杏鲍菇单核体菌株及其杂交后代筛选和鉴定

通过对杏鲍菇单核菌丝显微观察、拮抗、ISSR分子标记分析,研究单核体菌株的合理选配及杂种优势。结果显示,2个亲本的8个不同交配类型可以分为两类,一类为亲本ZAASPe003的单核体菌株T1、T2、T3、T4,另一类为亲本ZAASPe007的单核体菌株T5、T6、T7、T8。通过对8个交配类型单核体单×单杂交,经镜检后获得12个杂交组合。通过亲本菌株及其杂交后代菌丝体生长速度与生长势比较,发现杂交后代菌丝体T2T6菌株平均生长速度最快,达到0.443cm/d;应用ISSR分子标记技术,其中7个引物能扩增出条带清晰且具多态性的带谱,共扩增单核体DNA片段61条,杂种双核体DNA片段71条。根据ISSR分子标记分析比较亲本和杂交新组合图谱,发现杂交新组合图谱出现"互补型条带"。

农杆菌介导香菇菌丝遗传转化体系的研究

香菇Lentinula edodes是世界第二大食药用真菌，随着其全基因组测序的完成，功能基因组学研究也逐渐展开，建立稳定的香菇转化体系是目前的研究热点。本文将探索以农杆菌为介导的遗传转化体系在香菇中进行随机插入突变的转化效率以及稳定性。构建的质粒pYN6982以潮霉素抗性基因hyg作为筛选标记基因，以增强型荧光蛋白基因egfp作为报告基因，以农杆菌EHA105和LBA4404为介导，同时转化了孢子单核体、原生质体单核体和双核体菌株。结果表明采用小米粒培养基进行菌丝培养和转化，经潮霉素抗性筛选，以及5代传代后，对转化子中的hyg和egfp基因进行PCR扩增和测序，验证了转化子的遗传稳定性。经过荧光显微观察表明，EGFP在转化子中可稳定表达。本研究探索出一种采用小米粒培养基培养菌丝并进行转化的新方法，建立了稳定的农杆菌介导的香菇遗传转化体系，为进一步开展香菇的基因功能研究奠定了良好的基础。

褐腐菌Postia placenta SB-12菌株农杆菌介导的转化系统构建

将褐腐菌Postia placenta单核体菌株SB-12的菌丝与带有双元载体的两种农杆菌菌株LBA4404和EHA105共培养,并评估双元载体上驱动抗性基因表达的不同启动子的影响,完成了转化体系的构建和优化.结果表明:两种共培养方法中,用6 d菌龄的菌丝形成的菌丝垫能够被农杆菌有效转化获得转化子.无论采用哪种双元载体,EHA105菌株都比LBA4404更有效地转化菌丝体.用来自受体菌三磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子获得了比其他两种启动子(CaMV35S和trpC)更高的转化效率.这是国际上首次报道该菌株转化体系的构建,为对该菌株进行遗传操作打下了基础.