葛根素对急性冠脉综合征患者体外单核源巨噬细胞MMP-9及TF的影响

目的:探讨葛根素(Pur)对单核源巨噬细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织因子(TF)的影响。方法:密度梯度离心法分离12例急性冠脉综合征患者的单核细胞,佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,Pur(0.1g/L、1.0g/L、2.0g/L)及Hanks液(对照组)孵育48h后,ELISA法测定各组细胞上清液的MMP-9、TF含量,酶谱法测定MMP-9活性,比色法测定TF活性。结果:Pur干预后MMP-9、TF含量及活性均较干预前(对照组)有不同程度的下降。结论:Pur能抑制单核巨噬细胞MMP-9、TF的表达,降低其活性,在一定程度上具有稳定斑块、改善易损血液的作用。

体外冠心病单核源巨噬细胞分泌的基质金属蛋白酶-9、组织因子的临床意义及葛根素的干预作用

目的体外培养冠心病患者的单核源巨噬细胞,探讨其分泌的基质金属蛋白酶-9(matrix metal-loproteinases-9,MMP-9)、组织因子(tissue factor,TF)的临床意义及葛根素(puerarin,Pur)的干预作用。方法入选40例患者中,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)12例,不稳定性心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)16例,稳定性心绞痛(stable angina pectoris,SAP)12例。冠脉造影正常者8名,均用佛波脂将提取的单核细胞诱导分化为巨噬细胞,测定上清液中MMP-9、TF的含量,并分析其与年龄、冠心病危险因素、冠脉病变评分的关系。随机留取12例急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者的单核源巨噬细胞,观察不同浓度的Pur对MMP-9、TF含量及活性的干预作用。结果AMI、UAP患者MMP-9、TF的含量明显高于SAP患者和正常者(P<0.01),且MMP-9、TF含量与年龄、冠脉病变评分、危险因素无相关性;12例ACS患者Pur干预后MMP-9、TF含量及活性均较对照组有明显下降,且有浓度依赖性。结论冠心病患者单核源巨噬细胞体外分泌MMP-9、TF的水平可作为ACS病情评估的指标。Pur可抑制单核巨噬细胞MMP-9、TF的表达及其活性,在一定程度上具有稳定斑块、改善易损血液的作用。

罗格列酮对急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ在调节急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1中的作用。方法用不同浓度罗格列酮干预急性冠状动脉综合征患者和对照者单核细胞源性巨噬细胞,然后测定各组上清液中基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度及单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。结果干预后,急性冠状动脉综合征组及对照组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达上调,表达强度与罗格列酮浓度呈正变关系;基质金属蛋白酶9表达下调,在急性冠状动脉综合征组其下调程度与罗格列酮浓度呈反变关系;组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达无明显变化。结论罗格列酮干预可上调单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达,下调基质金属蛋白酶9表达,在急性冠状动脉综合征组尤其明显,对组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达无明显影响;可能存在稳定动脉粥样斑块的作用。

血管紧张素-(1～7)对单核/巨噬细胞基质金属蛋白酶-9与CD40/CD40L的抑制作用

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种严重威胁人类身体健康的常见病、多发病，是冠心病的主要原因。越来越多的研究提示AS是一个血管受损伤后的炎症反应过程，血管壁的慢性炎症是AS的特征。基质金属蛋白酶（MMPs）是一种依赖Zn^2＋和Ca^2＋的酶家族，能特异性地与细胞外基质各成分相结合，并降解胞外基质。近年来的研究发现．不稳定斑块，

支原体巨噬细胞活化脂肽-2诱导人单核细胞分泌MMP-9

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对人单核细胞分泌基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法体外培养人单核细胞系THP-1,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞12-18 h,采用实施定量PCR检测MMP-9 m RNA的表达,荧光共振能量转移（FRET）检测MMP-9的酶活性变化,ELISA检测培养上清中MMP-9的含量。结果 THP-1细胞未刺激时,MMP-9的m RNA表达量、酶活性以及分泌水平极低。当给予0.1-5.0μg/mL MALP-2作用18 h后,MMP-9的分泌水平显著增高,细胞培养上清液中MMP-9的酶活性也明显增强。此外,5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞6 h后即可诱导MMP-9 m RNA表达,16 h后达到峰值。结论 MALP-2可诱导人单核细胞表达MMP-9,这可能是支原体感染早期重要的致病因素。

