黑木耳单核杂交菌株鉴定与农艺性状评价

以完成了酯酶同工酶酶谱鉴定的黑木耳亲本菌株、单核菌株和栽培筛选的“Z5”杂交菌株为试验材料,采用RAPD分子图谱比较和栽培农艺性状灰色关联度分析方法,研究了单核杂交菌株与亲本菌株的图谱差别、遗传关系,并对杂交菌株栽培性状进行比较,以期获得适合市场需求的性状改良的新菌株。结果表明:RAPD分子图谱显示“Z5”菌株缺失亲本及杂交单核的部分图谱条带,也产生了新条带。聚类分析显示“Z5”菌株与2个亲本相似度仅为54%,遗传距离较远。根据给出的参考品种性状值比较了“Z5”菌株和2个亲本栽培农艺性状和灰色关联度,“Z5”菌株农艺性状可满足现阶段市场要求,其等权关联度和加权关联度排在了2个亲本之前。

不同杏鲍菇品种种质鉴定及原生质体单核体杂交育种

以7个生产上常用的杏鲍菇菌株为试材,采用拮抗试验、酯酶同工酶技术、ISSR分子标记技术对不同杏鲍菇菌株进行鉴别分类;进而利用原生质体单核体杂交育种技术,将不同种类、不同交配型菌株进行单单杂交,筛选出杂交成功且具有锁状联合的杂交菌株,对比杂交菌株与亲本菌株的菌丝生长速率、农艺性状等,以期为杏鲍菇的实际生产与栽培提供优良种质资源。结果表明:拮抗反应、酯酶同工酶、ISSR的研究结果一致,将7个杏鲍菇菌株分为3类,第1类为12、16、1208、1219、1287菌株;第2类为1283菌株;第3类为1284菌株。通过原生质体单核体杂交技术,获得24个杂交菌株;与亲本对比,筛选出了5个菌丝生长速率、菇体质量显著优于亲本的菌株,分别为ZJ5、ZJ8、ZJ11、ZJ17、ZJ22菌株。

灰色关联度法在杏鲍菇优良杂交菌株筛选中的应用

以杏鲍菇(Pleurotus eryngii)6号和ACCC50894为亲本,分别采用单孢杂交和原生质体单核体杂交方式获得65和37个杂交子,观测杂交子及亲本菌丝体生长情况,选择长势好及生长快速的杂交子进行栽培出菇试验。采用灰色关联度分析法对15个生长势较强的杂交子从7个性状方面进行综合评价,结果表明,单孢杂交获得的杂交子D12、D18、D20、D30、D19、D31、D17和D48关联度排名先于两亲本,农艺性状和子实体性状表现较好;原生质体单核体杂交菌株Y29和Y30关联度排名介于两亲本之间。

应用单核苷酸多态性-微阵列比较基因组杂交技术检测胎儿标记染色体

目的探讨单核苷酸多态性一微阵列比较基因组杂交技术（single nucleotide polymorphism array-based comparative genomic hybridization，SNP-arrayCGH）检测胎儿标记染色体及其在产前遗传学诊断中的应用。方法应用SNP-arrayCGH技术对羊水G显带诊断出的两例携带标记染色体的胎儿（其中胎儿1核型为嵌合体47，XX，＋marl[23]／46，XX[16]、胎儿2核型为47，XX，＋nlar），进行全基因组高分辨率扫描分析，确定标记染色体来源与片段大小；并用染色体末端探针多重连接依赖探针扩增技术（multiplex ligation-dependentprobe amplification，MI．PA）对胎儿2基因组不平衡进行验证。两例胎儿超声均无明显结构异常；两例胎儿的双亲核型均正常。结果SNP-arrayCGH结果显示胎儿1标记染色体来源于9p21．1-p21．3（长度为8．3Mb），显示嵌合型，根据文献推测此区带的重复携带者可以是表型正常（或有轻微异常）的个体。胎儿2标记染色体来源于15q11．2-q13．3（长度为10．8Mb），染色体末端探针MLPA检测结果也证实了该重复的存在，此区域基因重复主要引起神经行为方面的异常。告知孕妇及家属风险，均选择终止妊娠。结论SNP-arrayCGH技术能比其他技术更精确的确定标记染色体来源，可明确标记染色体的基因型，而且能检测出嵌合型的标记染色体，适用于产前遗传学诊断，并可为产前遗传咨询提供帮助。

