尿石素B对骨髓来源巨噬细胞向破骨细胞分化的调控机制

背景:尿石素B在机体免疫应答中起重要调节作用,具备抗炎、抗氧化和抗癌的特性,并能抑制Raw 264.7细胞向破骨细胞分化,但其对于骨髓来源的巨噬细胞向破骨细胞分化的具体作用及机制尚未阐明。系统性研究破骨细胞过度活化的调控机制,有助于探索新的治疗靶点,筛选研发更安全、有效的治疗药物,为阻断破骨细胞过度活化提供新思路。目的:利用骨髓来源的巨噬细胞建立体外破骨细胞分化模型,探究尿石素B对核因子κB受体活化因子配体介导破骨细胞分化的影响,并系统性分析其作用机制。方法:(1)采用CCK-8法筛选尿石素B干预骨髓来源巨噬细胞的安全工作浓度;(2)用不同浓度(0,12.5,25,50μmol/L)尿石素B干预骨髓来源的巨噬细胞向破骨细胞分化,进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞的数目及面积大小;(3)不同浓度(0,12.5,25,50μmol/L)尿石素B干预骨髓来源巨噬细胞的破骨分化,通过实时荧光定量PCR检测破骨特异性基因的相对表达水平;(4)蛋白印迹实验观察尿石素B对骨髓来源巨噬细胞P65、ERK信号通路的影响;(5)蛋白印迹实验检测尿石素B对骨髓来源巨噬细胞的破骨分化关键转录因子活化T细胞核因子1和c-Fos的影响。结果与结论:(1)50μmol/L及以下浓度的尿石素B对骨髓来源巨噬细胞的增殖无影响,能显著抑制骨髓来源巨噬细胞的破骨分化;(2)尿石素B主要在破骨形成前中期抑制骨髓来源巨噬细胞的破骨分化;(3)尿石素B可下调骨髓来源巨噬细胞中破骨特异性基因的相对表达水平;(4)50μmol/L的尿石素B抑制骨髓来源巨噬细胞的P65和ERK磷酸化水平,进而抑制破骨细胞形成;(5)50μmol/L的尿石素B抑制骨髓来源的巨噬细胞中破骨分化关键转录因子活化T细胞核因子1和c-Fos的表达;(6)提示尿石素B通过P65/ERK信号轴下调破骨关键转录因子活化T细胞核因子1、c-Fos的表达,抑制下游破骨特异性基因的表达,从而抑制骨髓来源的巨噬细胞向破骨细胞分化。

慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞的表达及其与肝纤维化严重程度的关系。方法选取2018年4月—2022年11月期间公安县人民医院诊治的慢性丙型肝炎患者83例,同期健康人64例,比较两组临床特征、肝组织中CD163表达、血清CD163浓度、CD14^(+)细胞比例以及表达不同种类细胞因子的CD14^(+)细胞比例。结果慢性丙型肝炎组(n=82)ALT水平和AST水平分别为(84.6±9.1)U/L和(69.3±7.2)U/L,显著高于健康对照组(n=64)的(28.4±1.7)U/L和(22.5±6.9)U/L(P<0.05);慢性丙型肝炎患者中F<2者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为38.2±4.7、(73.6±2.1)μg/L和(73.7±3.2)%,显著高于健康对照组的12.5±1.3、(50.1±2.6)μg/L和(61.0±8.4)%,F≥2患者CD163^(+)细胞数量、血清CD163浓度和CD14^(+)细胞比例分别为74.9±8.0、(95.4±9.8)μg/L和(79.2±5.5)%,显著高于健康对照组和F<2患者。F<2慢性丙型肝炎患者表达IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(4.2±1.2)%、(3.8±1.1)%、(3.8±1.0)%、(3.7±1.3)%、(4.0±1.4)%和(6.7±3.6)%,显著高于健康对照组的(0.9±0.1)%、(1.1±0.2)%、(1.8±0.4)%、(1.6±0.6)%、(1.7±0.7)%和(4.6±2.1)%,F≥2患者表达IL-2、IFN-γ、IL-8和TNF-α的CD14^(+)细胞比例分别为(2.2±0.8)%、(2.1±0.5)%、(5.6±2.0)%和(6.9±3.2)%,显著高于健康对照组,表达IL-8的CD14^(+)细胞比例为(5.6±2.0)%,显著高于F<2患者。结论CD14^(+)单核细胞和CD163^(+)巨噬细胞参与了慢性丙型肝炎患者肝纤维化的进程。