肾炎患者尿中sC5b-9水平及CD16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

目的 :探讨肾炎患者补体激活时尿中活化单核巨噬细胞 (CD16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (MCP)、促衰变因子 (DAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 134例肾小球肾炎患者尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定尿中可溶性C5b 9(sC5b 9)水平。结果 :MC病人尿中sC5b 9水平及CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人尿中sC5b 9水平、CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平均显著高于正常组 (P <0 0 1) ,且MCP、DAF、HRF 2 0表达水平与sC5b 9水平呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :肾小球肾炎补体激活时尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护浸润肾组织的CD16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,CD16 + Mo MΦ产生促炎作用 ,参与肾小球肾炎的发病及发展。

冠心病患者单核源巨噬细胞体外分泌的基质金属蛋白酶-9、组织因子临床意义的探讨

目的探讨单核源巨噬细胞分泌的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织因子(TF)在冠心病中的临床意义。方法密度梯度离心法提取12名急性心肌梗死(AM I)、16名不稳定心绞痛(UAP)、12名稳定型心绞痛(SAP)患者和8名冠脉正常者(Norm)的单核细胞,用佛波酯诱导其分化为巨噬细胞,ELISA法测定单核源巨噬细胞上清液MMP-9、TF含量。结果AM I、UAP组单核源巨噬细胞体外分泌MMP-9、TF的含量明显高于SAP、Norm组(P<0.05和<0.01),但AM I与UAP组间、SAP与Norm组间均无统计学差异,且MMP-9、TF含量与年龄、冠脉病变积分无统计学相关,在不同冠心病危险因素组间(0、1-2、3-4、4个以上危险因素)亦无统计学差异。结论单核源巨噬细胞体外分泌MMP-9、TF可作为急性冠脉综合征(ACS)病情评估的参考指标。

siRNA对人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的抑制

目的:筛选特异性抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的siRNA(small interference RNA)序列,在分子水平上初步讨论其在HIV治疗方面的前景。方法:在基因库中寻找TLR2基因的mRNA序列,针对TLR2基因设计并合成3条siRNA,阳性对照为人类看家基因GAPDH siRNA,阴性对照为6-羧基荧光素标记的siRNA(NC-FAM)。采集健康人新鲜外周血,分离单个核细胞,再经贴壁法培养纯化为人-单核巨噬细胞。采用阳离子脂质体试剂Lipofectamine 2000介导转染培养的人-单核巨噬细胞。用q-PCR法测定干扰后单核巨噬细胞的TLR2 mRNA的表达,Western blot法测定干扰后TLR2蛋白表达。结果:转染72 h后,阳性对照组GAPDH mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.05)。siRNAs组TLR2 mRNA表达水平整体有显著性差异(F=41.957,P<0.001),与阴性对照组比较,TLR2 siRNA各组的TLR2 mRNA相对表达水平均明显降低(P<0.05),抑制率分别为46%、43%、43%。WB结果显示,TLR2 siRNA各组的TLR2蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:本研究设计的siRNA能够有效抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因的表达,从分子免疫学角度出发,表明通过阻断siRNA介导的TLR2信号传导通路能够为HIV治疗提供新思路。

单核/巨噬细胞上调表达S100A8/A9在脓毒症中的作用研究

目的研究脓毒症中单核/巨噬细胞S100A8/A9表达水平的变化,初步探讨其与血清促炎细胞因子和炎症损伤的关系,为临床免疫调控提供理论依据。方法收集2012年1月至2012年12月在本院ICU病房治疗的21例脓毒症患者外周血标本,其中男12例,女9例。选择16例正常人外周血作为对照。采用流式细胞术检测各组外周血单核细胞上S100A8/A9的表达水平。结果流式细胞术分析发现,脓毒症患者外周血单核细胞上S100A8/A9的表达水平明显高于正常人,差异有统计学意义(P<0.001)。结论S100A8/A9在单核/巨噬细胞的上调表达可能是启动脓毒症早期炎症反应的关键步骤。

