抗原递呈细胞表面共刺激分子CD80/CD86表达与自然流产的关系

目的 :探讨共刺激分子CD80 /CD86与自然流产的关系。方法 :采用双标记流式细胞分析技术检测自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/ 2脾脏及肠系膜淋巴结内 (MLN)抗原递呈细胞MΦ表面CD80 /CD86的表达情况 (n =10 ) ,以正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB /c为对照 (n =5 )。结果 :1、自然流产模型组脾脏内表达CD80MΦ含量为 1.82±0 .4 1% ,与正常妊娠模型组的 1.64%± 0 .61%差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而表达CD86MΦ含量在自然流产模型组中为 2 .34%± 0 .67% ,明显低于正常妊娠模型组的 5 .98%±2 .4 3% (P <0 .0 5 ) ;2、自然流产模型组MLN内表达CD80MΦ含量为 10 .2 0 %± 5 .4 2 % ,明显高于正常妊娠模型组 1.5 8%± 0 .70 % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而表达CD86MΦ含量在自然流产模型组中为 1.4 6%± 0 .5 7% ,明显低于正常妊娠模型组 3.96%± 0 .39% (P <0 .0 0 1)。结论 :抗原递呈细胞表面共刺激分子CD80

地塞米松刺激猪内皮细胞对猪单核源树突状细胞内源性抗原递呈分子表达水平的影响

【目的】为探究在地塞米松(DSMS)刺激下,猪血管内皮细胞(VEC)对单核源树突状细胞(MoDC)内源性抗原递呈分子的影响。【方法】DSMS刺激VEC的不同时间段内,分别检测IL-8的表达量,以筛选可以下调VEC中IL-8表达量的DSMS质量浓度。用此质量浓度的DSMS与内皮细胞、MoDC细胞共同培养,共培养方式分为诱导后共培养和诱导共培养。收集不同组的MoDC,使用多功能酶标仪检测下室细胞的平均荧光强度,判断MoDC的迁移能力;通过荧光定量PCR检测MoDC内源性抗原递呈分子,以分析DSMS对MoDC抗原递呈能力的影响。【结果】DSMS处理VEC后,两种共培养方式中MoDC的迁移能力没有发生显著变化;荧光定量PCR检测LMP7mRNA和MHC-ImRNA的表达量均显著增加。【结论】DSMS可下调IL-8的分泌,在其刺激下,PIEC与MoDC共同培养上调MoDCLMP7mRNA和MHC-ImRNA的表达水平,进而可能影响MoDC内源性抗原递呈能力。

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

采用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后不同时相猪肺泡巨噬细胞(PAM)中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DRI、i链和SLA-DM分子及共刺激分子CD40、CD80、CD86的mRNA转录动态进行了定量检测。结果表明,PRRSV感染后PAM的SLA-DR mRNA转录水平在3、7和14 d下调,低于对照组;感染后3 d,Ii链、SLA-DM和CD40的mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);CD80和CD86mRNA转录水平也在感染后3 d明显下调(P<0.05)。用流式细胞术检测PAM表面的SLA-DR抗原的结果表明,在感染后3 d短暂上升,7 d之后一直低于对照组。由此说明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增、克隆和鉴定

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４（ｈＣＤ１４）基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和３＇端的两个引物．以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术特异性扩增该基因１２４５加的编码序列．扩增产物经Ｘｂａｌ、ＫｐｎⅠ双酶切后，克隆到ｐＵＣ１８质粒ＸｂａＩ－ＫｐｎＩ位点间，随后转化大肠杆菌ＪＭ１０９．用ＰＣＲ方法筛选出重组菌落．经酶切和序列分析方法检测后，证明获得了含ｈＣＤ１４基因的重组克隆ｐＨＣＤ１４．巳测出的插入片段５＇端部分中包含着人ＣＤ１４基因４８８ｂｐ的序列，与巳报道的相应ＤＮＡ序列相比具有９９％的同源性．

类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响

采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.05);感染后8 d的SLA-DR和SLA-DM以及感染后17 d SLA-DM的mRNA的表达有下调趋势(P<0.1);感染后24 d的CD86 mRNA的表达呈上调趋势(P<0.1);感染后40 d的CD74 mRNA的表达显著下调(P<0.05)。结果揭示,类猪圆环病毒因子P1感染对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能有显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降及紊乱,进而使机体的体液免疫应答功能受到影响。

