小细胞肺癌2F7单抗ScFv的高效表达及复性研究

目的在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv。方法利用:PCR方法将2F7单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一人工设计的柔性连接肽(Linker)连接,再将单链抗体基因重组到原核表达载体pQE31中,构建单链抗体高效表达载体pQE-2F7-ScFv。将pQE-2F7-ScFv质粒转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和稀释复性。结果 获得了2F7单链抗体的高效表达,表达蛋白大小约27.4kD,以包涵体形式存在。包涵体蛋白在经过变性、纯化和稀释复性后,获得了有功能的单链抗体。结论 成功地构建和表达了小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体,并对其进行了纯化和复性,将进一步促进2F7单抗小分子抗体的应用。

肺癌外周血细胞角蛋白联合2F7/S5A单抗检测及其临床应用

目的 应用流式细胞仪对肺癌外周血中的细胞角蛋白及 2F7/S5A单抗检测阳性细胞进行定量分析 ,探讨临床应用的可行性。方法 取外周血 5ml ,经Ficoll密度、梯度离心获取单个核细胞 ,CD45、细胞角蛋白 (CK)及肺癌单克隆抗体 ( 2F7/S5A)标记 ,应用流式细胞仪检测CD45 - CK+2F7/S5A+细胞 ,计数单位 (升 )血中的CD45 - CK+2F7/S5A+细胞含量。结果 共 15 1例进入研究 ,其中健康对照 2 0例 ,肺癌 116例 ,肺部良性疾病 15例。正常外周血单核细胞的表型为CD45 +CK- 2F7/S5A- ,而小细胞肺癌和非小细胞肺癌标记的表型均为CD45 - CK+2F7/S5A+。 2 0例健康对照均为阴性 ;15例良性肺部疾病中 1例为阳性 ;116例肺癌患者 39例为阳性 ,检测敏感性为 33.6 2 % ,特异性 93.33% ,阳性预测值 97.5 0 % ,阴性预测值 15 .38% ,检测阳性细胞含量的平均数为 0 .12× 10 6/L。结论 应用流式细胞仪检测肺癌患者外周血中CD45 - CK+2F7/S5A+细胞具有较高的特异性和阳性预测值 ,能定量反应肺癌患者外周血中的微量癌细胞 ,对肺癌的临床诊断及治疗具有一定的应用价值。