白细胞介素17A和17F单核昔酸多态性与膝骨关节炎的相关性

目的探讨白细胞介素(IL)-17A(rs2275913)和IL-17F(rs763780)基因单核昔酸多态性与中国汉族及藏族人群膝骨关节炎(K0A)易感性的相关性。方法采用病例对照研究,于2015至2017年选取青海地区汉族KOA患者122例、汉族健康对照124名及藏族KOA患者76例、藏族健康对照68名。采用聚合酶链反应(PCR)测序法对rs2275913及rs763780多态性位点在4组样本中进行单核昔酸多态性(SNP)分型,检测IL-17A和IL-17F基因型频率及等位基因频率。两组计量资料比较采用t检验。结果IL-17A(rs2275913)的基因型AA频率在汉族KOA组和对照组之间有显著性差异(OR=2.625,P=0.016);汉族KOA组与对照组等位基因A频率差异有统计学意义(0R=1.445,P=0.047);藏族KOA组及对照组1L-17A的基因型频率差异无统计学意义(OR=1.696,1.355,均P>0.05);IL-17F(rs763780)基因型频率及等位基因频率在汉族、藏族KOA组及对照组之间差异均无统计学意义(OR=1.346、1.126,均P>0.05)。结论IL-17A(rs2275913)的基因型AA和等位基因A可能与汉族KOA的发病相关。

IL-1β基因单核苷酸多态性与足月新生儿败血症的相关性研究

目的分析IL-1β基因单核苷酸多态性(SNP)与足月新生儿败血症的关系,为新生儿败血症的预防提供理论依据。方法选取昆明市儿童医院新生儿科2017年1-12月血培养阳性,确诊为败血症的50例新生儿为败血症组,有临床症状但血培养阴性,诊断为临床败血症的50例患儿为临床败血症组,另选取同期50例非感染新生儿作为对照组。采用Sequenom SNP测序技术检测IL-1β基因2个位点(rs1143627、rs1143643),比较三组间各等位基因频率和基因型频率的分布差异;采用多因素Logistic回归分析IL-1β基因型与新生儿败血症的关系。结果三组间IL-1β基因rs1143627(C/T)各基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05);三组间IL-1β基因rs1143643(C/T)各基因型分布差异均有统计学意义(χ~2=15.94,P<0.05);三组间上述两个位点各等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示胎龄与新生儿败血症的发生相关(OR=0.6,95%CI:0.418~0.915);性别、日龄、rs1143627和rs1143643基因多态性对新生儿败血症发病的影响差异无统计学意义。结论胎龄是新生儿败血症的影响因素。IL-1β基因位点rs1143627(C/T)和rs1143643(C/T)可能与新生儿败血症无相关性。

闽南地区急性淋巴细胞白血病患儿亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与甲氨蝶呤的相关性

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T及A1298C位点多态性与闽南地区儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗用药甲氨蝶呤(MTX)不良反应易感性的相关性。方法选取2015年1月至2018年6月厦门大学附属第一医院儿科收治的128例闽南地区ALL患儿,采集其外周血2 mL,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)直接测序方法检测MTHFR基因C677T和A1298C基因型,依据国立癌症研究所毒性判定标准评估ALL患儿MTX不良反应。结果128例患儿中,54例(42.2%)出现皮疹,48例(37.5%)出现黏膜损害,51例(39.8%)出现肝损害,23例(18.0%)出现肾损害,52例(40.6%)出现胃肠道反应,38例(29.7%)出现白细胞减少,34例(26.6%)出现血小板减少,63例(49.2%)出现血红蛋白下降。MTHFR C677T和A1298C基因不同基因型组的MTX化疗不良反应(皮疹、黏膜损害、肝肾损害、胃肠道反应、白细胞减少、血红蛋白下降和血小板减少)的发生率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。患儿不同临床危险度(MTX剂量)分组在MTHFR C677T和A1298C的基因型和等位基因频率中分布差异无统计学意义(χ^2=2.573、2.264、1.615、0.267,均P>0.05)。24 h、48 h和72 h MTX血药浓度异常发生率差异无统计学意义(均P>0.05)。结论MTHFR的C677T和A1298C多态性可能不是预测闽南地区儿童ALL MTX化疗的良好指标,其临床应用仍需进一步探讨。