左旋咪唑刺激猪内皮细胞抑制单核源树突状细胞的抗原递呈功能

【目的】研究左旋咪唑(LMS)刺激的猪内皮细胞(VEC)对单核源树突状细胞(MoDC)的抗原递呈功能的影响。【方法】通过LMS刺激猪血管内皮细胞后,筛选出能够使内皮源IL-8表达量上调的低质量浓度LMS(10^(-6) mg/mL),将经LMS处理的内皮细胞与MoDC共培养,收集共培养的MoDC。流式细胞术检测MoDC的CD80/86和MHC-II的表达;丝裂霉素C处理后的MoDC与淋巴细胞混合,MTS法和流式细胞术分析MoDC抗原递呈和对淋巴细胞转化的影响。共培养分为诱导后共培养和诱导共培养。【结果】LMS处理VEC后,两种共培养方式所得MoDC的MHC-II与CD80/86阳性率、淋巴细胞刺激指数、Tc和Treg细胞阳性率均显著下调,而Th细胞阳性率和CD4^+/CD8^+比值显著上调。【结论】低浓度LMS处理的VEC可抑制MoDC的抗原递呈能力。

用定量荧光微球作对照的流式细胞术对细胞表面抗原分子数的测定

定性、定位和定量地确定细胞表达的各种重要分子是在分子水平上认识细胞功能的前提,其中以确定特定分子在细胞膜表面的绝对数目较为困难。

佛波酯对猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的作用及有关信号机制研究

【目的】研究佛波酯诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1表达的作用及有关信号机制。【方法】采用密度梯度离心法分离纯化猪外周血中性粒细胞,以流式细胞术检测中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1表达,分别以实时荧光定量PCR、Western Blot法检测信号蛋白p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调控激酶的基因表达和磷酸化活性。【结果】20、30 nmol/L的佛波酯能极显著促进猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的表达(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在0.5、6 h可明显增加猪中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶的基因表达量(P<0.05,P<0.01);在0.5、3和6 h可极显著增加猪中性粒细胞胞外信号调控激酶的基因表达量(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在1、5和30 min可极显著促进p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化活性(P<0.01);在0.5、1、5和30 min可明显促进胞外信号调控激酶磷酸化活性(P<0.05,P<0.01)。【结论】佛波酯能诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1的表达,其机制至少与上调p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调控激酶的基因表达与磷酸化活性有关。

上皮细胞黏附分子和滋养层细胞表面抗原2在大鼠梗阻性肝损伤动物模型中的研究

目的探讨上皮细胞黏附分子(EpCAM)及滋养层细胞表面抗原2(TROP2)与大鼠梗阻性肝组织损伤进程的关系。方法 48只实验大鼠分对照组、结扎组和再通组3组,各16只。对照组行开关术,结扎组行硅胶管置入胆管结扎术,再通组硅胶管置入胆管结扎术后7 d行再通。观察3组血清酶学变化、大鼠胆管结扎及再通前后肝脏形态组织学改变以及EpCAM和TROP2的表达分布情况。结果结扎组中EpCAM和TROP2含量随结扎时间延长,其阳性细胞比率逐渐上升,而再通组中EpCAM和肝损伤组织变化进程不完全一致。结论 EpCAM可作为判断梗阻性肝损伤中损伤进程的指标,而TROP2与梗阻性肝损伤中修复进程密切相关。

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠NK细胞表面分子表达及其活性的影响

目的探讨合成的含CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)与重组乙型肝炎病毒表面抗原(rHBsAg)联合免疫小鼠对NK细胞表面标志NK1.1表达情况及其细胞毒活性的影响。方法采用C57BL/6小鼠,经后腿胫骨前肌免疫2次,FACS检测脾细胞NK1.1表面分子的表达,生物活性法测定脾脏NK细胞的细胞毒活性。结果各实验组间NK细胞表面标志NK1.1的表达差异无显著意义;加CpG ODN各组与相应未加CpG ODN组比较对靶细胞的杀伤活性显著增强,且各组与对照组比较杀伤活性差异均具有显著意义。结论CpG ODN对免疫小鼠NK细胞表面分子NK1.1的表达无明显影响,而对其细胞毒活性具有明显的增强作用,显示CpG ODN具有潜在的免疫佐剂效应。

CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制

目的:探讨抗CⅡTA核酶对肝细胞表面MHCⅡ类分子表达的抑制作用。方法:设计并克隆针对CⅡTA第134、218及464位点的核酶(分别为Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性筛选。将切割作用明显的Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP(pIRES2-EGFP-Rz464,pRz464)进行细胞内切割分析。pRz464稳定转染人胎肝细胞,流式细胞术检测MHCⅡ(HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ)类抗原表达,RT-PCR分析CⅡTAmRNA水平。结果:pRz464肝细胞表面HLA-DR、HLA-DP、HLA-DQ的诱导型表达分别为(1.01±0.51)%、(4.37±1.28)%和(1.98±0.42)%,与对照组比较分别下调90.65%、89.11%及65.32%;同时CⅡTA的诱导型mRNA含量明显减少(P<0.01)。结论:抗CⅡTA核酶-Rz464降低了CⅡTA的mRNA含量,从而阻止其调控的MHCⅡ类分子的表达。

