COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞Cofilin的表达与其吞噬烟曲霉功能的相关性。方法选取2015年7月至2016年5月南方医科大学珠江医院呼吸内科门诊20名COPD患者,其中观察组1(2011版GOLD中A和B组),观察组2(2011版GOLD中C和D组),健康对照组10人。3组行支气管肺泡灌洗术、采取外周血,分别提取AM和MDM,检测各组的AM和MDM对烟曲霉孢子的吞噬能力。运用实时荧光定量(qRT-PCR)和免疫蛋白印迹实验(Western blot)检测3组Cofilin蛋白的表达,比较其差异。结果 3组人群MDM/AM吞噬烟曲霉孢子的菌落数分别为(17±3)个、(16±2)个、(42±3)个(F=73.446,P<0.001),两观察组与健康组差异明显,而两观察组无明显差异。qRT-PCR和Western blot结果显示,两观察组中Cofilin蛋白表达明显高于健康组。结论 COPD患者肺泡及外周血单核源性巨噬细胞吞噬烟曲霉功能降低可能与Cofilin蛋白升高有关。

猪单核源性巨噬细胞受FSL-1刺激后lncRNAs的鉴定与特征分析

lncRNA是新近发现的一种具有重要功能的RNA分子,在各种生理活动中发挥着重要作用。为鉴定猪单核源性巨噬细胞受FSL-1刺激后相关的lncRNA,利用二代测序技术结合生物信息学对lncRNA进行了组装与特征分析。结果显示FSL-1刺激成功地构建了细胞炎症模型,试验组与对照组共鉴定到1 056个lncRNA转录本,其对应于831个基因座,这些lncRNA的平均长度为1 643 bp,平均外显子数为2.4个。相对于对照组,试验组有51个lncRNA上调表达,44个lncRNA下调表达。在上调lncRNA两侧相邻的蛋白质编码基因参与免疫反应、炎症反应、病毒反应等通路,而在下调lncRNA两侧相邻的蛋白质编码基因参与的通路较少,不参与上述通路。定量PCR结果显示挑选的4个lncRNA的差异倍数与RNA-Seq的结果相似,其中上调的lncRNA呈现一定的组织特异表达,而下调的lncRNA呈现多组织表达。这些结果为进一步研究lncRNA在FSL-1介导的炎症反应中的作用奠定了基础。

单个核细胞和单核源性巨噬细胞生长特性的体外实验研究

目的研究人外周血单个核细胞、单核源性巨噬细胞在体外培养环境中的生长曲线情况。方法以密度梯度离心法和贴壁法分离、纯化正常人的外周血单个核细胞。以佛波醇酯促进单核源性巨噬细胞的分化成熟。用MTT法检测单个核细胞、单核源性巨噬细胞的生长曲线。采用单因素方差分析进行统计学检验。结果单个核细胞接种第1天的细胞数量明显多于第3、5、6、7天（P〈0.05）,但接种后第2~7天的细胞数量相对稳定（P〉0.05）。单核源性巨噬细胞分化成熟后第1~6天的OD,细胞数量较稳定。但第7天的细胞数量明显少于前6天（P〈0.05）。结论体外培养第2~7天的外周血单个核细胞处于生长平台期。体外培养的单核源性巨噬细胞在分化成熟后的第1~6天处于生长平台期。

