘间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志,II型胶原免疫组化染色及甲苯氨蓝染色检测胎盘间充质干细胞向软骨细胞分化的能力。MTT检测单独应用胎盘间充质干细胞或与环孢素A或霉酚酸联合应用后,单向淋巴细胞反应中T细胞的增殖情况。结果成功提取胎盘间充质干细胞,其表面阳性表达CD29和CD44。II型胶原及甲苯氨蓝染色均呈阳性。单独应用胎盘间充质干细胞可抑制单向淋巴细胞混合反应中T细胞的增殖。与环孢素A联合后该作用减弱,与霉酚酸联合后该作用增强。结论组织块培养法可成功提取胎盘间充质干细胞。该细胞对单向淋巴细胞混合反应有负向免疫调节作用。胎盘间充质干细胞与不同的免疫抑制药物联合对单向淋巴细胞混合反应产生的作用是有差异的。

氧化锌纳米材料对小鼠混合培养的脾淋巴细胞的影响

目的评价氧化锌(ZnO)纳米材料对不同品系小鼠脾淋巴细胞混合培养的影响。方法提取BALB/C和C57BL/6小鼠脾细胞进行混合淋巴细胞培养,通过对细胞增殖率、IL-2水平的检测及电镜观察来研究氧化锌纳米材料对混合淋巴细胞培养的影响。结果氧化锌纳米材料的加入提高了淋巴细胞增殖率及上清液IL-2水平,电镜下可见纳米材料吸附于淋巴细胞表面并促进淋巴细胞间的接触。结论氧化锌纳米材料促进混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖,增强了免疫应答的强度。

去牛血清清蛋白化对复方壳多糖组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的影响

目的探索复方壳多糖组织工程皮肤去牛血清清蛋白化的洗涤方法及对其单向混合淋巴细胞反应的影响。方法从头制备复方壳多糖组织工程皮肤,ELISA法检测不同洗涤条件下外渗液中牛血清清蛋白的浓度,然后检测在最优洗涤条件下组织工程皮肤单向混合淋巴细胞反应的强度。结果当洗涤间隔时间为3h,洗涤次数为2次时能使外渗液中牛血清清蛋白的浓度降到50ng/mL以下;按该方法洗涤后,组织工程皮肤的单向混合淋巴细胞反应强度显著降低。结论复方壳多糖组织工程皮肤以3h×2次洗涤,能够显著降低其外渗液中牛血清清蛋白的浓度及其单向混合淋巴细胞反应的强度。

硼替佐米对混合淋巴细胞培养体系细胞活性影响的研究

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对混合淋巴细胞(MLC)培养体系细胞活性、细胞凋亡率的影响。方法:体外建立单向混合淋巴细胞培养体系,分别用0、2、4、8nmol/L的硼替佐米干预培养体系,在不同的时间点收集细胞,采用CCK-8法检测细胞活性、流式细胞术检测细胞凋亡率、Western印迹法检测胞内NF-κBP65表达。结果:(1)硼替佐米可明显抑制MLC体系细胞增殖(P<0.05),对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系,8nmol/L硼替佐米作用24h后细胞活性抑制率为41.35%。(2)硼替佐米作用于细胞后细胞凋亡率增加(P<0.05),8nmol/L硼替佐米作用36h细胞凋亡率为(61.67±3.21)%。(3)硼替佐米作用后胞内NF-κBP65的表达下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能通过阻断NF-κB的活化而抑制MLC体系细胞活性,诱导细胞凋亡。

胚胎组织浸液降低无关个体混合淋巴细胞培养中的HLA基因表达

用3—4月龄的治疗性引产胎儿的肝、胸腺制成二种组织浸液,分别加入无关个体混合淋巴细胞培养(MLC)体系中,培养120小时后掺入~3H-TdR,测CPM值,计算刺激指数(SI);用经PCR生物素掺入的HLA-Ⅰ、Ⅱ类特异性探针进行细胞原位杂交,图像扫描定量。与不含胚胎组织浸液的对照组相比,胎肝、胸腺浸液组MLC的SI明显降低,混合淋巴细胞培养的细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因mRNA表达均有显著降低,胎肝浸液作用更明显。

硼替佐米对混合淋巴细胞培养体系细胞因子的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对混合淋巴细胞培养体系中细胞凋亡、细胞因子水平的影响。方法体外建立单向混合淋巴细胞培养(MLC)体系,分别用2、4、8 nmol/L的硼替佐米干预反应体系,在不同的时间点收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、ELISA法检测培养上清液中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果硼替佐米作用于细胞12、24、36 h后细胞凋亡率逐渐增加,8 nmol/L硼替佐米作用36 h细胞凋亡率为(61.67±3.21)%;硼替佐米作用24 h后上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度减小,8 nmol/L组的IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度分别为(88.27±2.76)ng/L、(57.36±2.08)ng/L、(22.19±0.88)ng/L。结论硼替佐米能诱导细胞凋亡,使混合淋巴细胞培养体系细胞分泌的Th1型细胞因子减少。

