不同流式抗体分选小鼠原位肝癌模型中髓系来源抑制性细胞的比较

目的比较不同的流式抗体分选小鼠原位肝癌模型骨髓中的髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)。方法建立BALB/c小鼠原位肝癌移植模型,10d后分离荷瘤小鼠骨髓细胞,分别进行CD11b、Gr-1单色标记及CD11b和Gr-1双色标记后,进行流式分选。比较这三种方式分选的MDSCs纯度、活力,并检测分选的细胞精氨酸代谢酶1(arginase-1,Arg-1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达,并通过活性氧检测试剂盒检测MDSCs活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达。结果三种方法分选到的细胞活力和纯度都大于90%。CD11b标记进行分选操作最为方便,易于统一,但纯度略差;Gr-1标记进行分选时,细胞群不好确定,但纯度高;双色标记进行分选纯度最高。分选的细胞高表达Arg-1、iNOS和ROS。结论三种抗体标记方法均能从小鼠原位肝癌模型骨髓中的分选到纯度高、活力好的MDSCs,而用CD11b单色标记操作方便,易于统一,可作为首选方法。MDSCs的成功分选,对于后续开展MDSCs的生物学和免疫学功能研究奠定了基础。

荷瘤小鼠髓系来源抑制性细胞对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的初步探讨髓系来源抑制性细胞(MDSC)对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法将6周龄SPF级BALB/c雄鼠5只制成4T1乳腺癌细胞成瘤小鼠,用于制备MDSC。6周龄SPF级BALB/c雌鼠30只随机分为正常对照组、哮喘模型组和细胞移植组。采用免疫磁珠技术分选肿瘤小鼠骨髓中的MDSC,在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的诱导下外扩增培养,光学显微镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪(FACS)分析其表型特征。哮喘模型组和细胞移植组予卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏,OVA雾化诱发哮喘。细胞移植组在诱导哮喘的第10 d经尾静脉注入MDSC。HE染色观察小鼠肺部病理改变,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及分类。结果肺组织病理观察显示正常对照组支气管周围基本无炎症细胞浸润;哮喘模型组支气管周围大量炎症细胞浸润,杯状细胞增生;细胞移植组支气管、血管黏膜下和周围肺组织炎症较哮喘模型组减轻。哮喘模型组和细胞移植组BALF细胞总数、嗜酸粒细胞和中性粒细胞计数均显著高于正常对照组(P<0.05),而细胞移植组嗜酸性粒细胞计数则明显低于哮喘模型组(P<0.05)。结论静脉输注荷瘤小鼠MDSC可一定程度上抑制哮喘小鼠气道炎症。

髓系来源的抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌中的表达及其意义

目的:比较小鼠H22原位种植性肝癌模型中髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)和调节性T细胞(Tregs)的表达,确定主要的免疫抑制性细胞。并探讨主要免疫抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌模型中的意义。方法:建立小鼠H22原位种植性肝癌模型,用流式细胞术的方法比较外周血、脾脏、肿瘤组织中MDSCs、Tregs的比例。分析MDSCs与CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、NK细胞、NKT细胞的相关性。通过脾脏切除的方法下调MDSCs的表达,观察对肿瘤存活的影响。结果:MDSCs的比例无论在外周血、脾脏还是肿瘤组织中都显著高于Tregs。MDSCs的比例与CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、NK细胞、NKT细胞呈负相关。下调MDSCs的比例可以显著延长小鼠存活期。结论:小鼠H22原位种植性肝癌中主要的免疫抑制性细胞是MDSCs。MDSCs的高表达预示着不良的小鼠存活期。