单核细胞源性巨噬细胞MAC387对肝泡型包虫病患者肝脏炎症与纤维化的作用

目的通过检测肝泡型包虫病(AE)患者肝组织中MAC387的表达水平,探讨其在肝脏炎症和纤维化中的作用。方法收集新疆医科大学第一附属医院2020年6月至2022年3月收治的32例AE患者肝脏组织标本,分为病灶近旁肝组织(CLT组)与远端对照肝组织(DLT组)。通过HE染色和天狼星红染色分别评估患者肝组织病理学炎症改变及胶原沉积,并对CLT组进行炎症分级评分和纤维化分期评分;用免疫组织化学实验分别检测CLT组和DLT组MAC387的阳性表达,并将AE患者分为MAC387高水平组和MAC387低水平组,分析临床主要肝功能生化指标的相关性及手术前后各指标的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组肝组织MAC387mRNA的表达。结果与DLT组相比,CLT组肝脏中MAC387显著增加(P<0.001)。此外,与炎症分级评分和纤维化分期评分较低的患者相比,炎症分级评分和纤维化分期评分较高的患者肝脏中MAC387浸润更多(P<0.001),且MAC387高水平组与ALT、AST呈正相关(ALT:r=0.523,P=0.013;AST:r=0.503,P=0.017),与GGT、ALP、Alb无显著相关性(均P>0.05),MAC387低水平组与ALT、AST、GGT、ALP、Alb均无相关性(均P>0.05)。术后第9天,MAC387低水平组的GGT水平高于MAC387高水平组,且差异有统计学意义(P<0.05)。CLT组MAC387mRNA表达显著高于DLT组(P<0.05)。结论MAC387在肝泡型包虫病患者肝组织中高表达,并且在炎症分级评分和纤维化分期评分较高患者中浸润增加,提示可能在加重AE的肝脏炎症和纤维化中发挥作用。

罗格列酮对急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ在调节急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1中的作用。方法用不同浓度罗格列酮干预急性冠状动脉综合征患者和对照者单核细胞源性巨噬细胞,然后测定各组上清液中基质金属蛋白酶9、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度及单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。结果干预后,急性冠状动脉综合征组及对照组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达上调,表达强度与罗格列酮浓度呈正变关系;基质金属蛋白酶9表达下调,在急性冠状动脉综合征组其下调程度与罗格列酮浓度呈反变关系;组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达无明显变化。结论罗格列酮干预可上调单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达,下调基质金属蛋白酶9表达,在急性冠状动脉综合征组尤其明显,对组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达无明显影响;可能存在稳定动脉粥样斑块的作用。

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞源性巨噬细胞胆固醇代谢和低密度脂蛋白受体表达的影响。方法以佛波酯刺激分化的THP1细胞作为单核细胞源性巨噬细胞模型。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆固醇含量,逆转录—聚合酶链反应检测细胞低密度脂蛋白受体mRNA的表达,Westernblot检测细胞低密度脂蛋白受体蛋白的表达。结果与低密度脂蛋白组、阴性组及IgG免疫复合物组比较,低密度脂蛋白免疫复合物组细胞内胆固醇水平明显增高,并且低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白的表达增加。结论低密度脂蛋白免疫复合物能显著增加巨噬细胞内胆固醇含量,亦能够促进低密度脂蛋白受体mRNA与蛋白的表达,提示低密度脂蛋白免疫复合物在动脉粥样硬化进展过程中起重要的作用。

阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2的影响

目的观察阿托伐他汀对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2[Lp-PLA(2)]的影响。方法入选2013年3月—2013年12月ACS患者38例,分离培养ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞,分为4组:空白对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、阿托伐他汀低浓度组和阿托伐他汀高浓度组。分别给予不同处理,收集培养细胞上清液及巨噬细胞,实时定量RT-PCR法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA表达,Western-blot法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液Lp-PLA(2)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平。结果 ox-LDL刺激可以明显增加ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA与蛋白的表达,而阿托伐他汀可以显著降低其诱导的Lp-PLA(2)表达增加及炎症因子分泌,且该反应呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀抑制ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)的表达,从而起到调节炎症反应,稳定斑块作用。

超氧化物歧化酶在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞中的抗氧化作用

目的:探讨超氧化物歧化酶(SOD)在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用。方法 THP-1单核细胞,加入佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,然后加入100μmol·L-1的 Hcy 和100μmol·L-1 Hcy+叶酸+VB12,并设置对照组(0μM Hcy),孵育48h后收集细胞。采用Fe3+还原比色法检测总抗氧化能力(T-AOC)、黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量。结果100μmol·L-1 Hcy组与对照组比较,T-AOC、SOD水平明显降低,MDA的含量明显升高;与100μmol·L-1Hcy+叶酸+VB12组比较,T-AOC、SOD水平升高,MDA的含量降低。结论 Hcy可诱发THP-1单核源性巨噬细胞发生氧化应激,SOD的活性下降且与MDA呈负相关,表明SOD在Hcy诱导的THP-1单核细胞源性巨噬细胞中的抗氧化作用下降。