基于TLR3/TLR9介导巨噬细胞自噬/极化效应探讨血管软化丸抗AS的作用机制

目的:观察血管软化丸通过对TLR3的影响,调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而对巨噬细胞自噬产生影响,以及观察血管软化丸通过对TLR9的影响,调控下游NF-κB和IRF7信号途径,影响巨噬细胞M2/M1平衡,探讨血管软化丸抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制。方法:体外实验,将巨噬细胞随机分为6组,即对照组(空白血清),血管软化丸高剂量组、血管软化丸中剂量组、血管软化丸低剂量组、ODN组(TLR9激动剂:ODN1826)、poly组(TLR3激动剂:poly(I:C))。体内实验,将ApoE^(-/-)小鼠分为6组,对照组(生理盐水,灌胃)血管软化丸高剂量组(浓度为3.456 g/mL),血管软化丸中剂量组(浓度为1.728 g/mL)、血管软化丸低剂量组(浓度为0.864 g/mL)、ODN组(ODN1826,腹腔注射)、poly组(poly(I:C),腹腔注射),腹腔注射每周两次,灌胃每日1次,连续给药8周后取材进行检测。观察血管软化丸含药血清和TLR9对巨噬细胞的极化状态的影响,对动脉斑块iNOS和CD206的表达的影响,对巨噬细胞(M1/M2)平衡相关炎症因子的影响和对巨噬细胞(M1/M2)平衡相关炎症因子的影响;采用ELISA法检测细胞分泌炎性因子相关水平,采用Western blot检测和RT-PCR法检测血管软化丸对主动脉斑块TLR9和TLR3及其下游信号分子表达的影响,观测指标:采用Western blot检测各组细胞TLR9的蛋白含量,及主动脉TLR9及其下游的分子MyD88,p-NF-κB和IRF7的蛋白含量;采用流式细胞术和免疫化学荧光检测各组细胞M1型和M2型的比例;采用RT-PCR和ELISA法检测各组细胞TNF-α的表达;采用RT-PCR和免疫荧光检测RAW264.7细胞和动脉斑块的M1型和M2型巨噬细胞的相关标志性因子和炎症因子;病理学检测验证血管软化丸抗动脉粥样硬化的疗效。结果:血管软化丸含药血清可以诱导巨噬细胞高表达M2型巨噬细胞的标志CD206;中药组斑块中iNOS的荧光密度表现为低表达(P<0.05),而斑块中CD206的荧光密度则表现为高表达(P<0.05);血管软化丸含药血清调低IL-1β、iNOS、Ciita表达(P<0.05),调高Ym1、Fizz1表达水平(P<0.05);能够改善细胞分泌炎性因子IFN-γ和IL-10相关水平(P<0.05);血管软化丸含药血清调低TLR9蛋白和TLR3蛋白表达水平(P<0.05);血管软化丸含药血清调低TLR9下游信号MyD88、p-NF-κB、IRF7 mRNA表达水平(P<0.05);血管软化丸含药血清调低TLR3下游信号LC3Ⅱ、Beclin、Akt、mTOR mRNA表达水平(P<0.05)。结论:血管软化丸通过影响TLR9,调控下游NF-κB和IRF7信号途径,进而调节巨噬细胞M2/M1平衡;通过调控TLR3影响PI3K/Akt/mTOR信号通路,进而调节巨噬细胞自噬,抑制动脉粥样硬化的发生发展。

NDV或H9N2 AIV感染对坦布苏病毒继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响

为研究新城疫病毒(NDV)或H9N2禽流感病毒(AIV)对坦布苏病毒(TMUV)继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制,试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数,分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9N2 AIV感染12,24 h对HD11细胞中活性氧(ROS)和Ⅰ型干扰素(IFN)含量的影响;通过实时荧光定量PCR方法分别检测PMA、外源Ⅰ型IFN与细胞共孵育后,感染TMUV 12,24小时时ROS和24小时时Ⅰ型IFN对TMUV基因组在细胞中复制的影响。结果表明:感染12,24小时时,在鸭单核-巨噬细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01);感染12,24小时,H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01)。在HD11细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01);H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01)。感染12,24小时时,NDV和H9N2 AIV均可极显著提高HD11细胞中ROS的含量(P<0.01)。感染24小时时,NDV可显著提高IFN-α的含量(P<0.05),感染12,24小时时,NDV可极显著提高IFN-β的含量(P<0.01);H9N2 AIV可在感染12,24小时时极显著提高IFN-β的含量(P<0.01)。ROS可在感染TMUV 12,24小时时极显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.01),Ⅰ型IFN可在感染TMUV 24小时时显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.05)。说明可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;在鸭单核-巨噬细胞中,NDV或H9N2 AIV感染均可以有效抑制TMUV基因组的复制,其作用可能是通过提高ROS和Ⅰ型IFN含量实现的。