辣椒来源外泌体样纳米囊泡通过ERK1/2通路拮抗巨噬细胞向泡沫细胞转化

[目的]研究辣椒来源外泌体样纳米囊泡(CDELN)抑制氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1源性巨噬细胞泡沫化的作用机制。[方法]通过组织破碎、差速/超速离心及蔗糖密度梯度离心等步骤,分离提纯CDELN。利用ox-LDL刺激THP-1源性巨噬细胞24 h建立泡沫细胞模型,并进一步研究CDELN对巨噬细胞泡沫化的作用及其机制。采用激光共聚焦显微镜检测THP-1源性巨噬细胞对CDELN和人DiL标记乙酰化低密度脂蛋白(DiL-ac-LDL)的摄取;采用油红O染色检测细胞内胆固醇含量,通过分析细胞油红O染色阳性面积评估细胞内脂质累积影响;RT-qPCR和Western blot检测清道夫受体A(SRA)、脂肪酸转运蛋白(CD36)、凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、ATP结合盒转运体A1/G1(ABCA1/G1)以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路p-ERK、p-p38 MAPK和p-c-Jun的mRNA和蛋白表达水平。[结果]CDELN是大小均一、具有双层膜结构、富含蛋白质和核酸的外泌体样纳米囊泡,能被巨噬细胞摄取。DiL-ac-LDL摄取实验提示CDELN可抑制巨噬细胞的胆固醇摄取。油红O染色实验提示CDELN可减轻ox-LDL诱导下的胞内胆固醇蓄积。RT-qPCR及Western blot显示,CDELN能够显著降低ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)、SRA、CD36、LOX-1的mRNA水平,以及降低p-ERK、SRA、CD36、LOX-1蛋白水平。加入p-ERK激动剂Yoda1后,CDELN的保护作用被明显逆转。[结论]CDELN可显著抑制巨噬细胞泡沫化,该作用可能与抑制MAPK通路ERK1/2的磷酸化水平有关。

Lyz2+单核-巨噬细胞在多囊卵巢综合征小鼠子宫中的谱系示踪

目的在骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠上建立多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型,通过谱系示踪方法揭示巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中的分布特点。方法利用Cre/LoxP系统构建骨髓来源巨噬细胞谱系示踪小鼠,分别构建Td-tomato^(flox/flox)小鼠和Lyz2^(Cre)工具小鼠,使两者进行交配,得到Lyz2^(Cre)Tdtomato^(flox/flox)小鼠,其骨髓来源单核-巨噬细胞均被标记上红色荧光蛋白(Td-tomato),再通过来曲唑联合高脂饲料构建PCOS小鼠模型,通过免疫荧光多标结合激光共聚焦共定位方法检测PCOS小鼠子宫中巨噬细胞的分布及数量。结果成功构建了骨髓来源单核-巨噬细胞谱系示踪小鼠(Lyz2^(Cre)Td-tomato^(flox/flox)),并在谱系示踪小鼠上成功构建了PCOS小鼠模型。PCOS小鼠子宫的HE染色结果显示结构异常;免疫荧光多重标记检测发现,在PCOS小鼠子宫中巨噬细胞分布在子宫外膜、肌层、内膜,且M2型巨噬细胞数量增多(P<0.05)。结论本研究构建了肥胖型PCOS小鼠模型,发现骨髓来源的M2型巨噬细胞在PCOS小鼠子宫中增多。