枸杞多糖对THp-1单核细胞源性巨噬细胞内质网应激的影响

目的研究枸杞多糖（LBP）对THP-1单核细胞源性巨噬细胞内内质网应激反应蛋白及氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）含量变化的影响。方法培养THP-1单核细胞，加入佛波酯Qhorb0112-myristatc13-acetat，PMA）诱导分化成THP-1巨噬细胞，随后，加入不同浓度的LBP（207g／ml、507g／ml、1007g／ml、2007g／m1）孵育24h后收集细胞。用酶联免疫吸附法（ELIsA）检测细胞上清液中OX-LDL及内质网应激反应蛋白（Grp78，CHOP，Xbp-1）的含量变化。结果不同浓度的LBP孵育THP-1巨噬细胞，细胞中的OX-LDL与内质网应激反应蛋白的含量均降低。结论LBP可以降低OX-LDL及内质网应激反应蛋白的含量，对预防动脉粥样硬化的发生发展起到一定的作用。

实验性脉络膜新生血管形成过程中巨噬细胞及单核细胞趋化蛋白-1的作用

背景脉络膜新生血管（CNV）是多种眼底疾病造成视力损害的的主要原因之一。近年来的研究发现单核细胞来源的巨噬细胞（F4／80）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在CNV的形成过程中发挥作用，但它们在新生血管发生早期的动态表达及机制仍不明确。目的观察CNV模型小鼠在CNV发展早期局部组织中巨噬细胞和MCP-1表达的动态变化。方法SPF级8周龄雄性野生C57BL／6小鼠105只，用氪离子激光仪对小鼠的任意一侧眼在距视盘2～3倍视盘直径处的3：00、6：00、9：00和12：00方位进行激光光凝以建立CNV动物模型。按照随机数字表法将CNV小鼠模型随机分不同时间点组，分别于光凝后6、12、24、48和72h各处死小鼠，摘取眼球组织后制备眼球壁组织切片、脉络膜铺片和视网膜色素上皮（RPE）-脉络膜复合体切片，采用苏木精-伊红染色，观察视网膜光凝后眼球壁各层的组织病理学改变和炎症反应情况；采用免疫荧光双标记技术测定小鼠视网膜-脉络膜组织中F4／80和MCP-1的表达和分布；采用免疫荧光技术检测小鼠脉络膜铺片中F4／80的表达和分布；采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠RPE-脉络膜组织中F4／80mRNA的相对表达量；采用ELISA法定量检测小鼠RPE-脉络膜组织中MCP-1质量分数。以光凝后6h组小鼠非实验眼作为正常对照。结果视网膜光凝后6h光学显微镜下可见光凝区Brueh膜、RPE层和脉络膜层均破裂，视网膜外核层连续性中断，随着光凝后时间的延长，可见局部炎症细胞浸润和组织水肿，光凝后72h可见光凝区边缘出现血管内皮细胞增生。光凝后6h可见光凝区RPE及脉络膜组织中F4／80表达，周围组织中可见MCP-1表达，随着光凝后时间延长MCP-1表达强度减弱，而F4／80表达仍增强。正常对照组及光凝后6、12、24、48和72h组RPE-脉络膜复合体中MCP-1蛋白的质量分数分别为（31．25±4．73）、（276．31±4．20）、（331．95±5．86）、（221．24±4．42）、（179．89±4．10）和（130．80±5．90）pg／mg，总体比较差异有统计学意义（F=1416．46，P=0．00），光凝后12h其质量分数达峰值，之后逐渐下降，但光凝后各时间组MCP-1蛋白的质量分数均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。各组RPE-脉络膜复合体中174／80mRNA的相对表达量总体比较差异有统计学意义（F=762．72，P=0．00），光凝后随着时间延长F4／80mRNA的相对表达量逐渐升高，与正常对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论实验性CNV形成早期伴随着明显的炎症反应，趋化因子MCP-1主要在CNV形成的起始阶段发挥作用，而巨噬细胞的聚积和活化在CNV形成和发展过程中起促进作用。

