Caco-2单层细胞模型在中药化学成分吸收转运研究中的应用

Caco-2细胞来源于人体结肠癌细胞,可以参与药物的吸收、代谢、转运等过程,被看作分化的小肠上皮细胞,具有微绒毛等结构,并可分泌大量的小肠上皮细胞特有的蛋白、酶以及转运体。研究表明,Caco-2单层细胞模型可以用来探究不同条件因素对药物吸收转运的影响,对研究药物吸收机制有着重要的应用价值。

Caco-2单层细胞模型上士的宁的体外吸收机制及其与甘草苷的转运相互作用

利用人结肠癌细胞系Caco-2细胞单层模型,分别考察了转运时间、药物作用浓度、P-糖蛋白抑制剂维拉帕米、溶液pH值对士的宁表观渗透系数(Papp)和累积转运浓度(TRcum)的影响,探讨了士的宁的体外肠吸收机制及甘草苷对士的宁吸收与转运的影响。结果表明,士的宁在Caco-2细胞中的转运主要为被动转运,吸收较好。甘草苷能显著促进士的宁的吸收,且当士的宁与甘草苷的配伍比例为1∶1时,对士的宁吸收的促进作用最强。同时实验还发现,士的宁可能是P-糖蛋白的作用底物,环境pH值对士的宁的外排作用有重要影响。

黄连吴茱萸药对在Caco-2单层细胞模型中的跨膜转运研究

目的:研究黄连吴茱萸不同配比在Caco-2单层细胞模型中的跨膜转运,比较小檗碱等四种主要化学成分表观穿透系数Papp的异同。方法:复制Caco-2细胞模型,采用HPLC测定转运后药液5种化学成分含量,并计算吸收系数,考察黄连吴茱萸不同配比时小檗碱等四种化学成分在细胞模型中的吸收特征。结果:随着配比中黄连比例的增加,无论是AP-BL还是BL-AP,4种化学成分的Papp均随时间的推移呈线性增加趋势,即黄连:吴茱萸为6:1时吸收率最大,差异有显著性(P<0.01)。结论:增加黄连的配伍比例,有利于黄连和吴茱萸主要化学成份的吸收,黄连吴茱萸为6:1时各主要化学成分的吸收最多。

黄诺马苷在MDCK单层细胞模型上的转运机制分析

目的:研究黄诺马苷在马丁达比犬肾上皮(MDCK)单层细胞模型上的吸收转运特性。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法考察黄诺马苷对MDCK细胞的毒性,使用Millicell-ERS-2型细胞电阻仪检测MDCK单层细胞模型的电阻值,考察黄诺马苷的质量浓度、给药时间以及钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLTs)抑制剂和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)抑制剂对其跨膜转运的影响,采用UPLC-MS/MS测定黄诺马苷的含量,计算表观渗透系数(Papp)及外排比(ER)。结果:黄诺马苷质量浓度为5. 625~120 mg·L-1时对MDCK细胞无明显毒性作用,黄诺马苷在MDCK单层细胞模型上的转运具有时间、浓度依赖性,且Papp基本处于1×10-6~10×10-6cm·s-1。在60 min和90 min时,与空白组相比,根皮苷组中黄诺马苷在MDCK单层细胞模型上的转运量显著减少。结论:黄诺马苷在肠道中属于中等吸收的药物,其跨膜转运机制以被动转运为主,兼有主动转运存在,且SGLTs转运体可能参与介导了黄诺马苷在MDCK单层细胞模型上的转运。

马钱子生物碱类成分在MDCK-MDR1单层细胞模型中的转运机制研究

目的研究马钱子碱、士的宁在MDCK-MDR1单层细胞模型中的双向转运机制。方法 MTT法确定马钱子碱、士的宁对MDCK-MDR1单层细胞毒性范围,以MDCK-MDR1单层细胞为体外研究模型,考察转运时间、药物作用质量浓度、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米对马钱子碱、士的宁的累积吸收浓度(Ccum)和表观渗透系数(Papp)的影响。结果马钱子碱和士的宁Papp均> 1×10^-5 cm/s,Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)均<2。马钱子碱、士的宁与维拉帕米合用,显著降低了Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)值。结论马钱子碱、士的宁以被动转运为主,P-gp抑制剂维拉帕米对其吸收有明显抑制作用,马钱子碱、士的宁可能是P-gp底物。

