毛梾ISSR-PCR反应体系的建立

以毛梾叶片为试材，通过单因素2次循环试验对毛株IYxSR反应体系进行优化，建立了毛株ISSR-PCR的最佳反应体系和扩增程序。结果表明：PCR反应体系总体积为25uL，其中10XBuffer2．5弘L，模板DNA用量50ng，7aqDNA聚合酶用量1．5U，Ag浓度2．0mmol／L，引物浓度0．6μmol／L，dNTPs浓度0．15mmol／L；扩增程序：94℃预变性5min；94℃变性50S，48．8～59．1℃退火60S，72℃延伸1．5min，38个循环；最后72℃延伸10min。在此基础上，从100条ISSR通用引物中筛选出17条多态性好、稳定性高的引物，并优化了它们的退火温度。这一优化体系的建立，为开展毛梾种质资源鉴定、遗传多样性及分子育种方面的研究提供了技术依据和券考。