达格列净对ApoE^(-/-)小鼠单核巨噬细胞系统及动脉粥样硬化的影响

目的:研究达格列净对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的影响,探讨其抗AS作用的可能机制。方法:16只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饮食喂养8周形成AS模型后,随机分为对照组和实验组,每组8只,实验组予达格列净干预,对照组予同等剂量的生理盐水,两组干预4周后取材。油红O染色检测主动脉及主动脉瓣AS斑块面积比例;流式细胞术分析循环中单核细胞亚群的比例(Ly6G-CD11b+Ly6C hi和Ly6G-CD11b+Ly6C lo);免疫荧光染色和共聚焦显微镜成像检测斑块内的巨噬细胞和增殖的巨噬细胞(F4/80和Ki67双阳性细胞);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平。结果:实验组与对照组比较有降低主动脉及主动脉瓣斑块负荷的作用,降低循环中Ly6C^(hi)单核细胞比例,降低斑块内增殖巨噬细胞比例,降低LDL-C水平,且具有升高HDL-C作用。结论:达格列净可减轻ApoE^(-/-)小鼠AS负荷的作用,可能与调节单核细胞亚群和血脂代谢相关。

依达拉奉对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药组(40μg/mL EDA)。采用Griess法检测细胞中一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞中JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平。结果 与0μg/mL比较,20,40,80,160μg/mL EDA处理下细胞存活率无显著变化(P <0.05)。与模型组比较,给药组细胞中NO,PGE2,IL-1β,IL-18,TNF-α,ROS水平均显著降低(P <0.05);IL-1β与IL-18 mRNA及蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3均显著降低(P <0.05)。结论 EDA可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活而抑制RAW264.7细胞的炎性反应。

妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞来源的树突样细胞刺激T细胞作用的比较

目的:观察不同妊娠阶段胎盘源性树突样细胞刺激T细胞活化增殖特点的差异,为分析胎盘免疫细胞在妊娠耐受和分娩发动中的可能作用提供线索。方法:机械分离中、晚期胎盘中的单核-巨噬细胞,以内皮逆穿越系统诱导其分化为树突状细胞(DC)。将不同妊娠阶段胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞与同种异体T细胞共育,以CCK-8法检测其激发同种异体T细胞增殖能力及其刺激同种异体T细胞所产生的胞内细胞因子,并用流式细胞仪分析DC样细胞表型。结果:足月胎盘来源的单核-巨噬细胞经过内皮单层正逆双向穿越诱导培养后,细胞出现树突状形态改变,并高表达与树突状细胞免疫激活有关的细胞表面标志物CD80、CD86、HLA-DR。足月妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源DC样细胞具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,同种异体淋巴细胞活化时细胞内IFN-γ+亚型的表达十分明显,但几乎不出现IL-10+亚型。但相比之下,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞刺激同种异体T细胞增殖的能力却很弱(P<0.05),被刺激的同种异体T细胞中CD8-(即CD4+)亚群IFN-γ+细胞显著减少(P<0.05),而CD8-和CD8+亚群中IL-10+细胞亚群却显著增多。对细胞的表型分析结果显示,中期妊娠胎盘单核-巨噬细胞来源的DC样细胞CD80、CD86及HLA-DR的表达均显著低下(P<0.05)。结论:不同妊娠时期胎盘单核-巨噬细胞分化形成具有免疫激活作用的树突状细胞的能力不同,提示其生物学特性有所不同,其可能与妊娠耐受和分娩发动有关。

急性脑梗死患者入院时Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的相关性

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者入院时同型半胱氨酸(Hcy)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)水平与单核巨噬细胞极化的相关性。方法选择2020年8月至2022年8月该院收治的107例ACI患者为病例组,另选取同期体检健康者50例为对照组,比较2组入院时血清Hcy、HMGB1、TLR4水平,比较2组单核巨噬细胞极化情况[M1型细胞比例、M2型细胞比例、M1/M2比值、M1型极化标志物(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α)、M2型极化标志物(白细胞介素-10、转化生长因子-β)],分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与单核巨噬细胞极化的关系,分析ACI患者Hcy、HMGB1、TLR4水平与ACI患者预后的关系。根据ACI患者预后情况,将患者分为预后良好组和预后不良组,比较其血清Hcy、HMGB1、TLR4水平。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析Hcy、HMGB1、TLR4对ACI预后的预测效能。结果与对照组比较,病例组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,病例组M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α水平明显升高(P<0.05),白细胞介素-10、转化生长因子-β水平明显降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清Hcy、HMGB1、TLR4水平与M1型细胞比例、M1/M2比值、白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α水平呈正相关(P<0.05),与白细胞介素-10、转化生长因子-β水平呈负相关(P<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清Hcy、HMGB1、TLR4水平明显升高(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,Hcy、HMGB1、TLR4联合预测ACI预后的效能较高,其曲线下面积、灵敏度、特异度依次为0.840、77.80%、80.00%。结论Hcy、HMGB1、TLR4在ACI患者外周血中呈高表达,其水平与单核巨噬细胞极化及预后关系密切,有望成为ACI临床诊治的生物标志物。