两种阿仑膦酸钠片的崩解度和溶出度及在Caco-2细胞模型上的转运比较

目的：建立9-氯甲酸芴甲酯（FMOC）柱前衍生化高效液相色谱法测定阿仑膦酸钠片含量的方法,比较两种阿仑膦酸钠片的崩解度、溶出度和转运特性,为该药物制剂开发和临床应用提供参考。方法：采用Kromasil-C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）;以甲醇-乙腈-柠檬酸与焦磷酸钠混合液为流动相,梯度洗脱;流速为1mL·min-1;柱温为35℃;紫外检测波长为265nm。结果：阿仑膦酸钠在2-200μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9998）,回收率、日内和日间精密度RSD均小于15%。两种阿仑膦酸钠片的崩解度、溶出度均有一定的差异,而在Caco-2细胞模型的转运量没有显著的差异。结论：两种阿仑膦酸钠片的生物利用度、药代动力学可能存在差异。

7,4’-二羟基黄酮在Caco-2细胞模型中的代谢及转运

目的研究不同转运体对7,4’-二羟基黄酮(7,4’-DHF)及其代谢产物(7,4’-DHF-S)在Caco-2细胞模型中转运的影响。方法采用超高效液相色谱法测定Caco-2细胞孵育液中7,4’-DHF及7,4’-DHF-S的含量,采用液相色谱-质谱串联(LC-MS/MS)鉴定其结构。采用Caco-2细胞模型双向转运实验分别考察乳腺癌耐药蛋白(BCRP)抑制剂ko143和多药耐药相关蛋白2(MRP2)抑制剂MK571对7,4’-DHF及7,4’-DHF-S表观渗透率(PDR)的影响。结果7,4’-DHF可被Caco-2细胞代谢产生单磺酸化结合产物;7,4’-DHF的PDR为(1.43±0.11),ko143和MK571对7,4’-DHF的PDR分别为(1.59±0.04),(1.48±0.07),差异无统计学意义(P>0.05);7,4’-DHF-S的PDR为(1.60±0.06),ko143可显著降低7,4’-DHF-S的PDR(0.23±0.03)(P<0.01),MK571对7,4’-DHF-S的PDR无显著影响,为(1.51±0.04)(P>0.05)。结论 Caco-2细胞可介导7,4’-DHF的磺酸化代谢反应,7,4’-DHF-S可能是BCRP的底物。

牙本质基质蛋白1和肿瘤坏死因子-α对汉滩病毒感染的脐静脉内皮细胞的作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α和牙本质基质蛋白1对汉滩病毒感染的脐静脉内皮细胞通透性的影响,为阐明肾综合征出血热发病过程中通透性增高的机制提供实验基础。方法首先用免疫细胞化学方法检测牙本质基质蛋白1在脐静脉内皮细胞的表达情况,然后通过Transwell单层细胞模型系统检测外源性肿瘤坏死因子-α和牙本质基质蛋白1对汉滩病毒感染的血管内皮细胞通透性的影响。结果牙本质基质蛋白1可以在血管内皮细胞表达,汉滩病毒感染对牙本质基质蛋白1表达量无显著性影响,汉滩病毒感染后加入肿瘤坏死因子-α使牙本质基质蛋白1表达量显著性增加(P<0.05)。单纯汉滩病毒感染后,通透性无显著性变化(P>0.05),而感染细胞加入外源性肿瘤坏死因子-α或牙本质基质蛋白1后,内皮细胞通透性显著增加(P<0.05),两者联合作用能促进通透性进一步增加(P<0.05)。结论牙本质基质蛋白1广泛表达在血管内皮细胞,肿瘤坏死因子-α和牙本质基质蛋白1均可使汉滩病毒感染的脐静脉内皮细胞通透性显著增高,且两者存在联合作用。