阿托伐他汀对THP-1源性巨噬细胞CD40及MMP-9的抑制作用

目的观察他汀类药物对人单核/巨噬细胞(THP-1细胞)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达是否存在抑制作用及其作用是否与CD40-CD40L信号通路有关,探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化机制。方法先加入不同浓度的阿托伐他汀(1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L)作用1h,再向培养的THP-1细胞中加入氧化型低密度脂蛋白(80mg/L)共同孵育24h,分别运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CD40及MMP-9mRNA,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定培养基的MMP-9浓度。结果阿托伐他汀抑制THP-1细胞CD40和MMP-9mRNA的表达,同时抑制MMP-9蛋白的表达(P<0.05),并呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀能抑制THP-1细胞CD40的表达以及MMP-9的表达和分泌,这种作用可能是他汀类药物减轻动脉粥样斑块炎症,防止斑块破裂的机制之一。

小鼠骨髓和腹膜腔来源巨噬细胞的功能差异

目的研究骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞的功能差异,为免疫学研究和免疫调节药物评价中巨噬细胞的选择提供依据。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓单核细胞分化为巨噬细胞,利用巯基乙酸盐培养基诱导腹膜炎获得腹膜腔巨噬细胞,两种巨噬细胞在分别经过酵母多糖(zymosan)、脂多糖(LPS)、雷西莫特(R848)和非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡聚体(CpG)四种Toll样受体(TLR)配体诱导后,实时荧光定量PCR测定巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA检测巨噬细胞培养上清液TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1含量,流式细胞术分析细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达。结果两种巨噬细胞在经过不同TLR配体诱导后,炎症因子和趋化因子的mRNA表达水平均有不同程度的增加,腹膜腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1分泌水平以及表面CD86和MHCⅡ表达显著高于骨髓来源巨噬细胞。结论骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞均表达炎症因子、趋化因子、共刺激分子和MHCⅡ,腹膜腔巨噬细胞具有更加完整的巨噬细胞功能,在免疫学研究和免疫调节药物评价中可以优选腹膜腔巨噬细胞。

棕榈酸对绵羊单核巨噬细胞炎性因子和氧化应激水平的影响

棕榈酸(Palmitic acid,PA)是一种典型长链饱和脂肪酸,具有一定脂毒性,可引起细胞内过度炎症反应和氧化应激。研究旨在揭示PA对绵羊单核巨噬细胞中炎性因子表达和氧化应激水平影响,探讨TLR4基因介导作用,分析亚麻酸(Linoleic acid,LNA)可能存在的缓解效应。结果表明,在1 mmol·L^(-1)PA处理4 h后,TLR4基因的表达水平显著上调(P<0.05);IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-6等炎性因子表达水平显著高于对照组(P<0.05);ROS和iNOS等氧化相关指标显著升高(P<0.05),SOD、CAT、T-AOC等抗氧化相关指标显著降低(P<0.05)。利用TAK242抑制TLR4基因后,其表达水平显著下调(P<0.05),TNF-α和IL-6炎性因子表达水平极显著下调(P<0.01),ROS和iNOS表达水平下降、T-AOC表达水平升高(P<0.05)。PA与LNA共处理后,TLR4基因表达水平显著下调(P<0.05),TNF-α和IL-6炎性因子表达水平极显著下调(P<0.01),ROS和iNOS表达水平下降、T-AOC表达水平升高(P<0.05)。研究表明,PA处理后绵羊单核巨噬细胞炎性因子和氧化应激水平升高,TLR4基因在此过程中起重要介导作用,LNA可能在一定程度上缓解PA诱发的细胞炎症反应和氧化应激。

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过Toll样受体增强卵巢癌细胞MMP-9的表达

目的探讨M2型巨噬细胞在卵巢癌侵袭转移中的作用及其可能涉及的Toll样受体(TLRs)信号通路机制。方法用320 nmol/L佛波醇酯(PMA)诱导THP-1细胞,直接免疫荧光技术鉴定M2型巨噬细胞;Transwell小室建立M2细胞与卵巢癌细胞SKOV3体外非接触式共培养模型;24和48 h共培养后,实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime PCR)检测SKOV3内TLR1、2、6和基质金属蛋白酶MMP-9水平,蛋白免疫印记(Western blot)检测My D88、TRAF6、P-NF-κB和MMP-9表达;TLR1、2和6激动剂分别作用SKOV3 6、12和24 h后评价MMP-9的变化。结果PMA可诱导THP-1成为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与SKOV3共培养24和48 h后,MMP-9的表达水平显著高于对照组(P<0.05);TLR1、2、和6于共培养24和48 h后在SKOV3有较高表达(P<0.05);共培养24和48 h后,TLRs信号通路蛋白My D88、TRAF6和P-NF-κB在SKOV3也同步表达增高(P<0.05);TLR1、2和6激动剂Pam3CSK4、HKLM和FSL-1分别刺激SKOV3 6、12和24 h后MMP-9 mRNA水平有显著高表达(P<0.05)。结论分化诱导后的M2型巨噬细胞,可能通过刺激和活化TLR1、2、6信号途径,引起卵巢癌细胞SKOV3内基质金属蛋白酶MMP-9水平增加,增强肿瘤的侵袭转移能力。

