关于糖尿病患者采用沙格列汀与金芪降糖片治疗对其单核细胞NF-κB表达产生的影响

目的探讨糖尿病患者采用沙格列汀与金芪降糖片治疗对其单核细胞NF-κB表达产生的影响。方法 158例糖尿病患者,随机分为观察组和对照组,每组79例。观察组给予沙格列汀治疗,对照组给予金芪降糖片治疗。比较两组临床疗效。结果观察组治疗后中性粒细胞(N)、白细胞计数(WBC)、空腹血糖(FPG)以及餐后2 h血糖(2 h PG)、单核细胞NF-κB变化情况均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组25例显效,29例有效,25例无效,总有效率为68.4%;对照组16例显效,19例有效,44例无效,总有效率为44.3%,观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组出现2例腹泻,对照组出现1例腹泻以及1例消化不良,均为轻度不良反应,两组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论沙格列汀与金芪降糖片治疗对糖尿病患者单核细胞NF-κB表达都产生一定的影响,其中沙格列汀疗效更佳。

UCHL1调控NF-κB信号通路在单核细胞驯化免疫中的作用

目的探究去泛素化酶在单核细胞驯化免疫中的作用及机制。方法Q-PCR检测单核细胞驯化免疫中去泛素化酶相关基因的表达情况;ELISA法检测去泛素化酶对驯化的单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响;双荧光素酶报告基因检测系统测定去泛素化酶对NF-κB信号通路的影响。双荧光素酶报告基因检测系统测定:UCHL1对NF-κB信号通路的影响、UCHL1与NF-κB信号通路关键信号分子之间的作用及UCHL1影响NF-κB信号通路所依赖的酶活性;ELISA法检测UCHL1对单核细胞驯化作用中TNF-α分泌水平的影响。结果去泛素化酶USP2、UCHL1、OTUB2和OTUD4在单核细胞驯化免疫中的表达量明显升高;去泛素化酶抑制剂可明显抑制驯化单核细胞中TNF-α的分泌水平;USP2、UCHL1、OTUB2、PSMD14等可明显激活NF-κB信号通路,通过上述实验筛选出对NF-κB影响最为明显的UCHL1进行后续研究。UCHL1的表达明显影响NF-κB信号通路的激活;UCHL1的表达促进了由IκB-α、IKK-α或IKK-β介导的NF-κB的激活;UCHL1主要通过其泛素水解酶活性调控NF-κB信号通路;UCHL1抑制剂可明显减弱单核细胞的驯化作用。结论自身免疫病中免疫复合物可以驯化单核细胞增强其敏感性,这种作用可通过UCHL1调节NF-κB信号通路的激活实现。

胆红素对新生儿脐血单核细胞NF-κB表达的影响

目的探讨胆红素对新生儿脐血单核细胞(CBMC)核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法选择10例健康足月新生儿作为研究对象,收集脐血,采用明胶/自体血浆贴壁法(gelatin/plasmacoatedflasks)分离CBMC。经含有不同浓度胆红素的牛血清白蛋白溶液孵育1h,再给予脂多糖(LPS)刺激培养细胞,收集单核细胞。采用间接免疫荧光法,观察CBMCNF-κB的活化水平。结果 LPS可促进CBMCNF-κB的活化,而胆红素对其有抑制作用,6mg/dl浓度的胆红素单独即可抑制CBMCNF-κB的活化。先经不同浓度(2.5mg/dl、6mg/dl、9mg/dl、12.9mg/dl、18mg/dl)胆红素孵育,CBMCNF-κB的活化受到不同程度的抑制;再接受LPS刺激,低浓度(2.5mg/d和6mg/dl)胆红素孵育后的CBMCNF-κB的活化可以恢复,高浓度(12.9mg/dl和18mg/dl)胆红素孵育后的CBMCNF-κB的活化仍然受抑制,当胆红素浓度由12.9mg/dl上升至18mg/dl时,CBMCNF-κB的活化受抑制程度的差异,没有统计学意义。随着胆红素浓度的升高,这种抑制作用越明显。结论胆红素可以通过抑制CBMCNF-κB的活性影响单核细胞的免疫功能。

