甜（辣）椒几种主要病害的单抗、多抗性接种鉴定技术

甜(辣)椒炭疽病是由黑刺盘孢菌(Colletotrichum nigrum ),丛刺盘孢菌(Vermicularia capsici ),盘长孢菌(Gloeoporium piperatum )三种病原菌侵染所引起的病害,它与甜(辣)椒病毒病(以TMV、CMV为主)和疫病(Phytophthora capsici )是甜(辣)椒生产中的三种主要病害.随着甜(辣)椒生产的发展,这三种病害的危害也在加剧,只有培育具复合抗性的优良品种,才能从根本上防治它们.为此本中心课题组于"九五"期间开展了甜(辣)椒病毒病、疫病、炭疽病的苗期人工复合接种抗病性鉴定技术研究,为多抗性育种研究提供了简便的鉴定方法和可利用的抗源育种材料.

降钙素原单克隆抗体的制备及鉴定应用

目的表达和纯化降钙素原(PCT)基因的融合蛋白,制备PCT融合蛋白的鼠源性单克隆抗体。方法根据GenBank数据库中降钙素原氨基酸序列设计引物,从TT细胞中扩增出降钙素原的全长片段,将其克隆至pEASYE1原核表达载体,构建重组表达质粒pEASY-E1-PCT;利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞转化阳性克隆质粒中,以IPTG作为诱导剂诱导表达融合蛋白,通过His镍离子亲和层析纯化目的蛋白,纯化的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并纯化,ELISA法检测抗体效价及交叉鉴定,制备的单抗与市售的降钙素原检测试剂盒进行对比。结果成功构建了pEASY-E1-PCT原核表达载体,获得2株可以稳定分泌特的单抗,经鉴定这两株抗体效价高、特异性好,与市售检测试剂盒检测结果一致。结论成功构建了原核表达载体pEASY-E1-PCT,获得了高纯度降钙素原PCT蛋白,制备并获得了2株特异的单克隆抗体,制备单抗与商品试剂盒对血清样本检测结果基本一致,为进一步研究降钙素原的生物学功能及试剂盒开发提供实验基础。