细胞表面抗原的定量测定方法

介绍了用流式细胞仪定量测定细胞表面抗原的方法 ,测定了淋巴细胞表面CD4分子的数量。该法操作简单 ,结果可靠。

B细胞免疫突触在抗原捕获、加工和递呈过程中的作用

B细胞具有捕获外部抗原的能力，B细胞将其捕获的外部抗原在抗原加工区室中降解成肽段，然后抗原肽与进入区室的MHCⅡ类分子结合，表达于B细胞表面并提呈给CD4＋T细胞，这是适应性免疫反应过程的一个关键性步骤。 B细胞与T细胞之间的这种联系被称为T、B细胞的合作［1］，这个过程B细胞形成生发中心，并且分化为能够产生亲和力更高的的浆细胞，同时发展成为记忆性B 细胞亚群。B细胞通过MHCⅡ类分子对抗原进行递呈的过程是十分复杂的，主要涉及以下几个阶段：第一，B细胞可通过B细胞抗原受体（ BCR）识别并捕获外部抗原；第二，捕获后的抗原在B细胞的抗原加工室中被降解为肽段，然后被降解的肽段与MHCⅡ类分子结合；第三， MHCⅡ类分子与肽段的复合物将表达于B细胞表面并提呈给CD4＋T细胞，见图1。

基于分子对接和表面等离子共振技术分析虾青素与跨膜转运蛋白CD36的结合作用

目的:探究虾青素与跨膜转运蛋白白细胞分化抗原36(cluster determinant 36,CD36)的结合作用。方法:采用分子对接技术模拟虾青素与CD36的结合作用,结合算法获得相互作用参数,确定结合位点,建立最佳匹配模型。同时,利用表面等离子共振技术测定分子间相互作用的结合和解离常数。结果:虾青素进入CD36内部的疏水腔中,对接结合能为-11.70 kcal/mol,且呈剂量依赖性结合,解离平衡常数KD为1.00×10^(-6) mol/L,表明虾青素与CD36以高亲和力结合,且动力学曲线显示虾青素与CD36的结合模式为慢结合慢解离;虾青素与CD36更多的氨基酸结合形成疏水相互作用,不同于叶黄素和β-胡萝卜素与CD36的极性氨基酸Asn53形成弱的范德华力,虾青素与天冬酰胺Asn53形成氢键作用,可能是虾青素以高亲和力结合CD36的部分原因,同时推断虾青素末端环上的酮基或羟基与酮基形成的α-羟基酮对于形成氢键起一定作用。结论:虾青素与CD36发生自发的相互作用且以高亲和力结合,结合模式为慢结合慢解离,从而实现有效的跨膜转运。

胸腺肽α1对烫伤延迟复苏大鼠单核细胞Ia抗原的影响

目的:研究烫伤延迟复苏后大鼠单核细胞表面Ia抗原变化规律及应用胸腺肽α1对单核细胞表面Ia抗原的影响。方法:将104只成年雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、单纯烫伤组(48只)和胸腺肽α1治疗组(48只)。正常对照组不作烫伤处理;其它组均造成30%TBSAⅢ度烧伤延迟复苏模型。分别于6h、1d、2d、3d、7d和14d处死动物,取血分离单核细胞,流式细胞仪检测Ia抗原表达率。结果:大鼠烫伤延迟复苏后单核细胞Ia抗原表达率降低,其中6h、和1d时间点Ia抗原表达率严重降低,3d、7d和14d时间点开始有所恢复,但明显低于正常大鼠(P均<0·01)。给予胸腺肽α1后3d、7d和14d时间点单核细胞Ia抗原表达率与单纯烫伤组比较明显提高(P均<0·01)。结论:严重烧伤延迟复苏后,单核细胞抗原递呈功能减弱,免疫功能障碍。胸腺肽α1作为一种免疫增强剂可明显改善烧伤延迟复苏后单核细胞抗原递呈功能。

牛膝根多糖上调单核细胞免疫功能实验

目的:研究牛膝根多糖(ABPS)在体外对单核细胞活性的调节及诱导单核细胞HLA-DRα表面分子的表达。方法:贴壁法分离培养外周血单核细胞并进行鉴定。ABPS诱导单核细胞后,用电镜技术、中性红实验、四甲基偶氮唑盐(MTT)法分别检测单核细胞超微结构、吞噬能力、增殖的改变;并且用流式细胞术检测单核细胞HLA-DRα表面分子表达水平。结果:ABPS能诱导单核细胞胞浆溶酶体和胞浆量增多、吞噬能力增强,但没有增殖能力;同时上调单核细胞HLA-DRα表面分子的表达。结论:ABPS能增强单核细胞活性,上调单核细胞HLA-DRα表面分子的表达,提示ABPS有增强单核细胞的抗原呈递功能。