脂多糖对2型糖尿病肾病患者单核细胞TLR4水平及NF-κB,Notch1表达的影响

目的:探讨2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor,TLR4)的表达及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对其的影响,以了解炎症性免疫反应在DN中的可能作用机制。方法:收集30例2型DN尿毒症患者,10例早期2型DN患者和20例健康志愿者。采用外周血流式细胞术检测单核细胞TLR4的表达,并分离其外周血单个核细胞(PBMC),用LPS干预24 h,收集PBMC和上清液。分别采用Western印迹检测PBMC内TLR4,NF-κB p65和Notch1蛋白表达;免疫荧光检测NF-κB p65蛋白表达。ELISA法检测外周血血清及LPS干预后细胞上清液IL-6浓度。免疫比浊法检测血清CRP水平。结果:2型DN患者外周血单核细胞的TLR4荧光强度值、IL-6和CRP水平均高于正常对照组[TLR4荧光强度值:2型DN尿毒症患者2.8±0.9、早期2型DN患者3.4±0.7、正常对照组1.6±0.7;IL-6:2型DN尿毒症患者(84.8±20.7)pg/mL、早期2型DN患者(63.20±14.4)pg/mL、正常对照组(11.0±2.0)pg/mL;CRP:2型DN尿毒症患者(5.4±2.8)mg/L;早期2型DN患者(3.7±1.7)mg/L、正常对照组(1.7±0.7)mg/L,均P<0.01],LPS干预后2型DN患者PBMC的TLR4,NF-κB P65蛋白表达和IL-6水平明显高于正常对照组(P<0.05),早期2型DN患者PBMC以上指标水平均高于DN尿毒症患者,且2型DN患者NF-κB p65的表达存在核转移现象,但与正常对照组比较Notch1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DN患者体内可能存在单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,与Notch1信号通路无关。

蜱传脑炎病毒感染小鼠脑组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、CD68和核因子κB(NF-κB)表达增加

目的探讨蜱传脑炎病毒(TBEV)感染小鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、CD68和核因子κB(NF-κB)表达情况。方法1周龄BALB/c小鼠8只,随机分为对照组和感染组,分别进行PBS或TBEV颅内注射。感染8 d后处死取一半脑组织固定,HE染色检测脑组织病理改变;免疫组织化学染色法检测小鼠大脑MCP-1、NF-κB和CD68的表达,镜下观察并统计阳性细胞数量;免疫荧光化学染色法结合激光扫描共聚焦显微镜观察MCP-1和CD68的共表达情况。结果与对照组相比,TBEV感染后小鼠脑组织MCP-1、NF-κB和CD68阳性细胞数均显著增加,MCP-1在CD68阳性及非阳性细胞中均有表达。结论TBEV感染小鼠CD68、NF-κB、MCP-1表达增强。

凉血消风汤对血热型银屑病患者外周血单核细胞NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨凉血消风汤对血热型银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)中核因子(NF)-κB通路表达的影响。方法设立正常对照组和银屑病组,银屑病组给予凉血消风汤治疗4周。记录治疗前后银屑病患者银屑病皮损面积与严重性指数(PASI)评分以观察临床疗效。采集正常组及银屑病组治疗前后外周血,经密度梯度离心法获得PBMC。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定PBMC中NF-κB通路蛋白IKKβ、IκBα、p50、p65的基因表达水平。用蛋白质印迹法(Western blot)检测PBMC中IKKβ、p-IκBα、p50、p-p65的蛋白表达水平。结果银屑病患者经凉血消风汤治疗前后比较,PASI评分降低(P<0.05);与正常对照组比较,银屑病组治疗前PBMC中NF-κB相关蛋白的基因和蛋白表达水平均升高(P<0.05),与银屑病组治疗前比较,银屑病组治疗后NF-κB相关蛋白的基因和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论凉血消风汤能降低血热型银屑病患者PBMC中NF-κB通路蛋白的基因和蛋白表达水平,抑制NF-κB通路的活化,是其发挥治疗银屑病作用的机制之一。