急性冠状动脉综合征患者巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ及炎症相关因子的变化

目的探讨急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ、核因子κB、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的变化及其间的关系。方法选取急性冠状动脉综合征患者48例、稳定型心绞痛患者22例为研究对象,抽取外周动脉血20mL,分离单个核细胞,加巨噬细胞集落刺激因子培养得单核细胞源性巨噬细胞;用CD40配体刺激后,酶联免疫吸附法测定上清液中基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1浓度,逆转录聚合酶链反应检测过氧化体增殖物激活型受体γ、基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达,免疫组织化学法检测核因子κB亚单位P65表达。结果急性冠状动脉综合征组过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达低于稳定型心绞痛组(0.24±0.04比0.39±0.06,P<0.001),核因子κBP65表达高于稳定型心绞痛组(0.42±0.06比0.27±0.02,P<0.001),基质金属蛋白酶9在上清液中的浓度及其mRNA表达明显高于稳定型心绞痛组(231.11±51.47μg/L比126.02±13.26μg/L和0.674±0.11比0.24±0.05,P<0.001),组织型基质金属蛋白酶抑制剂1在上清液中的浓度及其mRNA表达强度高于稳定型心绞痛组(139.80±31.54μg/L比112.25±12.68μg/L和0.42±0.09比0.33±0.06,P<0.05)。过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达与核因子κBP65和基质金属蛋白酶9的表达强度呈负相关(P<0.001),与组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度不相关(P>0.05);核因子κBP65与基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1的表达强度呈正相关(P<0.001)。结论急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ表达下调,核因子κB活性增强,基质金属蛋白酶9和组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达上调;过氧化体增殖物激活型受体γ可能通过调节核因子κB活性而调节基质金属蛋白酶9基因转录;但组织型基质金属蛋白酶抑制剂1表达可能不受过氧化体增殖物激活型受体γ调节。

以肝脏巨噬细胞为靶点治疗肝病

肝内吞噬细胞存在显著的异质性,包括两种发育上截然不同的组群,即库普弗细胞和单核细胞来源的巨噬细胞.库普弗细胞是能自我更新、定居和基本不游走的吞噬细胞,充当维持肝脏内稳态的哨兵.

Hcy对巨噬细胞胆固醇流出的影响及内质网应激机制的研究

目的:探讨同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)对巨噬细胞胆固醇流出的影响及内质网应激的作用机制。方法培养THP-1单核细胞源性巨噬细胞后,分别用不同浓度的Hcy(50、100、200、500 M)处理24h,以未加Hcy的细胞作为对照组,以100 M Hcy+叶酸+维生素B12(VB12)作为干预组。结果 Hcy可以减少巨噬细胞内胆固醇的流出,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),但并不呈量效关系。干预组与100 M Hcy 组相比TC含量降低,ox-LDL及 GRP78、XBP-1、CHOP含量下降,差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy使巨噬细胞内胆固醇的流出受阻,并通过上调ox-LDL含量诱导内质网应激参与了动脉粥样硬化的发生发展。

药物性急性间质性肾炎肾组织炎性细胞特征及其相关性探讨

目的观察药物性急性间质性肾炎（D-AIN）肾组织浸润炎性细胞的特征及意义。方法将重复肾活检的D-AIN患者12例分为肾功能完全恢复组（A组）和未完全恢复组（B组），每组6例。应用免疫组化法观察T淋巴细胞[CD3（＋）]、单核巨噬细胞[CD68（＋）]及B淋巴细胞[CD20（＋）]的浸润、肾间质微血管密度以及细胞外基质的沉积。结果①2组性别、基础肾功能和病理损害程度等无明显差异；B组第2次肾活检时出现肾间质纤维化。②第1次肾活检时，2组均表现为显著的炎症细胞浸润。A组第2次肾活检时各种炎症细胞均明显减少，而B组[CD68（＋）]细胞未受抑制，成为主要的浸润细胞，伴有胶原沉积明显增加。结论持续单核巨噬细胞浸润可能是D-AIN患者病变迁延的重要机制。