明胶海绵微粒TACE治疗Barcelona临床肝癌分期B期肝细胞癌对外周血中髓系来源抑制性细胞的影响

目的探讨应用明胶海绵微粒TACE(GSMs-TACE)治疗Barcelona临床肿瘤(BCLC)分期B期肝细胞癌(HCC)对患者外周血中髓系来源抑制性细胞(MDSCs)的影响。方法对5例临床确诊为BCLC B期的HCC患者(HCC组)行GSMs-TACE治疗。采用流式细胞仪分别检测患者术前、术后10天及术后30天外周血中MDSCs频率(即MDSCs细胞团占HLA-DR^-细胞群的比例)。另收集7名健康志愿者(正常对照组),于HCC组术前同期进行MDSCs频率检测。比较HCC患者术前及术后不同时间MDSCs频率的差异及HCC组术前与正常对照组同期MDSCs频率的差异。结果 HCC组GSMs-TACE术前外周血中MDSCs频率为(30.26±12.12)%,术后10天降至(10.22±3.79%),术后30天降至(7.33±3.38)%,总体差异有统计学意义(P<0.001);两两比较显示术后30天(P<0.001)及术后10天(P=0.011)均明显低于术前。HCC组术前MDSCs频率明显高于正常对照组同期水平[(30.26±12.12)%vs (3.41±1.89)%,t=5.876,P<0.001)。结论 BCLC B期HCC患者经GSMs-TACE治疗后外周血中MDSCs频率显著降低;GSMs-TACE对患者的机体免疫功能具有正向调节作用。

长期精神压力与髓系来源抑制性细胞MDSC的肿瘤免疫抑制功能

临床研究发现,精神心理因素与癌症的发生发展有密切的关系。长期的精神压力会增加癌症的风险,而罹患癌症也往往影响患者的情感和社会功能,从而影响癌症的治疗,一些研究已经证实长期精神压力会促进髓系来源抑制性细胞(MDSC)免疫抑制功能。所以文章主旨就是探讨长期精神压力与MDSC的肿瘤免疫抑制功能的关系。

单核样髓系来源抑制细胞在酒精性肝病进展中的特点研究

目的调查单核样髓系来源抑制细胞(monocytic myeloid derived suppressor cells,m MDSCs)在酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)患者外周血中的特点,探讨其与ALD进展的关系。方法采用流式检测技术对79例ALD患者和23例健康对照者外周血中m MDSCs的频率及其产生精氨酸酶的能力进行调查,并进一步分析m MDSCs频率与患者疾病进展及临床指标的相关性。结果与健康对照相比,ALD患者外周血m MDSCs频率显著升高(P<0.001),且与中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)呈弱正相关(r=0.263,P=0.019)。进一步分析发现,ALD患者精氨酸酶阳性m MDSCs频率显著高于对照组(P<0.001),且同样与NLR呈弱正相关(r=0.305,P=0.015)。结论ALD患者外周血m MDSCs显著增多,且与ALD进展密切相关。本研究为进一步阐明m MDSCs在ALD中的作用机制提供了研究基础。

CD14+HLA-DRlow/-髓系来源抑制性细胞在弥漫大B细胞淋巴瘤中的预后价值

目的:探讨髓系来源抑制性细胞(MDSC)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者预后中的作用。方法:收集52例初诊DLBCL患者和30例健康志愿者外周血,以CD14+HLA-DRlow/-作为MDSC的免疫标记,结合相关临床病理资料分析MDSC在DLBCL预后中的作用。结果:初诊DLBCL患者外周血MDSC水平相比对照组明显升高(P<0.01)。MDSC在DLBCL患者中表达与临床分期、乳酸脱氢酶(LDH)水平及IPI评分相关(P<0.01),与性别、年龄、有无B症状未见明显相关性。单因素分析结果提示,临床分期、血清LDH水平、IPI评分及MDSC水平是影响总生存(OS)不良因素。多因素分析结果提示,IPI评分和MDSC水平是影响患者OS的独立危险因素。结论:MDSC可作为评估DLBCL患者预后的重要指标,有助于评估患者机体免疫与肿瘤微环境的情况。