肾康丸通过p38/NF-κB通路抑制AOPP诱导的足细胞炎症因子MCP-1的表达

目的探讨肾康丸含药血清对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导的体外培养足细胞(MPC5)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响及其机制。方法制备肾康丸含药血清和AOPP;体外培养MPC5,用不同浓度的肾康丸含药血清刺激不同时间,MTT法检测细胞增殖;用肾康丸含药血清干预AOPP处理的MPC5,Western blot法检测p38MAPK、IκBα蛋白表达,免疫荧光法观察NF-κB p65核转移,ELISA法检测细胞培养上清中MCP-1表达。结果 (1)肾康丸含药血清呈时间和浓度依赖性促进MPC5增殖,最佳作用浓度和时间分别是5%、24 h;(2)AOPP呈浓度和时间依赖性诱导MPC5分泌MCP-1;p38抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂小白菊内酯预孵育能使细胞上清中MCP-1分泌减少;肾康丸含药血清能抑制AOPP诱导MPC5分泌MCP-1;(3)AOPP以浓度依赖的方式增加P-p38蛋白的表达、降低IκBα蛋白的表达;与AOPP组相比,AOPP+肾康丸组MPC5 IκBα蛋白表达增加;AOPP+SB203580组IκBα蛋白表达亦增加,但不及AOPP+肾康丸组;(4)肾康丸含药血清减少AOPP诱导的NF-κB p65核转移。结论肾康丸含药血清能通过p38MAPK/NF-κB途径下调MCP-1表达而发挥抗炎作用,为应用其防治糖尿病肾病提供了新的理论依据。

NF-κB/IκB在二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡中的表达变化

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对核因子κB(NF-κB)、NF-κB抑制因子(IκB)基因表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、H2O2组、TSG组,采用Ho-echst 33258染色观察细胞凋亡形态,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB与IκB mR-NA表达,Western blot检测NF-κB p65、IκB蛋白表达。结果与对照组比较,H2O2组凋亡细胞数增多,细胞凋亡率增加,细胞增殖降低;NF-κB mRNA和蛋白表达增加,IκB mRNA和蛋白表达降低,差异均有显著性(P<0.01)。经TSG预处理后,细胞的增殖率较H2O2组增加,细胞凋亡率减少;NF-κBmRNA和蛋白表达减少,IκB mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。结论二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调节NF-κB/IκB表达有关。

大鼠脑缺血再灌注损伤后NF-κB蛋白、Caspase3 mRNA表达及细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后核蛋白因子 κB(NF κB)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase3)mRNA表达及细胞凋亡的变化。方法 采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型 ,应用免疫组化、原位杂交法检测NF κB蛋白、Caspase3mRNA的表达 ,利用原位缺口末端标记法 (TUNEL)研究凋亡细胞的变化。结果 与假手术大鼠相比 ,脑缺血再灌注后NF κB蛋白、Caspase3mRNA表达明显增强 ;凋亡细胞显著增多 (P <0 .0 1)。结论 大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤引发的神经细胞凋亡可能是与上调NF κB蛋白、Caspase3mR NA表达有关。

单核细胞趋化因子-1与核因子-κB在溃疡性结肠炎模型的表达

目的研究单核细胞趋化因子-1(MCP-1)与核转录因子-κB(NF-κB)在溃疡性结肠炎(UC)模型中的表达。方法采用SP免疫组织化学方法对雄性SD大鼠UC模型组及正常对照组各30例标本中MCP-1、NF-κB的表达进行检测。结果MCP-1主要表达于胞浆,NF-κB主要表达于胞浆及胞核。UC模型组结肠组织中的MCP-1及NF-κB的表达明显高于正常对照组(P<0·001)。UC模型组结肠组织中MCP-1与NF-κB的表达呈正相关(r=0·87,P<0·05)。结论MCP-1与NF-κB在UC结肠组织中的高表达密切相关。两者的高表达在UC发生发展中具有重要作用。

川芎嗪对平滑肌细胞NF-κB激活、骨形成蛋白-2表达的影响

目的 观察川芎嗪对血管平滑肌细胞核转录因子 kappaB (NuclearFactor kappaB ,NF κB)的激活与骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogenicprotein 2 ,BMP 2 )表达的影响。方法 贴块法培养血管平滑肌细胞 ,分为正常对照组 ,血管紧张素Ⅱ (AngiotensinⅡ ,AgⅡ )刺激组和川芎干预组。各取 15、 30、 6 0min测NF κB激活情况 ,6、 12、 2 4h测BMP 2表达变化。采用免疫组化及原位杂交法测蛋白表达和mRNA转录水平。结果 (1)AgⅡ刺激 15min即有NF κBp6 5核转移 ,30min达高峰 (P <0 0 1) ,1h后减退。川芎干预组NF κB激活与正常组无差异。 (2 )AgⅡ刺激 6hBMP 2表达增强 (P <0 0 5 ) ,12h减弱 (P <0 0 1) ,2 4h更弱。川芎干预组 6hBMP 2表达亦增强 ,12h与 2 4h保持正常水平。结论 川芎嗪抑制AgⅡ诱导的NF κB激活与BMP 2表达降低 ,表明它在抗动脉粥样硬化方面意义重大。