肿瘤相关M2型巨噬细胞通过上调VEGFR3的表达促进肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭

目的 :探讨M2型巨噬细胞在肺腺癌A549细胞迁移和侵袭中的作用及其可能涉及的信号通路和作用机制。方法 :采用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导THP-1细胞,使其分化为M2型巨噬细胞。通过Transwell小室建立M2型巨噬细胞与A549细胞的体外非接触式共培养模型,并收集M2型巨噬细胞与A549细胞共培养后的培养液。分别采用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测M2型巨噬细胞与A549细胞共培养液处理A549细胞(CO-A549细胞)后对其迁移和侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测CO-A549细胞中血管内皮生长因子受体(3vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR3)及血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)蛋白表达水平的改变。采用特异性针对VEGFR3的抑制剂MAZ51处理CO-A549细胞后,再用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测抑制VEGFR3表达后CO-A549细胞迁移和侵袭能力的改变;蛋白质印迹法检测对其细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)活性[磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)]的影响。最后,采用RT-PCR法检测MAZ51和丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)/ERK信号通路抑制剂U0126作用于CO-A549细胞后对基质金属蛋白酶2 m RNA表达水平的影响。结果 :佛波酯诱导THP-1细胞分化为M2型巨噬细胞;M2型巨噬细胞与A549共培养液能促进A549细胞的迁移和侵袭能力,并上调VEGFR3和VEGF-C的表达水平(P值均<0.01);抑制VEGFR3表达后,CO-A549细胞的迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)均被降低,p-ERK的表达水平明显下调((P<0.05);MAZ51和U0126作用于CO-A549细胞后基质金属蛋白酶2 m RNA水平均被明显降低(P值均<0.01)。结论:经过分化诱导THP-1细胞获得的M2型巨噬细胞,可通过提高VEGFR3的表达水平而促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与活化MAPK/ERK信号通路有关。

罗格列酮对冠心病患者巨噬细胞表达核因子-κB和金属蛋白酶-9的影响

目的 探讨罗格列酮（Ros）干预在调节冠心病患者外周血单核细胞源性巨噬细胞（MDMs）表达核因子-κB（NF-κB）、金属蛋白酶-9（MMP-19）中的作用及可能机制.方法 本研究为临床病例对照研究.于2007年3月至4月间,从湘雅二医院心内科行冠脉造影患者中,选取急性冠脉综合征患者48例（ACS组）、稳定型心绞痛（SA）患者20例（对照组）为研究对象,排除脑血管意外、急性感染和创伤、肝肾功能不全、肿瘤等患者.提取外周血单个核细胞,用巨噬细胞集落刺激因子刺激,转化为MDMs;随机分亚组后,分别用0μmol/L1μmol/L,10 μmol/L,20 μmol浓度Ros干预48h;RT-PCR检测各亚组MDMs表达过氧化物酶增殖体激活受体-γ（[PPAR-γ）和MMP-9 mRNA,免疫组化法检测NF-κB P65表达强度.用ANOVA检验比较组间及亚组内MDMs在表达PPAR-γ,MMP-9,NF-κB P65的差异.结果 干预前,ACS组MDMs表达PPAR-γmRNA水平低于对照组,表达NF-κB P65及MMP-9mRNA水平高于对照组;Ros干预后,ACS组及对照组PPAR-γmRNA表达明显上调,ACS组PPAR-γ的表达量与Ros浓度呈正变关系;MMP-9 mRNA表达下调,在ACs组其下调程度与Ros浓度呈反变关系;两组NF-κB P65表达量均呈现非剂量依赖性降低.结论 ACS患者外周血MDMs的PPAR-γRNA表达被抑制、NF-γB活性及MMP-9 mRNA表达增强.Ros干预可通过增加PPAR-γ的表达,从而抑制NF-κB活性和MMP-9的表达.