IL-23R基因单核苷酸多态性与中国西北地区汉族人群克山病的关联研究

目的探讨白细胞介素23受体(IL-23R)基因单核苷酸多态性(SNP)与中国西北地区汉族人群克山病的相关性。方法选择陕西省黄陵县汉族人群285例为研究对象,其中克山病患者(病例组)79例、健康对照者(对照组)206例,采集外周血提取基因组DNA,采用飞行时间质谱分型技术对候选位点进行基因分型。应用拟合优度χ^2检验分析基因频率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律;应用χ^2检验对病例组和对照组的基因型进行关联分析;应用logistic回归分析对年龄进行校正,再次对病例组和对照组的基因型进行关联分析。结果病例组和对照组IL-23R基因rs10889677位点基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ^2=0.254,P > 0.05)。关联分析结果表明,IL-23R基因rs10889677位点基因型频率分布病例组(CC、CA、AA分别为6.3%、36.7%、57.0%)与对照组(CC、CA、AA分别为5.3%、43.2%、51.5%)比较差异无统计学意义(χ^2=1.008,P > 0.05)。经年龄校正,IL-23R基因rs10889677位点基因型频率分布两组比较差异无统计学意义(χ^2adj=0.669,P > 0.05)。结论IL-23R基因rs10889677位点与中国西北地区汉族人群克山病无相关性。

蜜蜂分子标记研究进展

分子标记是指可遗传的、能被定位和识别的DNA序列,广义的分子标记还包括蛋白质等生物物质,是DNA水平遗传多态性的直观映射。目前分子标记已被运用在动植物及微生物的基因定位、物种起源和遗传育种等研究上,蜜蜂领域在种类鉴定和物种筛选等方面也有广泛研究。简要介绍分子标记的种类及其在蜜蜂上的应用现状,为进一步开展蜜蜂分子标记相关工作提供参考。

山西地区糖调节受损患者脂联素基因SNP276多态性与原发性高血压的关系

目的探讨中国山西地区糖调节受损(IGR)汉族人群脂联素基因(APM1)单核苷酸多态性(SNP)276G/T与原发性高血压的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术对无亲缘关系的山西地区汉族人群中216例糖调节受损者的APM1 SNP276进行基因分型,探讨其与原发性高血压的关系。结果IGR无高血压组及IGR合并高血压组AMP1基因型及等位基因分布差异有统计学意义(P=0.025,P=0.007),与TT型相比,GG+GT型IGR患者合并原发性高血压的风险增加(OR=3.346,95%CI:1.115~8.986,P=0.037),经性别、年龄及BMI校正后,风险增加无统计学意义(P=0.349)。结论脂联素基因SNP276 G/T与山西地区汉族人IGR合并原发性高血压有关,但非独立相关。

血管内皮生长因子A基因多态性与新生儿坏死性小肠结肠炎相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)基因单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)位点与新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)的相关性。方法选择2014年8月至2016年12月佛山市妇幼保健院和中山大学附属第六医院新生儿重症监护病房收治的Ⅱ期及以上NEC早产儿(NEC组),以及同期住院、胎龄和体重与NEC组相匹配的非NEC早产儿(对照组)为研究对象。应用SEQUENOM MassARRAY基因分型检测技术分析VEGFA rs1005230、rs833067、rs3025010、rs3025035、rs3025036、rs10434和rs6905288基因频率在两组中的分布;酶联免疫吸附试验测定两组血浆VEGFA浓度并比较。数据分析应用SPSS 20.0软件,基因型频率Hardy-Weinberg平衡采用SHISUS软件分析。结果NEC组和对照组分别纳入30例和80例早产儿。rs1005230 T次要等位基因和rs833067 C次要等位基因与NEC发生有显著相关性,NEC组rs1005230 C/T(OR=4.810,95%CI 1.742~13.278)和C/T-T/T(OR=4.892,95%CI 1.801~13.246)、rs833067 T/C(OR=4.373,95%CI 1.578~12.129)和T/C-C/C(OR=4.000,95%CI 1.484~10.828)基因型频率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组含有次要等位基因基因型多态性位点rs1005230和rs833067患儿的血浆VEGFA含量均低于不含次要等位基因的纯合基因型患儿,差异有统计学意义(P<0.01)。结论VEGFA rs1005230和rs833067多态性可能与患儿血浆VEGFA含量低及NEC高风险有关。