复方中药制剂对肿瘤细胞NF-κB表达及凋亡影响的实验研究

目的 :本文探讨了应用中药制剂扶正抑瘤颗粒对肿瘤细胞的NF -κB表达和凋亡率的影响。方法 :采用流式细胞技术。结果 :使用药物后 ,治疗组NF -κB表达和凋亡率明显升高 ,与模型组比较有显著性差异 (P <0 0 0 1)。扶正抑瘤颗粒大剂量组与阳性对照药物相比较也有显著性 (P <0 0 1)。结论 :复方中药制剂扶正抑瘤颗粒可促进NF -κB表达和肿瘤细胞凋亡 ,具有抑制肿瘤作用。

经皮冠状动脉内支架植入术对外周血单核细胞NF-κB活性的影响

目的:探讨经皮冠状动脉内支架植入术是否激活外周血单核细胞(PBMCs)中核因子κB(NF-κB)活性的表达.方法:选择NF-κB基线时呈阴性反应的稳定型心绞痛患者50例,其中单纯造影组22例,支架治疗组28例.分别于冠脉造影或支架术后4h及术后第1,2,3d留取全血抗凝标本;采用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)测定PBMCs中NF-κB的活性.结果:支架术程中NF-κB活性呈动态变化,于术后1dNF-κB活性显著性升高呈阳性反应,术后2dNF-κB活性达峰值,术后3dNF-κB活性有下降,但仍保持在高水平表达状态.而造影组患者则没有NF-κB活性变化.结论:冠状动脉内支架术激活外周血单核细胞NF-κB活性.

NF-κB在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨NF-κB基因在肝细胞癌组织中的表达及生物学意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、W estern-blot免疫组织化学技术检测3 2例肝癌组织及癌旁肝组织中的NF-κB基因的mRNA和蛋白表达水平及蛋白定位。结果NF-κB基因在肝癌组织中的表达较癌旁肝组织显著性增高(P<0.0 5)。免疫组化结果显示,NF-κB蛋白在肝癌细胞胞浆和胞核中均有表达,而在癌旁肝细胞中仅在胞浆中有表达。结论NF-κB基因在肝癌组织中呈显著高表达,提示其可能参与了肝癌的发生发展。NF-κB表达定位在癌细胞和癌旁肝细胞中的差异,提示NF-κB活化后,进入胞核,通过调节下游基因的转录,促进肝癌的发生。

丙泊酚对缺血-再灌注心肌细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究丙泊酚对大鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡及核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法24只SD雄性大鼠,随机分为缺血-再灌注组(A组),丙泊酚组(B组)和对照组(C组),每组8只。制备缺血-再灌注损伤(A组)和丙泊酚(B组)的大鼠模型,采用末端标记技术(TUNEL)检测凋亡的心肌细胞,应用免疫组织化学方法检测NF-κB的表达。结果B组大鼠心肌细胞凋亡指数及心肌组织中NF-κB的表达明显低于A组(P<0.01),但明显高于对照组(P<0.01)。结论丙泊酚具有明显降低大鼠缺血-再灌注后心肌细胞的凋亡,可能与丙泊酚减轻缺血-再灌注心肌组织过度表达NF-κB有关。