多发性骨髓瘤患者外周血Tc17细胞、髓系来源的抑制性细胞比例和IL-17水平变化及其意义

目的观察多发性骨髓瘤患者外周血细胞毒性T细胞17(Tc17)、髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)比例和血浆IL-17水平的变化,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞术测算41例多发性骨髓瘤患者(病例组)及19例健康体检志愿者(对照组)外周血Tc17细胞比例及MDSCs比例,采用ELISA法检测两组血浆IL-17。分析Tc17细胞比例与MDSCs比例、IL-17水平的相关性,及Tc17细胞比例与多发性骨髓瘤临床病理参数的关系。结果病例组、对照组外周血Tc17细胞比例分别为3.06%±1.77%、0.75%±0.45%,MDSCs比例分别为6.60%±3.38%、2.53%±0.85%,血浆IL-17水平分别为(45.64±16.93)、(13.10±4.50)pg/m L,病例组外周血Tc17细胞、MDSCs比例和血浆IL-17水平均高于对照组(P均<0.01)。41例多发性骨髓瘤患者外周血Tc17细胞比例与血浆IL-17水平无相关性(R=0.30,P>0.05);Tc17细胞比例与MDSCs比例无相关性(R=0.160,P>0.05)。多发性骨髓瘤患者外周血Tc17细胞比例与患者性别、年龄、ISS分期、LDH水平、血肌酐水平均无明显相关性(P均>0.05)。结论多发性骨髓瘤患者外周血Tc17细胞比例、MDSCs比例及血浆IL-17水平均升高,Tc17细胞比例变化可能与多发性骨髓瘤的发病有关,具体机制有待明确。

脂多糖动员骨髓CD11b^+Gr-1^+髓系抑制细胞及其吞噬氧化型低密度脂蛋白形成泡沫细胞

目的研究小鼠骨髓来源的未成熟CD11b+Gr-1+髓系前体细胞在急性炎性脂多糖刺激下动员释放,及其诱导分化成巨噬细胞样细胞后吞噬氧化型低密度脂蛋白形成泡沫细胞。方法小鼠腹腔注射脂多糖5μg/g体重,24h后采用流式细胞术分析骨髓,脾脏,和外周血中CD11b+Gr-1+髓系前体细胞,CD11b+Gr-1-单核细胞,和CD11b-Gr-1+粒细胞的百分比的变化。体外泡沫细胞形成实验取小鼠骨髓单个核细胞以DMEM培养基+胎牛血清培养,以粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子诱导分化48h,加入100mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育48h以形成脂质负荷泡沫细胞。油红O染色鉴定泡沫细胞。结果 (1)脂多糖腹腔注射可以显著促进CD11b+Gr-1+髓系前体细胞从骨髓动员并释放到外周组织;脾脏和循环中CD11b+Gr-1+髓系前体细胞和CD11b+Gr-1-单核细胞显著增加。(2)从骨髓分离的CD11b+Gr-1+髓系前体细胞以粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子诱导分化后形成单核/巨噬细胞样细胞,继而加入氧化型低密度脂蛋白孵育,可以形成脂质负荷细胞(泡沫细胞)。油红O染色可见泡沫细胞的胞浆中有红染的大型脂滴,核被胞浆内脂滴挤压在一侧。结论急性炎性刺激脂多糖可以动员小鼠骨髓CD11b+Gr-1+髓系前体细胞的向循环和外周组织释放。CD11b+Gr-1+髓系前体细胞可被诱导分化并吞噬氧化型低密度脂蛋白形成泡沫细胞。

膀胱癌来源的外泌体通过促进髓系抑制性细胞的扩增介导毒性T细胞的免疫抑制

目的:探究膀胱癌细胞系MB49来源的外泌体(MB49-Exo)对髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)的影响及后者对MB49抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫功能的调控。方法:试剂盒分离MB49-Exo,并应用透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米粒径颗粒跟踪分析仪(NTA)和Western blot进行鉴定;构建Balb/c小鼠MB49-Exo荷瘤模型,设置PBS作为阴性对照,MB49荷瘤小鼠为阳性对照,使用流式细胞术检测小鼠骨髓与脾脏中MDSCs的表达及分型和脾脏中CD8^(+)T淋巴细胞数量;分离培养小鼠原代骨髓细胞,流式细胞术检测PBS与MB49-Exo对其向MDSCs分化的影响,并将两组不同处理的MDSCs记为PBS-MDSCs组与MB49-Exo-MDSCs组;使用MB49特异性抗原诱导小鼠成熟树突状细胞(DCs),并利用其制备膀胱癌抗原特异性CTL,再使用PBS-MDSCs与MB49-Exo-MDSCs组的MDSCs进行刺激,ELISA检测不同处理条件下CTL对白介素-1(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂染色结合流式细胞术检测CTL的增殖水平,乳酸脱氢酶法检测CTL对MB49的杀伤活性,最后通过Western blot检测两组MDSCs中信号转导因子和转录激活因子3(STAT3)的磷酸化水平(p-STAT3/STAT3)。结果:成功分离获得MB49-Exo;与对照组相比,MB49-Exo不仅能够明显促进荷瘤小鼠骨髓与脾脏中以粒细胞型MDSCs类型为主MDSCs的形成(P<0.001),还能显著减少脾脏中CD8^(+)T淋巴细胞数量(P<0.001);在体外研究中,较PBS-MDSCs组比较,MB49-Exo-MDSCs组中MDSCs的扩增水平明显升高(P<0.001),且其处理的CTL对IL-2和IFN-γ的分泌水平,细胞增殖能力和对MB49的杀伤活性均明显降低(P<0.001);但MB49-Exo-MDSCs组中STAT3的磷酸化水平较PBS-MDSCs组明显升高(P<0.001)。结论:本研究发现来源于膀胱癌细胞的外泌体能通过促进MDSCs的形成来抑制肿瘤特异性CTL的免疫功能,从而协助肿瘤的免疫逃逸,而外泌体的上述作用可能通过促进MDSCs中激活STAT3信号通路发挥作用。