TLR9-mRNA的表达与急性胰腺炎病人炎性因子变化的相关性研究

目的探讨单核巨噬细胞TLR9-mTLR9-mRNA的表达与急性胰腺炎(AP)病人炎性因子变化的相关性。方法 24小时内被诊断为AP的病人40例,分别于第1,3,5天采集病人的EDTAK2抗凝静脉血,并检测胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子和抗炎细胞因子。分离外周血单个核细胞,采用逆转录聚合酶链式反应对TLR9-mRNA进行检测,分析其5天内表达变化规律。结果所有AP病人在第1天、第3天、5天时单核巨噬细胞TLR9-mRNA对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AP病人外周血单核巨噬细胞TLR9-mRNA的改变与胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子呈明显正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血单核巨噬细胞TLR9-mRNA的表达改变与AP病人炎性因子(胰弹性蛋白酶、促炎细胞因子)表达上调有相关性,TLR9可能介导AP的发生与发展。

急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化

目的探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ、核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系。方法选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κB亚单位P65表达。结果急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κBP65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05)。过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达与核因子κBP65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κBP65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001)。结论急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κB活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κB活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节。

THP-1单核细胞分化过程中MMP-9表达量的变化

目的研究单核细胞在向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因和蛋白表达的变化。方法体外诱导人单核细胞系(THP-1)细胞株分化为巨噬细胞和泡沫细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应和Western blotting分别检测单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9基因和蛋白表达的变化。结果THP-1单核细胞向巨噬细胞、泡沫细胞分化过程中MMP-9 mRNA表达量分别增加了2.03倍和3.36倍(P<0.05,P<0.01);蛋白表达分别增加了5.86倍和3.68倍(P<0.01,P<0.05)。巨噬细胞和泡沫细胞中的MMP-9 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但泡沫细胞中蛋白表达量较巨噬细胞有显著减少(P<0.05)。结论经体外诱导分化成的巨噬细胞和泡沫细胞中MMP-9 mRNA、蛋白水平与单核细胞比较呈显著增加,但单核细胞分化为泡沫细胞后其蛋白表达量呈显著下降。

PMA诱导单核细胞分化过程中基质金属蛋白酶9的表达及其活性的变化

目的应用单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型,研究单核细胞向巨噬细胞细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9表达及其活性的变化.方法用乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)孵育THP-1细胞不同时间,采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,RT-PCR观察MMP-9mRNA表达的变化,Westernblot观察MMP-9蛋白表达的变化,明胶酶谱(gelatin-zymogram)分析法测定MMP-9活性的变化。结果THP-1细胞经PMA孵育后,细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁,且MMP-9的表达明显上调,活性增加.结论单核细胞向巨噬细胞分化的过程中,MMP-9的表达量及其活性明显增加。

S100A9抑制ALV-J在HD11细胞中增殖

钙结合蛋白S100A9是损伤相关分子模式蛋白家族的重要成员,在调节细胞的免疫功能和抗病毒免疫中扮演着重要角色。然而,目前尚不清楚S100A9在家禽中是否具有抗病毒功能。本文首先通过定量PCR分析发现ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后持续性下调S100A9基因表达。为了进一步探讨S100A9基因在鸡巨噬细胞中的抗病毒功能及其机制,成功构建了S100A9真核表达载体。最后,通过定量PCR和Western blot检测S100A9过表达对ALV-J复制水平和TLR3信号通路相关基因表达的影响。结果显示:与对照组相比,ALV-J在过表达S100A9的HD11中的增殖水平显著降低。机制上,S100A9显著上调TLR3基因及其下游信号基因(IRF7、IFN-α和IFN-β)在HD11细胞中表达。本研究揭示了鸡S100A9在巨噬细胞中抗病毒功能及其作用机制,为今后探索S100A9基因在ALV-J致病机理中的作用奠定了基础。