黄芩药动学研究进展

黄芩来源于唇形科植物黄芩(Scutellariae baicalensisGeorgi)的干燥根,具有清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎的功效,在传统中医药及现代中药制剂中黄芩得以广泛应用。黄芩富含黄酮类化合物,其口服生物利用度较低,并且在肠道吸收过程中发生显著的首过效应。该文对近年来黄芩提取物及其主要活性组分药物动力学方面的研究进展加以综述,并讨论其未来研究中应注意的问题。

脉君安片中主要成分对氢氯噻嗪在Caco-2细胞模型中转运的影响

利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,研究了脉君安片中主要降压活性成分葛根素、钩藤碱与氢氯噻嗪配伍使用前后对氢氯噻嗪体外吸收与转运的影响,探讨了氢氯噻嗪与葛根素、钩藤碱配伍使用时在吸收阶段的药物相互作用。结果表明,氢氯噻嗪在Caco-2单层细胞模型中的吸收可能存在由载体介导的主动转运,葛根素能减少P-糖蛋白(P-gp),对氢氯噻嗪的外排,钩藤碱对氢氯噻嗪的吸收转运无显著影响,葛根素、钩藤碱与氢氯噻嗪合用能增强氢氯噻嗪的吸收。同时,实验还发现氢氯噻嗪可能是P-gp的作用底物,且pH值对氢氯噻嗪的转运有重要影响,在弱酸性条件下,氢氯噻嗪的吸收比在中性条件下好。

纳米乳液提高氧化白藜芦醇口服生物利用率及透皮吸收效率

本研究制备纳米乳液改善氧化白藜芦醇在水溶液中的溶解性能,通过体外药物溶出实验、脂解实验、Caco-2跨膜细胞转运实验、透皮吸收实验评价了纳米乳液对氧化白藜芦醇生物利用率的改善效果。结果表明:氧化白藜芦醇纳米乳液和氧化白藜芦醇化合物自身的生物利用率在进食状态下分别为61.22%和23.47%,禁食状态下为56.12%和22.45%。纳米乳液使氧化白藜芦醇在小肠上皮细胞的扩散速度由中速上升至快速,扩散形式为被动渗透,表观渗透系数Papp(AP-BL)值1.69×10^-5 cm/sec,Papp(BL-AP)值8.94×10^-6cm/sec,ER=Rpapp(AP-BL)/(BL-AP)=1.89。6 h时氧化白藜芦醇纳米乳液和化合物的经皮扩散透过量分别为51.76和5.73μg/cm^2 skin。结论:氧化白藜芦醇纳米乳液比化合物本身的生物利用率提升了3倍,显著提升氧化白藜芦醇在小肠上皮细胞内的吸收转运量(提升2~4倍)和透皮吸收效率(p<0.05),本实验为氧化白藜芦醇的应用奠定研究基础,为其有效地发挥生物活性提供理论依据。

中药质量评价技术的国内外研究现状及分析

目的:分析中药质量评价研究现状,探讨中药质量评价的方法发展趋势。方法:查阅近年有关中药质量评价相关文献,通过分析、归纳与综合进行评述。结果:目前中药质量控制主流仍然是以化学成分为中心的质量控制,但由于其在中药质量控制中所显示出的局限性,多种替代方法应运而生,并均表现出一定的优势。结论:对具多成分特点的中药,从生物活性特征出发建立适合中药质量控制的新方法不仅必要,而且完全可行。