乳腺癌髓系来源抑制细胞与外周血单核细胞的相关性及对预后的影响

目的探讨乳腺癌术后患者肿瘤浸润髓系来源抑制细胞(MDSCs)与外周血白细胞的相关性及对术后无复发生存时间(RFS)的影响。方法收集32例接受根治性手术的乳腺癌患者的临床病理资料及肿瘤浸润MDSCs比例,分析不同临床病理特征患者MDSCs比例差异。Spearman相关分析MDSCs与外周血白细胞的关系。根据MDSCs中位数将患者分为高MDSCs组(≥4.4%,16例)和低MDSCs组(<4.4%,16例),分析2组患者RFS的差异。结果不同临床病理特征患者中,仅Ⅲ期乳腺癌患者肿瘤浸润MDSCs比例高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。肿瘤浸润MDSCs比例与外周血单核细胞计数、单核细胞/淋巴细胞比值(MLR)呈正相关(rs分别为0.405、0.408,均P<0.05)。总体分析结果显示,高、低MDSCs组RFS分别为(102.7±9.1)个月、(107.9±8.3)个月,差异无统计学意义(Log-rankχ2=1.166,P>0.05);分层分析结果显示,在17例无淋巴结转移患者中,高MDSCs组RFS明显较低MDSCs组缩短[平均RFS分别为(97.4±31.9)个月、(117.8±15.9)个月,Log-rankχ2=5.402,P<0.05]。结论乳腺癌肿瘤浸润MDSCs比例与外周血单核细胞计数、MLR呈正相关,无淋巴结转移患者高MDSCs组RFS更差。

髓系来源抑制性细胞对非小细胞肺癌患者预后的影响

目的研究髓系来源抑制性细胞(MDSCs)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后中的作用。方法选取2017年3月至2020年5月中国人民解放军联勤保障部队第九○一医院初治的54例NSCLC患者和健康体检中心30例健康志愿者,以外周血细胞表面分化抗原CD14^(+)HLA-DR^(low/-)作为MDSCs的免疫标记。结合临床资料和治疗前后MDSCs水平的变化,分析MDSCs在NSCLC患者预后中的作用。结果54例初治NSCLC患者中,1例失访,剩余53例NSCLC患者外周血MDSCs水平[(23.56±11.01)%]高于健康体检者[(7.28±2.43)%],差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者外周血中MDSCs水平与临床分期、血清乳酸脱氢酶(LDH)水平及美国东部肿瘤协作组(ECOG)体力状况评分密切关联(P<0.05)。多因素COX比例风险回归结果提示,较高的MDSCs水平和临床分期Ⅲ~Ⅳ期是影响患者预后生存的危险因素[HR(95%CI)分别为2.363(1.158~4.820)、2.048(1.224~3.427),P<0.05]。结论NSCLC患者外周血MDSCs水平愈高,预后愈差。MDSCs水平可作为判断NSCLC患者预后的重要指标。