混合淋巴细胞培养技术在眼科免疫研究中的应用

混合淋巴细胞培养（MLC）是研究两个遗传型不同的个体之淋巴细胞表面的组织相容性抗原差异程度以及淋巴细胞对同种异体细胞的反应能力的技术，为研究细胞免疫的主要参数之一。MLC除为角膜移植前免疫监护的重要措施外，在角膜移植诸多免疫问题以及眼部各组织在免疫系统的特殊性等方面的研究和应用也日渐增多，本文综述MLC在角膜免疫、前房免疫赦免、前房相关性免疫偏离、脉络膜、视网膜以及眼肿瘤免疫研究中的应用。

构建体外联合培养条件下抗原诱导淋巴细胞反应的抑制模型

目的:观察在体外混合培养条件下,抗原能否诱导外周淋巴细胞反应抑制,建立体外淋巴细胞反应抑制模型。方法:实验于2003-10/2004-04在解放军第四军医大学西京医院心脏外科研究所实验室进行。取健康自愿者新鲜血液用于分离外周淋巴细胞。在体外条件下,以同种异体外周淋巴细胞分作供体和受体进行混合培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法、电镜、姬姆萨-瑞氏染色、流式细胞仪检测对照组D组:首次混合培养淋巴细胞(PMLC),即受体淋巴细胞(R)+用丝裂霉素处理过的供体淋巴细胞(DBm)混合培养72h所得,A组(PMLC+DBm)、B组(PMLC+白细胞介素2中和单抗)、C组(PMLC+DBm+白细胞介素2中和单抗)等4组淋巴细胞的活性变化、活性变化的原因及其数量的变化。结果:①4组混合培养淋巴细胞在电镜、显微镜下变化:均可见细胞质染色浓集、核固缩裂解、凋亡小体形成。②四甲基偶氮唑盐比色法检测4组细胞活性即刺激指数:B组和C组比A、D组明显减弱(3.152±0.322,1.802±0.115,4.293±0.269,3.709±0.278,P<0.05);C组细胞活性比B组也明显减弱(P<0.05)。③流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率:单向混合淋巴细胞培养后的T淋巴细胞的凋亡率Bf组和Cf组高于Df对照组和Af组(11.25±0.78)%,(31.65±1.33)%,(5.95±0.24)%,(2.15±0.04)%,P<0.01;

含白花蛇舌草血清对大鼠淋巴细胞和混合培养淋巴细胞增殖影响的实验研究

目的:研究含白花蛇舌草(Spreading Hedvotis Herb,简称SH)血清对植物血凝素(PHA)诱导大鼠脾淋巴细胞增殖、混合淋巴细胞培养(简称MLR)淋巴细胞增殖及对淋巴细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的影响。方法:大鼠20只,随机分为5组,每组4只,分为SH低剂量(4 g/kg)、中剂量(16 g/kg)、高剂量(24 g/kg)组,含环孢素A(CsA)血清组,按相应药物灌胃,空白血清组用等量生理盐水灌胃。MTT法测定PHA诱导的大鼠脾淋巴细胞和MLR淋巴细胞增殖,ELISA法测定PHA诱导淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ含量。结果:SH高剂量组可抑制PHA诱导大鼠脾淋巴细胞增殖,SH高剂量组、含CsA血清组与空白血清组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。双向MLR体系中,各剂量组含SH血清均可抑制淋巴细胞增殖,其中SH高剂量组与空白血清组比较,差异有显著性意义(P<0.05);在单向MLR体系中,各剂量组含SH血清可调节淋巴细胞增殖。SH中剂量组、SH高剂量组血清抑制脾淋巴细胞增殖,与空白血清组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。含CsA血清组血清可抑制单向、双向MLR体系中淋巴细胞增殖,与空白血清组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。SH中剂量组、SH高剂量组、含CsA血清组血清均可显著抑制大鼠脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ含量,与空白血清组比较,差异均有显著性意义(P<0.05)。结论:SH能抑制淋巴细胞和混合培养淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ有关。

口腔扁平苔藓角质形成细胞与淋巴细胞的混合培养

近年来对口腔扁平苔藓(OLP)的研究越来越多,OLP的组织病理学表明角质形成细胞和淋巴细胞与其发病有着重要关系,很多学者开始建立这两种细胞的体外培养模型,寻找OLP的发病机制,本研究就最近几年的研究状况作以简要概括,并对OLP的细胞培养模型提出一些研究设想.