制备型硅胶柱层析分离单一聚合度纤维寡糖及其测定

【目的】探索实验室低成本、规模化制备单一聚合度纤维寡糖的方法,并得到聚合度分别为2—5纯度较高的单一组分纤维寡糖。【方法】采用制备型常压硅胶柱层析(Ф22 mm×900 mm),选择干法填柱、干法上样对混酸降解法制备得到的纤维寡糖进行分离纯化。采用薄层色谱法(TLC)对分离过程进行监测,用荧光辅助糖电泳(FACE)对分离后的各单一组分进行定性检测,并用电喷雾-飞行时间质谱(ESI-TOF-MS)对各单一组分进行分子质量的确认。【结果】采用制备型常压硅胶柱层析法对于聚合度在2—5的纤维寡糖具有很好的分离效果。ESI-TOF-MS法检测本试验得到的4种单一聚合度纤维寡糖分子质量(钠离子峰)分别为365、527、689和851,分别对应纤维二糖、纤维三糖、纤维四糖和纤维五糖的分子质量。本试验一次上样300 mg纤维寡糖混合物,可分别获得28 mg纤维二糖、43 mg纤维三糖、59 mg纤维四糖和52 mg纤维五糖。荧光辅助糖电泳(FACE)能非常灵敏地定性检测纤维寡糖。【结论】制备型常压硅胶柱层析能较好地分离纤维寡糖,得到聚合度分别在2—5的单一组分纤维寡糖。

基于多组分分析的百合地黄汤古、今组方化学成分差异性研究

目的:采用多组分分析法研究百合地黄汤古代与现代临床组方化学成分差异。方法:采用蒽酮-硫酸-紫外分光光度计法在580 nm紫外光下对百合地黄汤多糖提取液进行测定。采用高效液相色谱串联电喷雾检测器(UPLC-CAD),使用Agilent Infinity Lab Poroshell 120 HILIC-Z(3.0 mm×100 mm,2.7μm)色谱柱,流动相A为0.2%氨水-乙腈,流动相B为0.2%氨水-纯水,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温为35℃,CAD检测器雾化器温度70℃,分别对百合地黄汤古代方和现代方中6个单、寡糖成分进行定量分析。采用高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q TOF MS/MS)及高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS),分析百合地黄汤古代方与现代方的差异性成分,并对9个差异性成分进行定量分析。结果:百合地黄汤多糖与6个单寡糖及9个差异性成分在各自的测定范围内线性关系良好(r>0.999),平均加样回收率在97.7%~104.9%,RSD≤3.1%。精密度、重复性、稳定性均符合要求。结果表明百合地黄汤古代方与现代方的多糖、单寡糖含量以及9个差异性成分含量均具有显著性差异(P<0.05)。结论:本实验从多种化学成分角度明确了百合地黄汤古、今组方的差异。所采用方法均准确灵敏,稳定性和重复性好,可为百合地黄汤的临床应用与高品质中药制剂的开发提供参考。