广西壮族绝经后妇女雌激素受体-α基因多态性对血清护骨素的影响

目的了解雌激素受体-α基因多态性对广西壮族绝经后妇女护骨素的影响,为雌激素受体基因所致的护骨素降低引起绝经后骨质疏松症早期防治提供理论依据。方法621例广西壮族绝经妇女,定量超声骨质密度仪检测右侧足跟骨测量宽带超声衰减值,并早上空腹采肘静脉血5 ml,限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)检测雌激素受体-α基因多态性,用酶联免疫法测定各基因型对应的血清护骨素。结果绝经早期各雌激素受体-α各基因型的护骨素和骨密度都是降低的,各雌激素受体-α各基因型之间骨密度和护骨素均无明显差别(P>0.05)。而60岁后绝经晚期雌激素受体-αPvuⅡ酶切的P等位基因与同一年龄组其他4个基因组比较,护骨素和骨密度明显降低(P<0.05);65岁后绝经晚期雌激素受体-αXbaⅠ酶切的Xx等位基因与同一年龄组其他4个基因组比较,护骨素和骨密度明显提高(P<0.05)。结论雌激素受体-αPvuⅡ酶切的P等位基因护骨素和骨密度较低,更易患绝经后骨质疏松症,而雌激素受体-αXbaⅠ酶切的Xx等位基因护骨素和骨密度较高,不易患绝经后骨质疏松症。绝经后骨质疏松症防治方面,应该根据雌激素受体不同基因型对不同个体采取个体化防治。

晚发散发性帕金森病与自噬相关基因Atg7 rs2606757位点基因多态性的关联研究

目的探讨晚发散发性帕金森病(PD)与自噬相关基因Atg7基因rs2606757位点多态性的关联。方法在124例晚发散发性PD患者(病例组)和同期105例年龄、性别匹配的健康体检者(对照组)中,应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及对部分标本基因测序的方法检测Atg7基因rs2606757位点的基因型频率,并分析其基因型及等位基因频率在两组中的分布特点。结果病例组和对照组AA基因型频率分别为34.7%(43/124)和53.3%(56/105),(χ^2=8.063,P=0.005),OR值为0.465(95%CI:0.273~0.791)。性别分层分析发现携带rs2606757 AA基因型的男性发生晚发散发性PD的风险降低[病例组33.3%(23/69)比对照组53.2%(33/62)](χ^2=5.280,P=0.022),OR值为0.439(95%CI:0.217~0.891)。Logistics回归分析发现,两组间Atg7基因rs2606757位点AA基因型频率差异有统计学意义(P=0.004),OR值为2.210(95%CI:1.289~3.789)。结论Atg7基因rs2606757位点AA基因型可能与男性晚发散发性PD患病风险降低有关。

肝硬化患者人类白细胞抗原-DRB1和DPBl基因多态性的临床意义

目的探讨人类白细胞抗原（HLA）-DRBl和DPBl基因多态性与肝硬化易感性的关联。方法收集肝硬化患者168例作为研究组，其生物学父母作为对照组。运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术，检测HLA-DRBl和DPBl基因rs24755213、rs202176660基因多态性，进行肝硬化与HLA-DRBl和DPBl基因多态性的关联分析和单体型相对风险率分析。哈迪温伯格吻合度检验进行群体分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果HLA-DRB1单核昔酸多态性基因（SNP）位点rs24755213为A／G两种基因型，HLA-DPBl基因SNP位点rs202176660为C／T两种基因型，Hardy-Weinberg平衡检验结果表明吻合度良好；HLA-DRBl和DPBl基因SNP位点rs24755213与肝硬化相关联（P=0.014），其中等位基因A为危险因素（Z=2.33），G是保护因素（Z=-2.33）；rs202176660等位基因多态性与肝硬化相关联（P=0.026），其中等位基因C是保护因素（z=-2.06），T为危险因素（Z=2.06）。rs24755213、-rs202176660单体型的G／T、A／C与肝硬化相关联（Z值分别为-2.12、2.09，P值分别为0.037、0.002）。结论HLA-DRBl和DPBl基因的单核苷酸表型差异与肝硬化的发生和发展关系密切。

早年心理创伤与促肾上腺皮质激素释放激素受体1型基因多态性对视觉空间记忆的影响

目的探讨早年创伤与促肾上腺皮质激素释放激素受体1型(CRHR1)基因多态性对工作记忆的影响。方法根据暴露于唐山大地震的情况将受试者分为婴儿期暴露组(n=176)、胎儿期暴露组(n=172)、对照组(n=187);胎儿期暴露组又分为孕早期(1~3个月,n=50)、孕中期(4~6个月,n=59)、孕晚期(7~9个月,n=63)。采用简易视觉空间记忆测验(BVMT-R)和霍普金斯词汇学习测验(HVLT-R)分析3组人群的工作记忆情况;提取受试者外周血中的DNA,采用荧光定量PCR方法分析CRHR1 rs242924和rs7209436基因多态性,采用两因素析因设计资料的方差分析方法分析影响工作记忆的因素(地震应激和基因分型)是否具有交互作用。结果胎儿期暴露组、婴儿期暴露组BVMT-R总分较对照组明显下降;CRHR1基因型分为A/T基因携带者和C基因携带者2组,C基因型携带者在婴儿期、胎儿期暴露组中的BVMT-R总分比对照组均明显降低[(22.5±8.1)分比(28.9±5.7)分,t=-4.231,P<0.01;(23.0±8.5)分比(28.9±5.7)分,t=-3.201,P<0.05];对照组C基因携带者的BVMT-R总分比A/T基因携带者升高[(28.9±5.7)分比(25.8±7.3)分,t=-2.215,P<0.05]。地震暴露组和基因型两因素交互作用于BVMT-R总分(F=4.028,P<0.05)。结论胎儿期和婴儿期遭受地震创伤对视觉空间记忆存在持续性的潜在影响;早年地震创伤与CRHR1易感基因型的交互作用可能是视觉空间记忆受损的主要原因。