人脐带血来源树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞体外培养及鉴定

目的建立从人脐带血体外诱导扩增树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞的方法。方法从正常人脐带血中分离出单核细胞,经3种细胞因子—重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh GM-CSF)、重组人白细胞介素4(rh IL-4)和重组人肿瘤坏死因子(rh TNF-α)联合诱导培养,7 d后收获细胞,并利用光学显微镜、免疫组化的方法进行鉴定。结果培养收获了高纯度的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞,细胞高水平表达CD1a、CD86、CD68和CD14。结论人脐带血单核细胞经细胞因子诱导培养可以得到大量的成熟树突状细胞、巨噬细胞和单核细胞。

参与到骨髓来源巨噬细胞NLRP3炎症小体经典激活途径的生物力学网络

目的NLRP3炎症小体因其参与多种细胞过程而受到广泛关注。尽管如此,经典NLRP3炎症小体组装的详细内容仍未揭示。方法本研究旨在通过整合RNA-seq、生物信息学和分子动力学分析来阐明骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中NLRP3炎症小体经典激活所涉及的各个阶段的转录组学内容。结果通过形态学观察、功能评估和蛋白质检测验证了NLRP3炎症小体的经典激活模型。随后,将细胞分为3组并进行RNA-seq:对照组、priming(LPS:500 ng/m L,4 h)和activation(LPS:500 ng/m L,4 h;ATP:5 m M,1 h)。共鉴定出9116个差异表达基因。这些基因对生物力学、细胞代谢、离子通量、翻译后修饰和细胞器等多种途径发挥调控作用。随后,通过整合文献和数据库筛选,鉴定出6个关键基因(Sirt3、Stat3、Syk、Trpm2、Tspo和Txnip)。最后,获得这6个关键蛋白的三维结构。结论研究结果为经典NLRP3炎症小体组装的转录组学水平的理解提供了新的见解。

妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞来源树突样细胞刺激脐血T淋巴细胞的特性比较

目的:观察妊娠不同阶段胎盘来源的树突样细胞(DC样细胞)刺激脐血淋巴细胞增殖活化特点的差异,进一步研究胎盘免疫细胞在妊娠耐受及分娩发动中的作用。方法:机械分离妊娠中、晚期胎盘中的单个核细胞,用磁珠分离法获取CD14+细胞,以内皮(逆)穿越系统诱导其分化为DC样细胞,并用流式细胞仪分析细胞表型,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-12、IL-10水平,CCK-8法检测其激发脐血淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测其所刺激的脐血T淋巴细胞内细胞因子。结果:足月妊娠胎盘来源的经诱导的细胞高表达与免疫激活有关的细胞表面标志物CD80、CD86;培养上清中检出较高水平的IL-12,极低水平的IL-10,具有较强的刺激脐血淋巴细胞增殖的能力;能刺激脐血T淋巴细胞分化形成较多的IFN-γ产生细胞,而分化形成的IL-10产生细胞则较少。但相比之下,中期妊娠胎盘来源的经诱导的细胞则低表达CD80、CD86(P<0.05),培养上清中检出较高水平的IL-10(P<0.05),但检测出的IL-12浓度极低(P<0.05),刺激脐血淋巴细胞的能力较弱(P<0.05);刺激脐血T淋巴细胞分化形成较多的IL-10产生细胞(P<0.05),而分化形成的IFN-γ产生细胞较少(P<0.05)。结论:妊娠不同时期胎盘来源的单核-巨噬细胞分化形成的DC样细胞免疫学特性不同,高表达CD80、CD86、IL-12的DC样细胞细胞在妊娠免疫耐受中止及分娩发动中发挥着一定的作用,而低表达CD80、CD86,高表达IL-10的细胞可能参与了妊娠过程中的免疫耐受。