单核苷酸多态性比较基因组杂交技术对Angelman综合征的诊断价值

目的：分析Angelman 综合征（ AS）的基因型和表型之间的关联,并探讨单核苷酸多态性比较基因组杂交技术（ SNP aCGH）对AS诊断的价值。方法将11例临床诊断AS的患儿分别行脑电图检查、格赛尔（ Gesell）评分,予甲基化聚合酶链反应初筛,再予SNP aCGH全基因组扫描,获得染色体异常拷贝数据并分析。结果（1）11例患儿遗传诊断为AS,缺失型10例（其中Ⅱ型缺失6例,I型缺失4例）,单亲二倍体（UPD）1例。（2）15q11-q13为染色体异常拷贝区域,根据其起始范围,查阅人类孟德尔遗传在线基因库（OMIM）,明确缺失片段中主要包括以下基因：MKRN3、MAGEL2、NDN、SNRPN、SNURF、GABRB3、GABRA5、GABRG3、UBE3A、OCA2、ATP10A。（3）缺失型患儿身高及体质量较健康同龄儿低3~5个标准差,UPD患儿身高及体质量低于健康同龄儿约1.5个标准差。 Gesell评估显示Ⅰ型缺失为重度、极重度智力残疾；Ⅱ型缺失为中度智力残疾；UPD患儿为轻度智力残疾。发现色素沉着障碍共8例,包括UPD患儿。1例Ⅰ型缺失和UPD患儿脑电图提示偶发棘波,另1例Ⅰ型缺失,为界限性脑电图,其余患儿为阵发性中高波幅的棘波、慢波、棘慢波（2.5~3.0 Hz）。结论SNP aCGH技术在确诊AS的同时能明确基因病理分型,检出染色体拷贝数异常区域的起始点所在,明确缺失片段大小及片段中所涉及的基因,利于表型和基因型的关联分析,提供针对性的遗传咨询,且为AS发病机制、基因功能定性等研究提供一个良好的技术平台。

7p部分三体综合征的表型和基因型关系研究

目的:探讨7p部分三体综合征的起源,分析患者表型和基因型的关联性,同时研究单核苷酸多态-微阵列比较基因组杂交技术(SNP aCGH)在检测亚细胞遗传学改变中的应用价值。方法:对外院核型报告正常的1例特殊面容、低智合并先心患儿复查染色体,G带发现其4q35.2区域疑似有额外片断附着,进一步用SNP aCGH进行全基因组扫描,并用4号染色体长臂末端和7号染色体短臂末端探针与患儿淋巴细胞杂交(FISH)以验证SNP aCGH结果,同时对患儿进行家系调查及部分成员染色体检查。结果:患儿核型46,XX,add(4)(q35.2)?全基因组扫描显示,患儿7p21.1-pter区域有20.78Mb的重复,而4q35.2-qter区域有3.24Mb的缺失。FISH发现,患儿外周血淋巴细胞含3个拷贝的7号染色体短臂末端和1个拷贝的4号染色体长臂末端。家系调查发现,患儿父亲及祖父均为46,XY,t(4;7)(q35.2;p21.1)。综合以上结果,确定患儿核型为46,XX,der(4)t(4;7)(q35.2;p21.1)pat,异常核型由父亲传递,系精子在减数分裂中通过邻近分离-I所形成的不平衡产物。患儿不平衡片断包含与颅骨发育异常相关的TWIST基因、与先心相关的MOX2基因以及与颅面部异常特征相关的ACTB基因。结论:亲代平衡易位导致的子代小片断不平衡是7p部分三体综合征等出生缺陷的重要原因;SNP aCGH是鉴别小片断不平衡的有效手段;7p部分三体综合征患者异常表型可能与TWIST、MOX2、ACTB等基因有关。