WT1基因多态性对治疗老年急性髓系白血病患者的疗效及预后的影响

目的评估WT1 rs16754多态性对老年急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性和预后的影响。方法本研究为回顾性分析,收集老年AML患者(≥60岁)的外周血或骨髓样本178例。另外收集65例化疗前AML患者的骨髓样本进行RNA提取,多态性位点的基因型和其他变量的相关性通过Logistic回归模型进行分析。通过Cox模型对其他变量进行校正。结果WT1基因rs16754位点位于该基因编码区,在研究人群的基因分布频率为:GG型99例(55.62%),GA型67例(37.64%),AA型12例(6.74%),最小等位基因频率为0.26,三种基因型分布频率符合哈迪温伯格平衡(P=0.884)。不同基因型患者基线临床资料分布均衡。携带A等位基因的GA/AA型患者和GG型患者的中位总生存期(OS)分别为2.73和1.64年(P=0.003)。两种基因型患者的中位无复发生存期(RFS)分别为2.06和1.12年(P=0.032)。对OS和RFS构建的多变量Cox模型校正之后发现GA/AA基因型患者较好的OS影响仍然存在(HR=0.51,P=0.013)。另外,进一步在65例骨髓标本的表达分析中发现,GG型患者相对于GA/AA基因型的患者,骨髓细胞中WT1 mRNA表达显著较高(P<0.001)。结论在接受阿糖胞苷为基础化疗的老年AML患者中,WT1基因rs16754位点可能通过影响WT1mRNA的表达从而影响了老年AML患者的预后。

Sotos综合征患儿的遗传学分析

目的对1例智力低下患儿进行遗传学分析,明确患儿的遗传学病因。方法对1例智力低下患儿行G显带染色体核型分析、单核昔酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNParray)及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,患儿父母行外周血染色体核型及FISH分析。结果SNP-array分析显示患儿染色体5q35.2q35.3存在5077 kb缺失,7q36.2q36.3存在4964 kb重复,FISH验证了SNP-array的结果。根据患儿SNP-array和FISH结果及其父母外周血FISH结果,确认胎儿父亲为隐匿性t(5;7)(q35.2;q36.2)携带者,而胎儿遗传了其中一条衍生的5号染色体der(5)t(5)7)(q35.2;q3&2)。结论5q35.2q35.3微缺失对Sotos综合征表型的产生起主导作用,SNParray结合FISH技术有助于发现染色体隐匿性易位。

长QT综合征一家系的遗传学定位研究

目的 寻找中国人长QT综合征 (LQTS)的遗传易感位点 ,选择并确立LQTS患者症状前诊断的短串联重复序列 (shorttandemrepeats ,STR)和单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphism ,SNP) ,初步建立LQTS遗传学诊断方法。方法 采集一个LQTS家系四代共 37个成员 ,用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增位于KCNQ1、HERG基因内的SNP(K5 46、K36 7、H489、和H5 6 4)和位于KCNQ1、HERG、和SCN5A基因邻近的STR (D11S132 3、D11S2 36 2、D11S1318、D7S6 36、D7S2 46 1、D7S182 4、D3S12 98、D3S176 7、D3S110 0、D4S15 6 4) ,所得产物经 6 %～ 10 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行等位基因片段长度多态性分析或直接测序。结果 通过单倍体分析排除LQT1、LQT3、和LQT4位点 ,初步确定该LQTS家系的致病基因位于LQT2位点。HERG基因全部外显子的直接测序结果表明 7名患者均出现相同的HERG基因单碱基转换 (CGA2 5 87TGA) ,与之相对应的编码氨基酸由精氨酸 (Arg)突变为终止密码子TGA ,即R86 3X。结论 STR和SNP单倍体分析方法可以有效地区分正常及患病个体 ,确定LQTS致病基因的位点 ,可用于LQTS患者的症状前诊断。