PPARγ基因转录与单核巨噬细胞来源的泡沫细胞形成

目的 :探讨PPARγ基因转录在动脉粥样病变局部的作用。方法 :观察动脉粥样硬化局部PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)分布的关系 ;分析PPARγ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞SRA、PPARγmRNA表达、肿瘤坏死因子α(TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放的影响。结果 :PPARγ基因表达与巨噬细胞来源的泡沫细胞、清道夫受体A(SRA)的分布相似 ;PPARγ配体在增加巨噬细胞PPARγmRNA表达的同时 ,显著抑制了ox LDL介导的巨噬细胞SRAmRNA表达和TNF α、MMP 9的释放。结论

PPARα、γ配体对单核细胞来源的巨噬细胞的作用观察

目的 探讨PPARα和γ配体在动脉粥样硬化病变局部的作用。方法 观察PPARα和γ配体对氧化低密度脂蛋白 (ox LDL)介导的巨噬细胞清道夫受体A(SRA)基因表达、肿瘤坏死因子 (TNF α)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)释放、细胞增殖与凋亡的影响。结果 中低浓度的PPARα和γ配体不但增强ox LDL介导的巨噬细胞TNF α、MMP 9表达 ,而且有促细胞凋亡和抗细胞增殖的作用 ;PPARγ配体不但能显著增加巨噬细胞PPARγmRNA表达 ,而且还能抑制ox LDL介导的巨噬细胞SRA。结论 PPARα和γ基因激活可能有抗炎和抗细胞增生的作用 ,后者可能还有助于减少粥样斑块脂质内容。

猪PRRS抗性筛选单核细胞来源巨噬细胞模型的建立

采用密度梯度离心法分离猪外周血单核细胞(PBMCs),通过添加GM-CSF刺激使PBMCs转化为外周血单核细胞来源巨噬细胞(MDMs);比较了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MDMs和肺泡巨噬细胞(PAMs)不同时间的病毒载量及病毒TCID50,研究了PRRSV体外感染猪MDMs后复制和滴度的变化规律。结果表明:PBMCs转化的MDMs具有很好的墨汁吞噬能力,MAC387标记阳性;GM-CSF刺激PBMCs转化为MDMs的最适质量浓度为20 ng.mL-1,刺激时间为72 h时MDMs转化率最高;PRRSV体外感染12 h时MDMs中病毒载量达到最高值,随后迅速下降;细胞上清液的病毒滴度在12～24 h进入平台期,然后转入衰亡期,与PRRSV在PAMs中增殖趋势相似。本试验建立的PRRS抗性筛选MDM模型,具有受检猪只损伤小、简便易行的特点,可代替PAM细胞模型用于评价猪对PRRS的抗性。

小鼠骨髓和腹膜腔来源巨噬细胞的功能差异

目的研究骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞的功能差异,为免疫学研究和免疫调节药物评价中巨噬细胞的选择提供依据。方法利用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓单核细胞分化为巨噬细胞,利用巯基乙酸盐培养基诱导腹膜炎获得腹膜腔巨噬细胞,两种巨噬细胞在分别经过酵母多糖(zymosan)、脂多糖(LPS)、雷西莫特(R848)和非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡聚体(CpG)四种Toll样受体(TLR)配体诱导后,实时荧光定量PCR测定巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,ELISA检测巨噬细胞培养上清液TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1含量,流式细胞术分析细胞表面共刺激分子CD80、CD86、CD40和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)的表达。结果两种巨噬细胞在经过不同TLR配体诱导后,炎症因子和趋化因子的mRNA表达水平均有不同程度的增加,腹膜腔巨噬细胞TNF-α、IL-6、MIP-1α、MCP-1分泌水平以及表面CD86和MHCⅡ表达显著高于骨髓来源巨噬细胞。结论骨髓来源巨噬细胞和腹膜腔巨噬细胞均表达炎症因子、趋化因子、共刺激分子和MHCⅡ,腹膜腔巨噬细胞具有更加完整的巨噬细胞功能,在免疫学研究和免疫调节药物评价中可以优选腹膜腔巨噬细胞。

