应用单引物PCR指纹技术分析Vc-獭兔的分子遗传结构

采用 1条小卫星引物 M13( 5′GAGGGTGGCGGTTCT3′)和 2条微卫星引物 ( GTG) 5、( GACA) 4,对 Vc- 系、Vc- 系獭兔、日本大耳白兔 ( JWR)和青紫蓝 ( QZL) 4个品系各 8只 ,总计 32个个体的遗传结构进行了 DNA指纹分析。结果 ,3条引物的扩增产物都呈现良好的多态性和稳定性 ;对每个品系混合 DNA池进行分析 ,计算出了 4个品系间及 32个个体间的共有带率及遗传距离指数 ,通过聚类分析 ,得出各品系间和个体间欧式遗传距离 ,并绘制出 4个品系间及各品系 32个个体间的亲缘关系树状聚类图 ,从而初步建立了 4个品系兔的

中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅲ.多重PCR技术在玉米SSR引物扩增中的应用

根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有1个扩增正常,这些筛选出的正常扩增的组合可应用于今后玉米DNA指纹库构建研究中。研究表明,应用与单一PCR完全相同的反应条件,大部分能够获得正常扩增的多重PCR组合,在此基础上提出了简化的多重PCR优化程序。

乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化

目的建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ss DNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率。方法构建长90 bp（含52 bp随机序列）寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成ds DNA文库,再以ds DNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ss DNA文库,并对二者进行比较。通过改变模板、聚合酶、d NTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件。结果乳液PCR能高效扩增出ds DNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ss DNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15～35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR。在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大。结论乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化（SELEX）技术筛选效率。

mRNA差异显示技术的研究进展

针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷,文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方面进行了综述。1采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物,可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T7启动子序列,在随机引物前加上一段M13重复序列,可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。2针对放射性同位素检测法的缺点,文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。3保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度,可优化PCR参数。4用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性,目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。

花椰菜自交不亲和性的分子标记研究

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter简单重复序列(ISSR)等分子标记技术,分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析.采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增,结果表明,扩增片段分子量在0.3～5kb之间,指纹图谱的稳定性和重复性较好.经过3次以上重复发现,ISSR4引物扩增图谱中,自交亲和系比不亲和系多扩增出3800bp片段;ISSR6引物扩增图谱中,除第3组外,不亲和系比亲和系多扩增出1100bp片段.结果表明,花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异,扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关,并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记.初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景.