CD14^+HLA-DR^(low/-)髓系来源抑制性细胞在Graves病中的检测及临床意义

目的:检测Graves病(Graves’disease,GD)患者外周血中髓系来源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cel l s,MDSCs)表达情况,探讨MDSCs在GD发生、发展中的作用。方法:收集52例初诊GD患者和30例健康志愿者外周血,以CD14+H L A-D Rl ow/-作为MDSCs的免疫标记,分别应用流式细胞术及ELISA方法检测外周血中MDSCs的比例及血浆细胞因子Arg-1,IL-6,G-CSF浓度;并分析MDSCs与GD患者甲状腺功能相关性。结果:GD患者外周血MDSCs比例明显升高,相比对照组差异有统计学意义(P<0.05),且GD患者病情平稳后,MDSCs水平较治疗前明显下降(P<0.05);MDSCs水平与GD患者甲状腺功能未见明显相关性;GD患者外周血浆A rg-1水平未见明显升高,IL-6及G-CSF浓度显著升高(P<0.05)。结论:GD患者外周血MDSCs升高,可能是GD发生和发展的重要因素。

急性冠状动脉综合征患者外周血中髓系来源抑制性细胞的表达水平研究

目的探讨单核细胞型髓系来源抑制性细胞(M-MDSC)及相关细胞因子在急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中的表达水平。方法采集2020年1月至2021年1月安徽省立医院心血管内科的62例初诊ACS患者、33例稳定性心绞痛(SAP)患者和40例健康对照者(HC)的外周血,采用流式细胞术检测M-MDSC的表达水平;检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素6(IL-6)水平;检测精氨酸酶-1(Arg-1)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平。分析M-MDSC在ACS、SAP和HC组中的表达水平,以及与GM-CSF、IL-6、Arg-1和iNOS水平的相关性。比较ACS患者治疗前后,M-MDSC及相关细胞因子的水平变化。结果与SAP组和HC组比较,ACS组患者外周血中M-MDSC、GM-CSF、IL-6和Arg-1 mRNA水平显著升高(均为P<0.01)。而急性ST段抬高型心肌梗死患者外周血中M-MDSC水平又较急性非ST段抬高型心肌梗死和不稳定性心绞痛患者显著升高(F=28.502,P=0.001)。M-MDSC水平与GM-CSF、IL-6和Arg-1 mRNA表达水平均呈正相关(均为P<0.01)。经治疗后,ACS患者外周血中M-MDSC、GM-CSF、IL-6和Arg-1 mRNA表达水平均明显下降(均为P<0.01)。结论M-MDSC在ACS患者外周血中表达水平显著升高,参与疾病的免疫调控,有望成为ACS调控的新靶点。

髓系来源抑制性细胞对非小细胞肺癌患者疾病进展和预后的评估价值

目的探讨髓系来源抑制性细胞(MDSC)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达水平,以及与疾病进展和预后的关系。方法收集62例NSCLC患者为研究对象(实验组),选取同期30例健康体检者为对照组。采用流式细胞术检测两组受试者外周血MDSC的表达水平;分析MDSC与初诊NSCLC患者年龄、性别、TNM分期、病理分型、乳酸脱氢酶(LDH)、淋巴结转移及总生存期(OS)的相关性。结果NSCLC患者外周血MDSC表达水平明显升高(P<0.05);MDSC表达水平与NSCLC患者TNM分期、LDH水平及有无淋巴结转移密切相关(均P<0.05);初诊NSCLC患者经外科手术治疗后,MDSC表达水平较手术前下降(P<0.05)。NSCLC患者MDSC水平与OS呈负相关(P<0.05),且高表达MDSC的NSCLC患者OS低于低表达患者(P<0.05)。TNM分期、淋巴结转移及MDSC水平是影响OS的不良因素和独立危险因素。结论MDSC在NSCLC患者中处于高表达状态,并且与肿瘤进展密切相关;此外,MDSC可以作为评估NSCLC患者疗效及预后的新指标。

外周血与骨髓组织髓系来源抑制细胞在多发性骨髓瘤患者诊断中的价值比较

目的比较不同来源髓系来源抑制性细胞(MDSCs)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的诊断价值.方法收集本院2018年1月至2019年6月符合诊断标准的MM患者31例作为研究对象,分别取外周血(PB)及骨髓(BM)组织进行流式细胞术分选,MDSCs表型为CD11bdimCD14-;CD15+CD33+细胞为G-MDSC亚群,CD15-CD33+细胞为M-MDSC亚群.比较这两种来源的M-MDSC、G-MDSC纯度.结果PB组M-MDSC%(0.062±0.022)显著低于BM组(0.291±0.093),差异具有统计学意义(P=0.0223);G-MDSC%与Total MDSC%两组差异均无统计学意义(P>0.05).外周血标本分群较为理想;骨髓组织标本G-MDSC占比大,其中混杂大量早期粒细胞的干扰,特异性低,不利于分析.结论MM患者外周血来源的M-MDSC较骨髓来源更具诊断价值.