由mtDNA清除THP-1细胞构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化

目的 观察由线粒体DNA(mtDNA)清除人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)构建的人单核/巨噬细胞系Rho0细胞周期、凋亡、吞噬功能、炎症因子表达变化。方法 取THP-1细胞,使用溴化乙锭(EB)清除细胞中mtDNA,构建新的人单核/巨噬细胞Rho0。取Rho0细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Rho0-LPS组、Rho0-溶媒组);另取未经EB处理的THP-1细胞,分别给予1 mg/mL LPS或溶媒刺激24 h(计为Control-LPS组、Control-溶媒组);采用流式细胞术PI染色检测各组细胞周期,流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测算各组凋亡细胞数,Red-Zymosan染料吞噬实验评估各组细胞吞噬功能(平均荧光强度)。取Rho0细胞(Rho0组)和取未经EB处理的THP-1细胞(Control组),采用RT-qPCR法检测炎症因子(IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 mRNA)。结果 与Control-溶媒组比较,Rho0-溶媒组G0~G1期、S期、G2/M期比例降低及细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强,Control-LPS组细胞凋亡数增加和平均荧光强度增强(P均<0.05);与Rho0-溶媒组比较,Rho0-LPS组G0~G1期比例降低及细胞凋亡数增加(P均<0.05)。与Control组比较,Rho0组IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10 mRNA表达升高(P均<0.05)。结论 清除mtDNA可导致Rho0细胞周期停滞,促进细胞凋亡,增强细胞吞噬功能及促炎功能。

CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞上PD-1的表达对ARDS患儿呼吸支持治疗临床转归的预测

目的:探讨CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞上程序性死亡受体1(PD-1)的表达对呼吸支持治疗的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿临床转归的预测价值。方法:回顾分析2014年4月至2020年3月三二〇一医院新生儿科130例ARDS患儿的临床资料。患儿治疗28 d后,根据患儿存活状态,将其分为存活组和死亡组,比较两组患儿治疗前CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞上PD-1水平,分析影响患儿结局的独立危险因素及CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞上PD-1水平预测患儿死亡的价值。结果:死亡组CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞比例和PD-1平均荧光浓度(MFI)高于存活组(P<0.05)。多因素Logistics回归分析显示,胎龄、低白蛋白血症、出生5 min的Apgar评分、CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞数PD-1表达均属于ARDS死亡的独立危险因素(P<0.05)。CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞预测患儿死亡的ROC曲线下面积为0.777(95%CI:0.698~0.855,P=0.000),预测死亡的截断值为0.105%,灵敏度和特异度为81.96%和55.67%。T细胞上PD-1预测患儿死亡的ROC曲线下面积为0.756(95%CI:0.674~0.838,P=0.000),预测死亡的截断值为114 MFI,灵敏度和特异度为80.45%和58.23%。结论:CD14^(+)CD277^(+)单核-巨噬细胞、T细胞上PD-1水平与ARDS新生儿的预后有关,其水平较高,表明预后不佳,死亡风险较高。

佛波酯诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞的条件与机制研究进展

人类白血病单核细胞系THP-1细胞,已被广泛运用于研究单核细胞/巨噬细胞的生物学功能、作用机制和巨噬细胞参与炎症性疾病及肿瘤微环境的模型中。然而,影响THP-1分化为巨噬细胞的因素较多,如佛波酯(PMA)浓度、戒断期长度、PMA刺激持续时间、细胞的基线状态、细胞密度以及环境氧张力等。优化PMA诱导THP-1的分化方案不仅可以助力于实验研究,还可减少实验室之间的结果差异性。本综述旨在总结PMA诱导THP-1单核细胞分化条件的影响因素、优化方案,探讨其作用机制,为单核细胞分化为巨噬细胞的研究提供参考。