6种常用抗寄生虫药在鸡的生物药剂学分类研究

[目的]本研究拟建立基于靶动物生理参数的禽用药物溶解度和渗透性测定方法,并依据生物药剂学分类系统(Biopharmaceutics Classification System,BCS)对6种兽医临床常用抗寄生虫药(吡喹酮、阿苯达唑、盐酸左旋咪唑、盐酸氨丙啉、地克珠利、常山酮)进行分类。[方法]1日龄AA内鸡90只饲养至8周龄,分别于1、4和8周龄时测定鸡体温、胃肠液体积和胃肠pH值,通过计算剂量数(Do)确定6种药物的生理溶解度及分类;以酒石酸美托洛尔为高低渗透性参考标准,结合单层细胞模型和鸡小肠原位灌流试验测定的药物表观渗透系数(Papp)和有效渗透系数(Peff),确定药物的渗透性并进行分类。[结果]将鸡常用药物溶解度的测定条件规定为41℃及pH1~8的水性缓冲溶液,高溶解度的定义为药物单次给药的最高剂量能完全溶解于21 mL(进食)或7 mL(禁食)的水性缓冲溶液中。Do计算结果表明盐酸左旋咪唑、盐酸氨丙啉和常山酮在鸡进食及禁食条件下均为高溶解度药物,吡喹酮、阿苯达唑和地克珠利则为低溶解度药物。单层细胞模型法测得吡喹酮、阿苯达唑和盐酸左旋咪唑的Papp分别为12.92×10^-6、15.12×10^-6和14.64×10^-6 cm·s^-1,均高于酒石酸美托洛尔(6.58×10^-6 cm·s^-1),故为高渗透性药物。鸡小肠原位灌流试验结果表明,6种药物在鸡体内的Peff分别为0.76×10^-4、1.35×10^-4、0.93×10^-4、0.05×10^-4、0.66×10^-4和0.31×10^-4 cm·s^-1,其中吡喹酮、阿苯达唑和盐酸左旋咪唑的Peff均高于酒石酸美托洛尔(0.68×10^-4 cm·s^-1),为高渗透性药物,与单层细胞模型法测定的结果相一致。综合6种药物的溶解度和渗透性测定结果,确定6种药物的BCS分类为:盐酸左旋咪唑为Ⅰ类药物;吡喹酮和阿苯达唑为Ⅱ类药物;盐酸氨丙啉和常山酮为Ⅲ类药物;地克珠利为Ⅳ类药物。[结论]初步确定了鸡常用药物生理溶解度测定条件以及渗透性测定方法,完成了6种常用抗寄生虫药在鸡的BCS分类,为鸡常用药物BCS框架的建立奠定了基础。

马钱子碱体外吸收机制及其与甘草苷的转运相互作用研究

目的:研究马钱子碱在Caco-2单层细胞模型中的吸收与转运情况,以及与甘草苷合用对马钱子碱吸收与转运的影响。方法:以Caco-2单层细胞为体外研究模型,考察转运时间、药物作用浓度、P-糖蛋白抑制剂维拉帕米、介质pH值对马钱子碱单用及与甘草苷合用时,马钱子碱的累积吸收浓度(TRcum)和表观渗透系数(Papp)的影响。结果:马钱子碱单用时,其Papp值均>10-6cm/s,PappB→A/PappA→B均<1.5。马钱子碱与甘草苷合用,明显升高了PappB→A/PappA→B值;马钱子碱与维拉帕米合用,显著降低了PappB→A/PappA→B值。介质pH6.0时的PappA→B值显著<介质pH7.4时PappA→B值。结论:马钱子碱以被动转运为主,P-gp及甘草苷对其吸收有明显抑制作用,介质pH值对其吸收也有重要影响。

利巴韦林肠道渗透性的研究

目的研究抗病毒药物利巴韦林的肠道渗透性。方法采用外翻肠囊法和Caco-2单层细胞模型,收集利巴韦林给药后不同时间点的肠囊液及Transwell小池基底端的接收液,用高效液相色谱仪进行检测,计算药物的表观渗透系数(Papp);并以高渗透性药物酒石酸美托洛尔为模型药物,用相同的方法测定其渗透性,以此为参照,对利巴韦林的渗透性进行分析。结果外翻肠囊实验结果显示:利巴韦林的药物浓度对其Papp无影响,为被动转运,且药物的吸收无明显的肠段特异性,利巴韦林在肠道的Papp低于酒石酸美托洛尔。Caco-2单层细胞模型实验结果显示:利巴韦林的Papp值也低于酒石酸美托洛尔。结论采用外翻肠囊法和Caco-2单层细胞模型测得利巴韦林的肠道渗透性低于酒石酸美托洛尔。