骨形态发生蛋白2对后纵韧带骨化的影响及其可能机制

目的探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)对后纵韧带骨化(OPLL)成骨作用的影响及其与转化生长因子-β(TGF-β)/Smad信号通路的关系。方法分别构建野生型pcDNA3.1-BMP2(WT)、突变型pcDNA3.1-BMP2(37G)、突变型pcDNA3.1-BMP2(190T)和突变型pcDNA3.1-BMP2(37G/190T)表达载体并琼脂糖凝胶电泳鉴定。在脂质体介导下,将构建载体导入小鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2,检测细胞内BMP2的表达情况。采用脂质体介导的真核细胞表达载体peDNA3.1-BMP2转染小鼠胚胎成纤维细胞C3H10T1/2.根据转染情况共分为6组:未转染组、空载体pcDNA3.1转染组、pcDNA3.1-BMP2(WT)转染组、pcDNA3.1-BMP2(37G)转染组、pcDNA3.1-BMP2(190T)转染组和pcDNA3.1-BMP2(37G/190T)转染组。根据是否包含BMP2多态性定义实验组与对照组,其中未转染组和空载体pcDNA3.1转染组为对照组,余为实验组。利用蛋白免疫印迹方法检测信号传导通路中磷酸化Smad1/5/8和Smad4蛋白表达水平;利用定量检测试剂盒检测细胞内成骨特异性蛋白碱性磷酸酶(ALP),比较实验组中蛋白表达差异结果琼脂糖凝胶电泳显示双酶切后可形成相对分子质量分别为1.2kb和5.4kb条带,测序验证与目标序列完全相符,表明载体构建成功。BMP2基因在C3H10T1/2细胞内可以成功转染并且稳定表达。蛋白免疫印迹检测表明,实验组转染后磷酸化Smad1/5/8蛋白表达水平明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。实验组转染后Smad4蛋白表达水平明显增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),其中pcDNA3.1-BMP2(37G)转染组和pcDNA3.1-BMP2(37G/190T)转染组Sma<14蛋白表达水平增加明显,与其他实验组比较差异有统计学意义(P<0.05),两组间差异无统计学意义(P>0.05)。稳定转染4周时细胞ALP活性测定结果显示,实验组转染后ALP活性明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)0其中pcDNA3.1-BMP2(37G)转染组和pcDNA3.1-BMP2(37G/190T)转染组ALP活性分别为(30.56±0.46)nmol·min^-1·mg^-1和(29.62±0.68)nmol·min^-1·mg^-1,与其他实验组相比差异有统计学意义(P<0.05),两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。BMP2基因的外显子2中的Ser37Ala(T/G)多态性与稳定转染的C3H10T1/2细胞中的ALP活性呈正相关。结论BMP2基因外显子2上的Ser37Ala(T/G)多态性通过TGF-β/Smad信号通路促进小鼠OPLL成骨,可能机制是上调Smad4和ALP蛋白表达水平。

一个染色体14q微缺失的遗传学分析

目的分析1例自闭症、智力低下和癫痫患儿的遗传学病因。方法应用常规G显带染色体核型分析、单核昔酸多态性微阵列(single nucleotide polymorphism array,SNP array)技术检测染色体变异,用高通量测序筛选致病变异位点,Sanger测序验证,查阅数据库及文献分析,以明确缺失区及致病变异基因的病理意义。结果患儿及其父母外周血G显带核型分析结果均未见异常。SNP array检测发现患儿染色体14 qll.2区存在460 kb的缺失,高通量及Sanger测序显示患儿携带NALCN基因新发变异,患儿及其母亲COL4A5基因发生半合子变异。结论染色体14qll.2微缺失与NALCN变异可能与患儿自闭症、智力低下及癫痫等表型相关。

体外受精后单绒毛膜双合子双胎活产一例

本文报告了 1例经体外受精后B超确诊为单绒毛膜双胎妊娠的病例。该孕妇中孕期随机抽取一胎羊水行荧光原位杂交技术和染色体核型分析检测,未见异常。双胎生后2d和3岁时分别行外周血染色体核型分析检测,提示双胎外周血染色体核型均为21-三体男性和正常女性2种染色体核型嵌合异常(chi 47,XY,+21/46,XX)。3岁时刮取双胎口腔黏膜细胞行单核苷酸多态性基因芯片检测,结果提示男童核型为47,XY,+21,女童为46,XX。以上结果提示该双胎为单绒毛膜双合子双胎,双胎外周血染色体核型均嵌合异常,无组织体细胞染色体核型嵌合异常。男童呈现唐氏综合征患儿特殊面容,女童未见明显异常。