一例21三体综合征孕妇及其正常新生儿

目的分别采用SNP-array CGH及G-显带核型分析对一例智力低下孕妇外周血及新生儿脐带血标本进行检测,初步探讨21三体综合征妇女生育正常后代的机制及相关伦理问题。方法对1例智力低下孕妇抽取外周血,对新生儿抽取脐带血,取200μL提取DNA后采用SNP-array CGH技术进行检测,取1m L进行培养,常规制备染色体,G显带,然后进行核型分析。结果孕妇外周血核型为47,XX,+21;新生儿脐带血染色体核型为46,XX。结论 21三体综合征患者的生殖细胞在发生第一次及第二次减数分裂后能产生正常的单倍体生殖细胞(23,X),与其丈夫正常单倍体生殖细胞(23,X)受精后,能分娩正常核型的婴儿。

不明原因智力低下／脑发育迟滞患儿的拷贝数变异研究

目的运用单核苷酸多态性比较基因组杂交芯片（SNP-aCGH）对智力低下／脑发育迟滞（MR／BD）病例进行全染色体扫描，分析拷贝数异常变化，为明确诊断和遗传咨询提供帮助。探讨SNP-aCGH技术在不明原因MR／BD遗传分子诊断中的应用。方法收纳不明原因MR／BD患儿92例。予SNP-aCGH全染色体扫描，将异常拷贝数结合临床表型关联分析，找到致病区域及致病候选基因。将阳性病例（携带异常拷贝数的病例）与阴性病例在一般临床表型方面予统计学比对分析。结果1．携带拷贝数异常者10例，检出率10．86％。携带亚端粒区异常拷贝者8例，检出率8．70％；携带非亚端粒异常者5例，检出率5．40％。MR／BD相关异常拷贝数累及不同亚端粒区共10个（9p、21q、3p、2p、15q、4p、12p、22q、16p、17p），累及非亚端粒区7个（1p、4q、2p、14q、15q、12q、22q）。其中，不同缺失位点共11个，长度1．05-8．80Mb；不同重复位点8个，长度1．33-31．25Mb。2．诊断9p重复综合征1例，候选基因DOCK8、VLDLR。CRBN基因断裂1例。诊断第5指综合征并15q26．3-qter缺失1例，候选基因SOX11、LINS1。诊断12p13．3微缺失综合征1例，候选基因ELKS、ERC1。诊断22q13．2-qter微缺失1例，候选基因SHANK3。诊断ATR-16综合征合并17p13．3微重复综合征2例，前者主要候选基因HBA1、HBA2、SOX8，后者YWHAE、LIS1。3．阳性病例与阴性病例在生长迟缓、内脏畸形、低出生体质量儿、早产儿方面差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论1．本组阳性病例除不同程度的MR／BD外，几乎均伴发育落后，部分伴内脏畸形、低出生体质量儿、早产儿。2．亚端粒区域与MR／BD密切相关，但非亚端粒区域突变可疑致病，有待深入研究。3．SNP-aCGH技术能高分辨地检出拷贝数变异的起始位点，为寻找MR／BD的致病基因有效缩小范围，同时为研究表型与基因型的关联分析、发病机制等提供一个良好的技术。

Enhanced destabilization of mismatched DNA using gold nanoparticles offers specificity without compromising sensitivity for nucleic acid analyses

Here, we report a method that uses gold nanoparticles （AuNPs） to enhance the specificity of DNA hybridization without reducing its detection sensitivity. The conventional stringent wash method utilizes high-temperatureflow-salt conditions to enhance the specificity of DNA hybridization-based assays. This method creates a destabilizing environment for base pairing that affects specific and nonspecific duplexes. Therefore, specificity is achieved at the expense of signal intensity or sensitivity. However, in the proposed wash method, AuNPs predominantly destabilize nonspecific duplexes, offering specificity without compromising sensitivity. This AuNP wash technique has proven to be effective in detecting single nucleotide polymorphisms （SNPs） in genomic samples even at room temperature in a CD-like NanoBioArray （CD-NBA） chip. This method is also robust with sequence variation and is compatible with multiplex DNA analyses on microarrays. Thus, the AuNP wash method could potentially be useful for improving the accuracy of DNA hybridization results.