髋部骨折病人血浆线粒体DNA及组织巨噬细胞炎症蛋白1α、单核细胞趋化蛋白-1表达与髋关节功能恢复的关系

目的探讨髋部骨折病人血浆线粒体DNA(mtDNA)及股外侧肌组织巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平与术后肌肉萎缩、髋关节功能恢复的关系。方法2020年10月~2022年10月行手术治疗的髋部骨折病人86例,为髋部骨折组。同期选择行手术治疗的髋关节炎病人43例作为髋关节炎组。病人均术中留取外侧肌肉组织作为样本。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血浆mtDNA水平。酶联免疫吸附法检测术前血清中白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。免疫荧光法检测术前股外侧肌Ⅰ型、Ⅱ型肌纤维横截面积。蛋白免疫印迹法检测术前外侧肌肉组织MIP1α、MCP-1蛋白水平。髋部骨折病人术后均有效随访6个月,且在3、6个月时,采用DXA测定全身瘦组织质量(TLM)和健肢瘦组织质量(ULLM)。结果髋部骨折组术前血浆mtDNA水平为(4.12±0.53),高于髋关节炎组的(2.37±0.36),髋部骨折组血清IL-6水平为(34.68±6.14)pg/ml、TNF-α水平为(21.54±4.12)pg/ml,髋关节炎组分别为(12.74±3.06)pg/ml、(10.81±2.71)pg/ml,髋部骨折组外侧肌肉组织Ⅰ型肌纤维为(4321.45±441.36)μm^(2),Ⅱ型肌纤维横截面积为(2384.38±247.11)μm^(2),髋关节炎组分别为(5417.63±553.27)μm^(2)、(3569.24±368.22)μm^(2),髋部骨折组MIP1α蛋白水平为2.34±0.25、MCP-1蛋白水平为2.47±0.28,髋关节炎组分别为1.18±0.15、1.95±0.23,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。髋部骨折病人术后随访6个月后,预后良好53例,预后不良33例。预后不良组术前血浆mtDNA为4.53±0.52,高于预后良好组的(3.87±0.44),预后不良组血清IL-6水平为(35.97±5.32)pg/ml、TNF-α水平为(22.83±4.33)pg/ml,预后良好组分别为(33.51±5.16)pg/ml、(20.74±4.27)pg/ml,预后不良组外侧肌肉组织Ⅰ型肌纤维面积为(4174.26±434.60)μm^(2),Ⅱ型肌纤维横截面积为(2309.56±246.18)μm^(2),预后良好组分别为(4394.42±450.12)μm^(2)、(2430.97±250.72)μm^(2),预后不良组MIP1α蛋白水平为2.47±0.28,MCP-1蛋白水平为1.95±0.23,预后良好组分别为2.26±0.24、1.82±0.21,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组和预后不良组髋关节骨折病人术后6个月TLM和ULLM均小于术后3个月(P<0.05),但术后3、6个月两组TLM和ULLM比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论老年髋部骨折病人后发生创伤应激损伤,促使血浆mtDNA水平升高,进而诱导血清IL-6和TNF-α以及MCP-1、MIP1α炎症因子水平增加,加重肌肉萎缩,使得术后髋关节功能减退。

单核/巨噬细胞及EBV活化在药疹患者中的免疫状况初探

目的明确不同类型药疹(CDR)单核/巨噬细胞及其相关受体表达情况,明确EBV活化对药疹的影响。方法收集药疹患者和健康对照组,根据其临床表现分为发疹性药疹(MPE)组、重症多形红斑型药疹(SJS)/中毒性大疱表皮松解症(TEN)组、红皮病型药疹(EDE)组和对照组,分析血常规、血生化指标,及单核/巨噬细胞及其受体表达情况。再通过EBV刺激药疹患者及健康对照组外周血单个核细胞,根据EBV是否活化分析单核/巨噬细胞及其受体表达情况,对比分析各组人群的各项检测结果差异。结果本研究发现CDR患者出现巨噬细胞降低,HLA-DR升高;在EDE患者中嗜酸性粒细胞升高,M2/M1偏移,MPE和SJS/TEN患者出现ALT升高,M2/M1轻度偏移甚至不偏移。EBV活化后,CDR患者单核细胞和ALT发生升高,巨噬细胞轻度升高以及M2/M1偏移。结论①HLA-DR升高是药物致敏的评估指标之一;②不同药疹类型其发病机制不同,M2/M1偏移可作为药疹类型评价指标;③单核细胞及ALT升高应高度警惕EBV活化,M2/M1发生偏移是EBV活化的风险指标。