DFMG调节TLR4信号通路对氧化损伤的内皮细胞诱导巨噬细胞增殖的影响

目的 :观察7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)诱导的THP-1(人单核细胞系)源性巨噬细胞(MΦ)增殖的影响及探索其可能的发生机制。方法 :制备溶血性磷脂酰胆碱(LPC)氧化损伤HUVE-12与MΦ共培养模型,浓度梯度DFMG、TLR4特异性拮抗剂(CLI-095)、TLR4特异性激动剂(LPS)干预LPC氧化损伤HUVE-12与MΦ共培养;MTT法观察MΦ的增殖;western blot检测HUVE-12 TLR4蛋白的表达水平。结果 :LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞增殖,DFMG抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,上调TLR4表达进一步促进LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖,下调TLR4表达抑制LPC氧化损伤HUVE-12诱导巨噬细胞的增殖。结论 :DFMG可能通过下调LPC氧化损伤HUVE-12的TLR4蛋白表达水平,抑制炎症反应,从而抑制巨噬细胞增殖。

煤尘致人胚肺成纤维细胞纤维化中胸腺分化抗原-1 DNA甲基化的变化

[目的]观察煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞MRC-5纤维化改变过程中,胸腺分化抗原-1(Thy-1)表达及其DNA甲基化变化。[方法]用含500 nmol/L佛波酯的1640培养液培养人单核细胞,24 h诱导分化后成巨噬细胞;收集100μg/m L煤尘刺激巨噬细胞24 h的培养上清,再刺激MRC-5 24、48、72 h,对照组分别为正常巨噬细胞和正常人胚肺成纤维细胞。酶联免疫分析法测定巨噬细胞上清液中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平和MRC-5中TGF-β1蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法检测胶原蛋白-I、胶原蛋白-III、α-SMA、Thy-1、DNA甲基化转移酶(DNMTs)1、3a、3b m RNA的表达,巢式降落式特异性PCR检测Thy-1DNA甲基化。[结果]煤尘组巨噬细胞上清中IL-6、TGF-β1蛋白表达水平与对照组比较明显增加[(5.542±0.953)ng/m Lvs(2.498±0.456)ng/m L,(462.435±56.620)ng/L vs(329.971±17.911)ng/L](P<0.05);巨噬细胞染尘后上清刺激MRC-5 24、48、72 h,TGF-β1蛋白表达[(223.813±5.723),(263.757±17.254),(326.720±11.263)ng/L]和胶原蛋白I m RNA表达(3.38±0.37,3.87±0.28,4.40±0.10)、胶原蛋白III m RNA表达(1.65±0.12,2.37±0.19,2.66±0.28)、α-SMA m RNA表达(2.41±0.47,4.76±0.10,4.23±0.63)均升高;且均存在时间效应关系,r值分别为0.965,0.876,0.899,0.667(P<0.05);煤尘组MRC-5中Thy-1m RNA表达均低于对照组,随着巨噬上清液作用时间的增加,其表达逐渐降低(0.634±0.014,0.448±0.055,0.352±0.044),呈负相关(r=-0.945,P<0.05);煤尘组MRC-5中DNMTs m RNA表达均较对照组升高(DNMT1:1.57±0.12,2.51±0.33,7.00±0.71;DNMT3a:0.74±0.09,2.89±0.52,3.31±0.53;DNMT3b:1.46±0.18,2.25±0.44,5.33±0.16),且均存在时间效应关系,r值分别为0.924,0.890,0.937(P<0.05);煤尘组Thy-1 DNA甲基化水平较对照组升高(0.506±0.014,0.536±0.017,0.570±0.032),存在时间效应关系(r=0.682,P<0.05)。[结论]煤尘通过单核细胞源性巨噬细胞致人胚肺成纤维细胞纤维化发生,在此过程中Thy-1 DNA发生甲基化,Thy-1m RNA表达降低,可能是煤尘致肺纤维化发生的重要表观遗传机制之一。