特发性膜性肾病患者外周血髓系来源抑制性细胞水平研究

目的探究单核细胞型髓系来源抑制性细胞(monocytic myeloid-derived suppressor cells, M-MDSC)及相关细胞因子在特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, iMN)患者外周血中的表达水平以及与临床指标相关性。方法收集2018年1月至2022年12月于安徽医科大学第一附属医院和安徽省霍山县医院52例初诊iMN患者为实验组。另外, 收集40例健康志愿者作为对照组。采用流式细胞仪检测两组研究对象外周血中M-MDSC水平, 酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测白细胞介素(interleukin, IL)-6和磷脂酶A2受体(hospholipase A2 receptor, PLA2R)水平, 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)方法检测精氨酸酶(arginase-1, Arg-1)mRNA水平。并分析M-MDSC与iMN病情活动度和治疗相关性。结果与对照组相比, 初诊iMN组患者外周血中M-MDSC表达水平明显升高, 差异具有统计学意义[(23.25±5.72)%比(9.12±4.23)%, t=18.85, P<0.001]。根据iMN患者病理分期, Ⅲ-Ⅳ组患者外周血中M-MDSC表达水平与Ⅰ-Ⅱ组相比明显升高, 差异具有统计学意义[(25.12±5.21)%比(19.35±4.71)%, t=4.85, P<0.01]。IL-6和Arg-1 mRNA在初诊iMN患者外周血中表达水平相比对照组明显升高, 差异具有统计学意义[(43.16±7.67)pg/mL比(6.31±2.23)pg/mL;(6.12±1.58)比(1.53±0.52);t值分别为11.58、7.22, P值均<0.05]。PLA2R以及24 h尿蛋白作为评估iMN患者疾病活动度的指标, 其在初诊iMN患者外周血中表达水平相比对照组亦明显升高, 差异具有统计学意义[PLA2R:(17.21±4.13) ng/L比(2.15±0.71) ng/L;尿蛋白:(4.81±1.26)g/24 h比(0.08±0.02)g/24 h;t值分别为18.86、50.82, P值均<0.001]。52例初诊iMN患者中, M-MDSC水平与IL-6、PLA2R以及24 h尿蛋白表达水平呈正相关(r值分别为0.613、0.502、0.637, P值均<0.05)。治疗前相后相比, M-MDSC水平显著下降, 差异具有统计学意义[(23.25±5.72)%比(10.18±3.27)%, t=6.84, P<0.01]。结论 iMN患者外周血中M-MDSC表达水平升高, 并可能成为疾病活动性的潜在生物标志物和治疗靶点。