核因子-κB在痂下水肿液诱导单核细胞表达细胞因子过程中的作用

目的:了解核因子κB(NF-κB)活化在烧伤患者痂下水肿液(STF)诱导单核细胞分泌细胞因子中的作用,探讨STF激活单核细胞的细胞信号转导机制。方法:收集烧伤患者痂下水肿液和体外培养的人外周血单核细胞(PBMCs),分别用正常人血清、烧伤患者STF、烧伤患者STF+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激PBMCs(依次分为对照组、STF组、STF+PDTC组)。电泳迁移率分析法检测单核细胞NF-κB活性;酶联免疫吸附测定法检测PBMCs培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)8含量。结果:刺激PBMCs后0.5 h,STF组NF-κB活性迅速升高,0.5 h达(32.23±4.12)×104积分灰度值,1 h达(36.44±5.01)×104积分灰度值,达高峰值,与对照组比较差异非常显著(P<0.01),刺激2 h后NF-κB活性逐渐回复基础状态;STF刺激PBMCs后1h,细胞培养上清液TNF-α含量即升高达峰值,明显高于对照组(P<0.01);上清液中IL-8含量在刺激后4 h达峰值,也明显高于对照组(P<0.01)。STF+PDTC组较STF组NF-κB活性、培养上清液中TNF-α和IL-8含量也明显降低(P<0.01)。结论:STF可通过活化NF-κB,从而刺激PBMCs对细胞因子的合成和释放,提示NF-κB活化在STF诱导PBMCs分泌细胞因子过程中起重要作用。

云芝多糖B抑制ox-LDL诱导巨噬细胞株单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达的调控机制

目的:探讨云芝多糖(CVPS)-CVPS-B对氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞(RAW264.7)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响,及对核因子-κB(NF-κB)和细胞内谷胱甘肽(GSH)的调控作用。方法:应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定RAW264.7细胞MCP-1mRNA的表达;凝胶滞留法(EMSA)测定NF-κB的结合活性;荧光分光光度法测定细胞内GSH的活性。结果:CVPS-B呈剂量依赖性抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞MCP-1mRNA的表达。应用GSH特异性消耗剂buthionine-[S,R]-sulfoximine(BSO),ox-LDL不能诱导RAW264.7细胞MCP-1mRNA的表达。CVPS-B抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞内GSH活性下降。CVPS-B呈剂量依赖性抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞NF-κB活性;在完全消耗GSH的RAW264.7细胞,ox-LDL不能诱导NF-κB的活性。结论:CVPS-B可抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞MCP-1mRNA的表达;其抑制作用可能通过GSH/NF-κB的调控。

NF-kB在肝癌细胞株SMMC-7721中的表达及意义

目的 了解NF -kB和ⅠkB在肝癌细胞中的表达情况及意义。方法 通过RT -PCR和Westernblot方法研究NF -kB和ⅠkB在肝癌细胞和正常肝细胞中的mRNA和蛋白表达的变化情况。结果 在肝癌细胞株SMMC -772 1中P65、P5 0mRNA表达增强而ⅠkBmRNA表达下降 (P <0 0 1) ;Westernblot结果显示肝癌细胞株SMMC -772 1细胞的胞核中P5 0、P65蛋白高水平表达 ,而正常肝细胞仅检测出极低水平的P5 0、P65蛋白 ,但是在SMMC -772 1细胞的胞质中ⅠkB蛋白低水平表达 ,正常肝细胞高水平表达。结论 肝癌细胞株SMMC -772 1中NF -kB的P5 0、P65亚基表达升高、ⅠkB表达下降与肿瘤细胞的生长密切相关。

SIRT1对高糖诱导的系膜细胞NF-κBp65乙酰化及MCP-1表达的影响

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(RMC)核因子κB(NF-κB)p65蛋白乙酰化及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法构建干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒质粒pTRCshSIRT1并进行鉴定。将RMC分为高糖组(用高糖培养液培养)、白藜芦醇(SIRT1激活剂)+高糖组(用含1μmol/L白藜芦醇的低糖培养液培养24h后,换用高糖培养液培养)、SIRT1RNAi组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用低糖培养液培养)、SIRT1RNAi+高糖组(添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4h后,换用高糖培养液培养),同时设正常对照组和甘露醇高渗对照组。以实时荧光定量PCR检测SIRT1、MCP-1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达,ELISA技术检测MCP-1蛋白含量。结果质粒测序证实干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,且能抑制RMC中SIRT1基因表达(P<0.01)。高糖刺激使RMC SIRT1基因表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化增强,MCP-1mRNA和蛋白水平增高;SIRT1激活剂白藜芦醇可逆转高糖引起的变化;而沉默SIRT1可促进高糖诱导的RMC NF-κB p56乙酰化及MCP-1mRNA和蛋白表达(P<0.05或0.01)。结论 SIRT1可抑制高糖诱导的RMC MCP-1表达,其机制可能与NF-κB p56去乙酰化有关。