髓源抑制性细胞通过抑制Th2细胞反应参与干燥综合征的实验研究

目的干燥综合征(SS)患者和模型小鼠均存在髓源抑制性细胞(MDSCs)数量增加和功能改变,但是MDSCs参与SS的具体机制不明。文章观察SS小鼠接受MDSCs过继移植和清除MDSCs后颌下腺病理结构和功能以及唾液流量的变化,探索MDSCs作用机制。方法 4周龄NOD小鼠(未出现SS样症状)脾MDSCs,制成单细胞悬液。将小鼠分为PBS组(注射等量的PBS)和MDSCs组(移植MDSCs 1×10~6个/鼠),每组5只。将10周龄NOD小鼠分为anti-Gr1组(腹腔注射anti-Gr1抗体)和Rat IgG2b组(注射等量Rat IgG2b同型对照抗体),每组5只。分别检测各组小鼠唾液流量,并比较颌下腺淋巴细胞浸润情况;采用流式细胞术检测小鼠MDSCs和Th2细胞数量。结果与PBS组比较,MDSCs移植组小鼠外周血和脾脏Th2细胞比例及唾液流量明显降低[(0.67±0.13)%vs (0.16±0.07)%,(0.80±0.13)%vs (0.37±0.04)%,(78.70±6.80)μL vs(33.85±11.25)μL)],差异有统计学意义(P<0.05)。与PBS组比较,MDSCs移植组小鼠外周血和脾MDSCs细胞数目显著增加[(1.54±0.14 vs 5.47±1.54)×10~5,(1.09±0.23 vs 4.50±1.04)×10~5)],差异有统计学意义(P<0.05)。与Rat IgG2b组相比,anti-Gr1组外周血和脾Th2细胞比例及唾液流量明显增加[(0.55±0.09)%vs (0.92±0.10)%,(0.63±0.08)%vs (1.10±0.06)%,(56.48±14.18)μL vs (121.20±10.34)μL)],差异有统计学意义(P<0.05)。与Rat IgG2b组比较,anti-Gr1组小鼠外周血和脾MDSCs细胞数目显著降低[(1.53±0.12)×10~5个vs(0.35±0.16)×10~5个,(2.53±1.10)×10~5个vs(0.91±0.07)×10~5)个],差异有统计学意义(P<0.05)。MDSCs移植加重颌下腺淋巴细胞浸润,而anti-Gr1抗体清除小鼠体内MDSCs减轻颌下腺淋巴细胞浸润。结论 MDSCs通过抑制Th2细胞反应参与了SS的发病。抑制MDSCs进而增加其调控的Th2细胞反应,有望成为SS患者治疗的新方向。

LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响

目的:通过慢病毒载体构建亮氨酸羟基甲基转移酶1(LCMT1)过表达THP-1细胞株,探讨LCMT1对THP-1细胞和THP-1源性巨噬细胞M2型极化的调控作用。方法:利用慢病毒技术,构建LCMT1过表达载体。设置blank组、OE-control组和OE-LCMT1组。荧光显微镜观察各组细胞的绿色荧光,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测LCMT1 mRNA和蛋白表达水平以及PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平。将THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导分化为M2型巨噬细胞。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化标志物c型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达。结果:与blank组相比,OE-control和OE-LCMT1组表达绿色荧光,OE-control组的增殖曲线下降(P<0.001),LCMT1和PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与OE-control组相比,OE-LCMT1组增殖曲线下降(P<0.05),LCMT1和PP2Ac甲基化蛋白表达升高(P<0.05),PPME-1和PP2Ac去甲基化蛋白表达降低(P<0.01),总PP2Ac蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与Blank M0组相比,Blank M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平升高(P<0.05);与OE-control M2组比较,OE-LCMT1 M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平降低(P<0.05)。结论:成功构建了LCMT1过表达的THP-1细胞株,LCMT1过表达可抑制THP-1细胞的增殖;维持总PP2Ac蛋白水平,增强PP2Ac甲基化并伴随PPME-1和PP2Ac去甲基化水平降低;下调M2型巨噬细胞极化标志物的表达,抑制M2型巨噬细胞极化。

中间型单核细胞及TREM-1在点滴状银屑病中的表达

目的:检测点滴状银屑病患者中间型单核细胞比例及其细胞表面触发受体(TREM-1)的表达,探讨其在点滴状银屑病疾病过程中的作用。方法:采集28例点滴状银屑病患者和24例健康对照者外周血,流式细胞术检测中间型单核细胞及TREM-1+中间型单核细胞比。ELISA检测血清游离TREM-1(sT REM-1)浓度。计算中间型单核细胞与PASI评分及抗链球菌溶血素O(ASO)的相关性。结果:点滴状银屑病患者中间型单核细胞比例及sT REM-1水平分别为13.5±4.8%和277.8pg/mL,显著高于健康对照组的3.4±1.1%和162.6 pg/mL,(P<0.05);患者组TREM-1平均荧光强度及阳性中间型核细胞频率分别为24.8±7.2和80.4±6.8%,低于健康对照组的35.3±5.1和95.6±5.7%,(P<0.05)。患者中间型单核细胞比例与PASI,ASO水平正相关。结论:中间型单核细胞及其表面TREM-1受体可能参与点滴状银屑病的疾病过程。